miR-146在湿性ARMD中抑制IL-6表达的研究

目的:探讨miR-146表达与眼球衰老的相关性,以及年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,ARMD)发生过程中miR-146与炎症因子表达的相关性及其可能的机制.方法:分离鼠龄为2~24mo的小鼠RPE,采用qRT-PCR的方法检测RPE中miR-146 a/b和IL-6 mRNA的表达水平.检测来自于ARMD患者眼球中miR-146 a及IL-6 mRNA的表达水平.在ARPE-19细胞系中检测miR-146 a过表达对IL-6基因表达水平的影响.结果:miR-146的表达在自然衰老的小鼠RPE中与年龄呈现正相关,而IL-6无变化.在ARMD患者中,miR-146 a mRNA表达水平下降,IL-6 mRNA表达水平上升.在人ARPE-19细胞中的实验表明,miR-146 a过表达抑制了由TNF-α所诱导的IL-6的表达.结论:在湿性ARMD中,miR-146a与IL-6 mRNA表达水平有可能与ARMD的发生呈相关性,暗示IL-6和miR46 a有可能作为生物分子标志物在未来的ARMD诊断中发挥作用.     

MicroRNA对老年性黄斑变性中血管紧张素Ⅱ1型受体的调控机制

目的：研究AMD患者的RPE细胞中微小RNA miR-410对血管紧张素受体Ⅱ的1型受体(AT1R)的调控效应。

方法：实验分为AMD组、白内障组和正常组,运用生物信息学预测出AT1R是miR-410的靶基因,将正常的RPE细胞模拟AMD和白内障的微环境进行培养,检测其中miR-410的表达量,进一步将miR-410 mimics转染入细胞中,分别运用Q-PCR和Western blot的方法检测AT1R mRNA和蛋白的表达量,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-410与AT1R的相互作用关系。

结果：AMD组与白内障组和正常对照组相比,RPE细胞中的miR-410表达量显著降低(P=0.0006,0.0008),双荧光素酶报告基因实验表明,miR-410对AT1R具有明显的调控作用,且miR-410 mimics的下调效率大致为40%左右。细胞实验显示miR-410对AT1R的mRNA和蛋白表达的抑制率约为40%～50%。

结论：AT1R是miR-410的靶基因,且在AMD的RPE细胞中提高miR-410的表达可以抑制AT1R的表达。     

miR-126与眼科疾病的研究进展

目前,在大量研究中已发现多种microRNA分子,它们在视网膜神经上皮、晶状体、角膜和视网膜色素上皮中均有特异性表达.其中miR-126在肿瘤细胞的增殖、胸腺淋巴细胞的发育、心血管疾病中发挥一定的作用.有些实验表明miR-126与角膜新生血管的形成、糖尿病视网膜病变的发展及免疫系统相关的眼科疾病均有一定的相关性.本文就当前miR-126在眼科疾病中的作用机制及研究进展作一综述.     

miR-455在原因不明复发性流产病人绒毛组织中表达及意义

目的 探讨miR-455在原因不明复发性流产(URSA)病人绒毛组织中表达及意义.方法 72例URSA病人根据自然流产次数分为2~3次者(n=45)和≥4次者(n=27),同期,选取要求终止妊娠的正常早孕者40例作为对照组,留取绒毛组织,利用实时荧光定量PCR技术检测绒毛组织中miR-455、血管内皮生长因子(VEGF)和可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)基因表达,免疫组化SP法检测绒毛组织中微血管密度(MVD).结果 URSA病人绒毛组织中miR-455和sFlt-1 mRNA表达量均高于对照组,而VEGF mRNA表达量低于对照组,URSA中2~3次者miR-455和sFlt-1 mRNA表达量均低于≥4次者,而VEGF mRNA表达量高于≥4次者,均差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,URSA病人绒毛组织中MVD为(9.9±3.2)条,低于对照组的(21.5±3.8)条,URSA中2~3次者绒毛组织中MVD为(13.4±3.1)条,高于≥4次者的(7.2±2.4)条,均差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析显示,URSA病人绒毛组织中miR-455表达量与VEGF mRNA表达量和MVD均呈负相关(r=-0.452、-0.433,P<0.05),而与sFlt-1 mRNA表达量呈正相关(r=0.539,P<0.05).结论 miR-455在URSA病人绒毛组织中呈高表达,且与sFlt-1表达呈正相关,与VEGF表达和MVD均呈负相关,提示可能通过促进sFlt-1表达而抑制VEGF信号通路活性,从而抑制绒毛组织中血管新生.     

基于抑郁模型大鼠miR-665表达及靶基因功能分析探讨开心解郁方抗抑郁疗效机制

摘 要：目的：检测中药开心解郁方干预抑郁症模型大鼠过程中海马miR-665表达变化并对miR-665的靶基因进行生物信息分析,探讨miR-665在抑郁症的发病及开心解郁方抗抑郁机制中的作用。方法：建立慢性应激抑郁症大鼠模型并用开心解郁方干预42天,取海马组织提取总RNA,采用RT-qPCR检测各组大鼠海马miR-665相对表达量,采用TargetScan和microRNAorg数据库对miR-665进行靶基因预测,采用DAVID数据库对预测得到的靶基因进行GO功能富集分类及KEGG信号通路分析。结果：与正常组比较,模型组大鼠海马miR-665表达水平显著增高,差异具有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组及西药组大鼠海马miR-665表达水平显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。miR-665靶基因的生物学功能主要富集于有机物质反应等;信号通路主要富集于N-糖链的合成等。结论：miR-665可能参与了抑郁症病理机制过程调控,通过改善其表达异常可能为开心解郁方的抗抑郁机制之一,通过对其靶基因的功能预测分析对于后期继续研究开心解郁方干预miR-665的具体作用机制提供了方向和理论基础。     

