慢性马兜铃酸肾病动物模型的建立及其意义

目的探讨建立马兜铃酸引起的大鼠慢性肾间质纤维化动物模型.方法将雌性wistar大鼠分为马兜铃酸组与对照组.马兜铃酸组大鼠腹膜内注射马兜铃酸5mg@kg-1@d-1共16周,开始用药后8、12、16、20、24周分别处死6只大鼠.对照组大鼠(5只)腹膜内注射生理盐水2ml/d,共16周,24周时处死.两组动物处死时分别留取血、尿、肾组织标本,分别作生化、病理(光镜,免疫荧光,电镜)等方面的检查及应用电脑软件测定肾小管-间质面积.结果马兜铃酸组大鼠用药后16、20、24周体重明显低于对照组;用药后16周血尿素氮、血清肌酐明显高于对照组,24周时肾功能损伤进一步加重.光镜检查可见马兜铃酸组大鼠有明显肾小管-间质损伤,16周时肾小管面积明显增加,管腔面积明显小于对照组;24周时出现明显肾小管萎缩,肾小管面积明显缩小,而肾间质面积明显增加,肾间质呈多灶性纤维化.电镜检查16周时肾小管上皮细胞胞质内初级溶酶体、次级溶酶体明显增加,部分肾小管上皮细胞刷状缘消失;20、24周时可见胞质内次级溶酶体和髓样小体堆积.结论建立了慢性马兜铃酸肾病动物模型.马兜铃酸具有慢性肾毒性作用,可引起大鼠慢性肾间质纤维化.     

白介素35在炎性肠疾病中的抗炎作用机制

目的: 研究IL-35在炎性肠疾病中的抗炎作用及相关机制。方法: BALB/c雌性小鼠共30只,随机分为对照组、模型组（口服4%葡聚糖硫酸钠7 d）、IL-35组（口服4%葡聚糖硫酸钠7 d,第2~5天腹腔注射IL-35 2 μg/d）,每组10只。每天对小鼠进行疾病活动指数（DAI）评分;7 d后处死小鼠,留取血清和肠道组织,观察结肠大体形态;HE染色观察各组结肠组织病理形态变化;流式细胞术检测各组结肠组织中巨噬细胞极化情况;实时定量RT-PCR检测各组结肠组织中细胞因子IL-6、TNF-α、γ干扰素（IFN-γ）、IL-10和Src同源系列2结构域的肌醇5-磷酸酶1（SHIP1）的mRNA表达量;免疫组织化学法检测各组结肠组织中SHIP1的表达及分布情况;蛋白质印迹法检测各组结肠组织中SHIP1蛋白的表达。结果: 模型组在实验过程中DAI评分较对照组增加,而IL-35组自第4天起DAI评分较模型组减少（均P < 0.01）;与对照组比较,模型组结肠明显缩短（P < 0.05）,而IL-35组的结肠长度长于模型组,但差异无统计学意义（P > 0.05）;与模型组比较,IL-35组炎症细胞浸润减少、黏膜组织炎症评分和腺窝破坏组织评分较模型组减少（均P < 0.05）;IL-35组结肠组织中促炎因子IL-6、TNF-α和IFN-γ的mRNA相对表达量较模型组减少,而抑炎因子IL-10的mRNA相对表达量较模型组增加（均P < 0.05）;与对照组比较,模型组M1型巨噬细胞比例增加（P < 0.05）,而IL-35组M1型巨噬细胞的比例较模型组减少（P < 0.05）;IL-35组小鼠结肠组织中SHIP1 mRNA和蛋白相对表达量均较模型组增加（均P < 0.05）。结论: 在炎性肠疾病中,IL-35可以通过调控SHIP1表达抑制M1型巨噬细胞极化,以及调节炎症因子的表达发挥抗炎作用。     

Radiation and host retinoic acid signaling promote the induction of gut‐homing donor T cells after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation

Intestinal graft‐versus‐host disease (GVHD) remains a devastating complication after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). Although it has been well established that gut‐tropic donor T cells expressing integrin α4β7 are required to cause intestinal damage, the factors that control the induction of this pathogenic T cell population remain to be identified. Retinoic acid (RA) plays an important role in inducing α4β7 expression on T cells. In this study, we showed that gene expression of retinaldehyde dehydrogenase, the key enzyme involved in RA biosynthesis, is significantly increased in the spleen and mesenteric lymph nodes (MLNs) of irradiated mice. In a C57BL/6‐into‐B6D2F1 allogeneic HSCT model, irradiation significantly increased the induction of α4β7⁺‐donor T cells in mesenteric lymph nodes and spleen. Furthermore, we found that the RA pathway modulates the ability of dendritic cells to imprint gut‐homing specificity on alloreactive T cells. We also showed that host dendritic cell RA signaling influences GVHD risk. Our studies identified radiation and recipient RA signaling as 2 primary factors that dictate the magnitude of gut‐homing donor T cell induction after allogeneic HSCT. Attenuating radiation‐associated inflammation and modulating host RA signaling represent feasible strategies to mitigate intestinal GVHD by reducing gut‐seeking pathogenic donor T cells.     

Memory T cell–mediated rejection is mitigated by FcγRIIB expression on CD8+ T cells

Donor‐reactive memory T cells generated via heterologous immunity represent a potent barrier to long‐term graft survival following transplantation because of their increased precursor frequency, rapid effector function, altered trafficking patterns, and reduced reliance on costimulation signals for activation. Thus, the identification of pathways that control memory T cell survival and secondary recall potential may provide new opportunities for therapeutic intervention. Here, we discovered that donor‐specific effector/memory CD8⁺ T cell populations generated via exposure to acute vs latent vs chronic infections contain differential frequencies of CD8⁺ T cells expressing the inhibitory Fc receptor FcγRIIB. Results indicated that frequencies of FcγRIIB‐expressing CD8⁺ donor‐reactive memory T cells inversely correlated with allograft rejection. Furthermore, adoptive T cell transfer of Fcgr2b^?/? CD8⁺ T cells resulted in an accumulation of donor‐specific CD8⁺ memory T cells and enhanced recall responses, indicating that FcγRIIB functions intrinsically to limit T cell CD8⁺ survival in vivo. Lastly, we show that deletion of FcγRIIB on donor‐specific CD8⁺ memory T cells precipitated costimulation blockade‐resistant rejection. These data therefore identify a novel cell‐intrinsic inhibitory pathway that functions to limit the risk of memory T cell–mediated rejection following transplantation and suggest that therapeutic manipulation of this pathway could improve outcomes in sensitized patients.     

淋球菌外膜蛋白Porin I多抗的黏附抑制作用研究

目的:研究兔抗淋球菌外膜蛋白Porin I(P I)的多克隆抗体阻断淋病奈瑟菌对泌尿生殖道上皮的黏附作用。方法:将自行构建表达的淋球菌GST-P I融合蛋白作为抗原免疫新西兰兔,获得兔抗P I蛋白的多抗血清,纯化后得到P I-IgG抗体。建立淋球菌感染BALB/c小鼠模型,并通过观察阴道黏膜改变、分泌物涂片、冲洗液培养及阴道组织病理变化评价兔抗P I-IgG抗体对淋球菌黏附的影响。结果:经1 m g/m l兔抗P I-IgG处理后3 h再接种淋球菌的BALB/c小鼠生殖道黏膜未见红肿及脓液,分泌物涂片及阴道冲洗液未检及淋球菌,阴道组织病理检查也未见炎症细胞浸润。而低于浓度1 m g/m l及长于3 h兔抗P I-IgG处理的小鼠阴道组织病理可检及炎症细胞,但其它检查结果阴性。结论:纯化的抗淋球菌GST-P I融合蛋白的多克隆抗体,能有效抑制淋病奈瑟菌对小鼠泌尿生殖道上皮的黏附与感染,阻断作用及持续时间与抗体浓度有关。     