miRNA-27b对人星状细胞系脂代谢与迁移能力的影响

目的探讨在人肝星状细胞系中miR-27b基因表达异常对LX-2细胞的脂滴沉积与迁移能力的影响。方法转染干预miR-27b的表达,油红染色与划痕实验检测LX-2细胞的脂滴沉积与迁移能力,荧光定量PCR检测靶基因RXRa的表达。结果 miR-27b在人肝星状细胞系LX-2细胞活化过程中表达升高,miR-27b的模拟物可以促进LX-2细胞的迁移、减小胞质内脂滴沉积;相反,miR-27b抑制物可以减弱LX-2细胞的迁移,增加胞质内脂滴沉积。荧光定量PCR结果显示RXRa在转染miR-27b模拟物表达降低,抑制物无明显变化。结论上调miR-27b的表达可能是通过靶基因RXRa促进LX-2细胞的迁移,减少细胞胞质内的脂滴沉积。     

循环miRNA-141对前列腺癌的诊断和预后价值研究

目的:研究血清miR-141在前列腺癌中的表达及临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR检测75例前列腺癌和52例良性前列腺增生（BPH）患者,以及40例健康对照血清miR-141的相对表达水平。结果:前列腺癌血清miR-141的表达量较BPH和健康对照增高,差异有统计学意义（P＜0.01）。但miR-141在BPH组和对照组中的表达差异无统计学意义（P>0.05）。ROC曲线显示miR-141能够较好地区分前列腺癌与BPH（或健康对照）,曲线下面积分别为0.785（95%CI∶0.689～0.823）和0.801（95%CI∶0.723～0.868）。血清miR-141表达与Gleason积分、临床分期和骨转移相关（均P0.05)。结论:循环miR-141可作为非侵入性诊断前列腺癌并且判断其预后的分子标志物。     

人结肠癌细胞系SP细胞microRNA表达谱的初步分析

目的：探讨结肠癌侧群（SP）细胞在结肠癌多药耐药性中的作用及其microRNA生物标志。方法：结肠癌SP细胞的分选采用流式细胞术,细胞活力的测定采用MTT法,microRNA表达谱的检测采用microRNA芯片,microRNA表达的验证采用实时荧光定量PCR。结果：（1）HCT-15、HT-29及LoVo结肠癌细胞系中SP细胞的比例分别为16.75%、13.02%及9.52%。（2）化疗药（5-氟尿嘧啶、草酸铂及阿霉素）对3种结肠癌细胞系SP细胞的IC50均明显高于对非SP细胞的IC50（P<0.05）。（3）microRNA芯片检测表明miR-5000-3p、miR-5009-3p及miR-552在3种结肠癌细胞系的SP细胞中表达均上调,实时荧光定量PCR亦证实此结果。结论：miR-5000-3p、miR-5009-3p及miR-552在结肠癌细胞系的SP细胞中表达上调,有可能成为结肠癌SP细胞的潜在microRNA生物标志。     

miR-130a/b与肿瘤关系的研究进展

目的：总结国内外miR-130a和miR-130b在肿瘤学领域研究的现状。方法：应用PubMed和中国知网数据库检索系统,以“microRNA、miR-130a、miR-130b和肿瘤”等为关键词,联合检索1993-01—2013-12的相关文献。纳入标准：1）microRNA在肿瘤研究中的新进展;2）miR-130a;3）miR-130b;4）肿瘤。根据纳入标准,符合分析的文献47篇。结果：miR-130a和miR-130b是高度同源的microRNA,通过干扰靶mRNA转录或降解靶基因来调控基因表达,它们在不同的肿瘤中差异表达,并在多种肿瘤细胞的增殖、凋亡、转移和肿瘤耐药方面发挥着重要作用。结论：miR-130a/b在肿瘤发生发展中发挥促癌或抑癌的作用,其在肿瘤耐药方面的研究可以为多重耐药的患者提供新的视角。     

抑制miR-21表达对结肠癌HCT116细胞生物学行为的影响

目的：探讨抑制 miR-21 表达对结肠癌HCT116细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。方法：实验分为3组,以miR-21抑制剂转染HCT116细胞为转染抑制组（IN）,另设阴性对照组（NC）、空白对照组（MOCK）,以Real-time PCR检测转染后HCT116细胞中miR-21的表达,应用MTT法、流式细胞术、Transwell侵袭和迁移实验检测转染后HCT116细胞的增殖、周期、凋亡、侵袭、迁移;以Western blotting检测转染后HCT116细胞PTEN的表达,荧光素酶报告实验检测转染后HCT116细胞PTEN的活性。结果：miR-21抑制剂转染后,HCT116细胞中miR-21的表达较NC和MOCK组细胞明显降低。下调miR-21后,HCT116细胞的增殖能力明显降低[72 h时：（1.05±0.45） vs （1.43±0.02）,（1.45±0.01）;t=13.83,P=0000 159;t=14.88,P=0.000 119],细胞凋亡率显著增加[（16.30±1.00）% vs（1.87±0.53）%,（1.86±0.12）%;t=25.01,P=0.000 015 2;t=24.985,P=0.000 015 2],细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞的侵袭[（50±2.0） vs （115±3.0）,（111±3.0）个;t=29.09,P=0.000 008 31;t=31.23,P=0.000 006 27]和迁移能力[（22±2.0） vs （52.3±2.5）,（53.0±1.0）个;t=2401,P=0.000 017 8;t=16.34,P=0.000 082 0]明显下降。miR-21抑制剂转染的HCT116细胞中PTEN的表达及其荧光素酶相对活性均显著增加。结论：miR-21可能通过抑制PTEN进而调控大肠癌细胞生物学行为,PTEN可能是miR-21的靶基因之一。