血管内皮生长因子在大鼠子痫前期模型中的作用

目的:探讨血管内皮生长因子在大鼠子痫前期模型中的作用。方法:选择清洁级W istar大鼠,随机分为两组,每组14只。对照组于妊娠第7天皮下注射生理盐水;亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAM E)组于妊娠第7天皮下注射一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂L-NAM E,每日125 m g/kg体重。两组均于妊娠第8天每天测量大鼠尾动脉血压,若血压增高合并尿蛋白大于或等于( )时,大鼠子痫前期模型确立。同时,测定两组大鼠血小板数值和血清VEGF浓度后,立即处死大鼠测胎鼠及胎盘重量;采用免疫组化法检测胎盘VEGF表达量。结果:L-NAM E组孕鼠出现类似子痫前期特征,表现为血压明显升高至(145.3±4.6)mmHg,尿蛋白含量增加为(814.3±57.5)m g/L,血小板数显著减少至(467.1±76.3)×109/L及胎鼠胎盘重量明显减轻;对照组孕鼠血压(101.4±7.6)mmHg,尿蛋白(398.2±82.3)m g/L,血小板计数(837.20±71.4)×109/L。两组比较差异均有显著性(P均<0.05)。对照组血清VEGF浓度明显大于L-NAM E组[(13.62±3.33 vs 8.71±2.42)ng/L],胎盘中的VEGF表达量对照组也明显高于L-NAM E组[(0.89±0.19 vs 0.58±0.12)OD],差异均有显著性(P<0.01)。结论:大鼠血清VEGF水平降低和胎盘表达VEGF量下降参与子痫前期的发生。     

葛根素对糖尿病大鼠主动脉硫酸乙酰肝素蛋白多糖影响的实验研究

目的 观察葛根素对糖尿病大鼠主动脉HSPG的影响。方法 利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导建立1型糖尿病大鼠模型，将实验用SD大鼠随机分正常对照组、糖尿病组、葛根素治疗组。治疗16周，观察治疗期间及治疗后大鼠的一般状况、血糖（BS）、三酰甘油（TG）、胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、糖化血红蛋白（HbA1c）、糖化低密度脂蛋白（G-LDL），分离主动脉，HE染色及免疫组织化学检测主动脉内膜HSPG表达。结果 造模2组大鼠均出现血脂异常及主动脉病理形态改变。葛根素能改善基本状况，葛根素能降低糖尿病大鼠的三酰甘油（P〈0．05）、胆固醇（P〈0．05）、低密度脂蛋白（P〈0．05）、糖化血红蛋白（P〈0．05）、糖化低密度脂蛋白（P〈0．05），升高高密度脂蛋白（P〈0．05）；葛根素增强主动脉硫酸肝素蛋白（P〈0．05）作用。结论 葛根素可以通过增强硫酸肝素蛋白对糖尿病主动脉具有保护作用。     

大鼠全脑照射后海马肿瘤坏死因子的基因表达

目的 观察大鼠全脑照射后海马区肿瘤坏死因子α(TNF-α)的动态表达,探讨其在放射性脑损伤急性期的反应发病机理中可能的作用. 方法 制备大鼠的脑放射诱导损伤模型.利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术半定量分析大鼠脑放射诱导损伤后海马区在不同时间、不同剂量水平TNF-α基因转录的动态表达. 结果 正常组海马区TNF-α mRNA低水平表达;全脑照射组表达上调并在1 h达峰值,是正常组的4～11倍(P＜0.001);放射诱导呈剂量依赖性(P＜0.01),30 Gy组较2 Gy组增高近2倍(P＜0.001),较15 Gy组增高近1倍(P＜0.01),15 Gy组也高于2 Gy组;各照射组在12 h后恢复到基础水平. 结论 大鼠全脑照射后海马区TNF-α基因表达上调,放射诱导呈剂量依赖性,提示参与了脑放射诱导损伤急性期的细胞反应.     

四肢战创伤院内死亡原因及危险因素的logistic回归分析

目的 探讨四肢战创伤病例中院内死亡的死亡原因及危险因素.方法 对1968年至2002年在战伤救治过程中收治的352例四肢战创伤病例进行回顾性研究,对15例死亡病例尸体剖解结果进行分析以探讨其死亡原因,并采用logistic回归模型对死亡的危险因素进行了多因素统计学分析.以探讨影响死亡的危险因素.结果 352例在院病例中死亡15例,病死率为4.3%.死亡原因主要有急性肾功能衰竭(ARF)7例(46.7%),肺栓塞3例(20.0%),多器官功能衰竭(MOSF)2例(13.3%),气性坏疽3例(20.0%),其中气性坏疽合并ARFl例,合并MOSF 1例.死亡的主要危险因素有:休克、截肢(χ2=93.589、144.716,均P<0.05).结论 四肢战创伤病例主要死亡原因为ARF,对休克病人的及时正确处理以及截肢时机的正确选择有利于减少死亡率.     

丙种球蛋白和维生素C对实验性自身免疫性心肌炎作用的研究

目的：探讨丙种球蛋白（IVIG）和不同剂量维生素C（VitC）对实验性自身免疫性心肌炎（EAM）的保护作用。方法：Balb／c小鼠52只，随机分为6组：空白组不予任何处理；其余小鼠分别于第1天和第7天在双测腹股沟皮下注射充分乳化的猪心肌肌凝蛋白，剂量为每次每只100μg；从免疫的当天开始给每只小鼠腹腔注射所给药物。小剂量VitC组：150mg／kg&#183;d^-1 VitC；大剂量VitC组：300mg／kg&#183;d^-1 VitC；IVIG组：1g／kg&#183;d^-1 IVIG；IVIG＋VitC组：1g／kg&#183;d^-1 IVIG和150mg／kg&#183;d^-1 VitC；对照组：与干预组等量的生理盐水。小鼠于第21天给予称重，麻醉后处死，并摘眼球取血，用Elisa法测定血清肿瘤坏死因子α（TNF—α）水平；取心脏、脾脏和肾脏分别称重，得心脏、脾脏和肾脏与体重之比（C／W、S／W、R／W）；脾脏在肉眼观察后作病理切片和H—E染色。心脏分为三部分：一部分作病理切片和H—E染色，一部分作冰冻切片，在荧光显微镜下用直接免疫荧光法测定心肌组织中沉积的IgG水平，一部分作电镜检查。结果：（1）心脏的病理改变：大、小剂量VitC组心肌炎性细胞的浸润及心包钙化有所减轻；IVIG组和IVIG＋VitC组心肌偶有淋巴细胞浸润，无心包钙化。（2）脾脏的病理改变：除空白组外，其余脾脏均明显增大，IVIG组和IVIG＋VitC组更是明显，镜检表现为红髓充血和白髓增生。（3）心脏、脾脏、肾脏与体重之比：各干预组C／W明显低于对照组；各干预组和对照组S／W明显高于空白组，IVIG组和IVIG＋VitC组S／W明显高于大、小剂量VitC组；R／W各组无差异。（4）TNF—α水平：大、小剂量VitC组的TNF—α水平略低于对照组，IVIG组和IVIG＋VitC组的TNF—α水平明显低于对照组。（5）心肌的免疫荧光检测：对照组比较粗的荧光条带主要集中在心肌间质，大、小剂量VitC组荧光的密度和强度有所降低，而IVIG组和IVIG＋VitC组的荧光条带增宽，在心肌间质中呈宽大的条索状分布，亮度明显增强。（6）心肌的电镜检测：对照组心肌肌丝排列紊乱，肌节断裂严重，线粒体肥大，并出现空泡变性；大、小剂量VitC组病变比对照组有所减轻；IVIG组和IVIG＋VitC组肌丝排列紊乱明显减轻，肌节断裂比对照组减少，线粒体基本正常。结论：IVIG和VitC对EAM都有一定的保护作用，可以减轻心脏的病理改变，抑制TNF—α的产生；但IVIG或IVIG＋VitC作用更为明显，并可刺激机体的免疫反应，增加心肌中IgG的沉积。