高纯度积雪草总苷的制备工艺研究

目的 研究高纯度积雪草总苷的制备工艺。方法 采用大孔树脂分离技术与重结晶技术相结合的方法,优选最佳积雪草总苷制备工艺参数,同时建立积雪草总苷HPLC检测方法。结果 积雪草药材采用75%乙醇回流提取、回收乙醇、水沉、酸沉,通过HPD-100大孔树脂柱富集后,再采用醋酸乙酯重结晶方法,可制备质量分数90%以上的积雪草总苷。结论 该工艺稳定性高、重复性好,适合于制备高纯度的积雪草总苷。     

积雪草甙、羟基积雪草甙对体外培养人成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:研究积雪草甙(asiaticoside,Ad)和羟基积雪草甙(madecassoside,Md)对体外培养人成纤维细胞(human skin fibroblast,HSFb)的增殖及胶原蛋白合成的影响。方法:应用 XTT 方法比较研究 Ad 和Md 对 HSFb 增殖的影响,应用放射免疫的方法测定各实验组和空白对照组细胞上清液中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原氨基端肽原(procollagen Ⅰ of aminoterminal propeptide,PINP;procollagen Ⅲ of aminoterminal propeptide,PⅢNP)的含量。结果:(1)Ad 和 Md 在浓度高达200μg/ml 时仍未见任何细胞毒性;(2)与空白对照组相比,Ad 和 Md 对 HSFb 有明显促进增殖作用(P<0.05);两者同时也可有效刺激 HSFb PⅠNP 和 PⅢNP 分泌;(3)Ad 和 Md 刺激靶细胞 PⅠNP 和 PⅢNP 分泌的生物学作用呈现明显的量效关系;(4)在一定剂量范围内,对促进 HSFb 增殖以及刺激 PⅠNP 分泌,Ad 显示出比 Md 更强的生物活性(P<0.05,P<0.01)。...     

羟基积雪草苷的抗高血压作用及其特点研究

目的:探讨羟基积雪草苷(madecassoside,MC)抗高血压作用及其作用特点。方法:利用高血压模型大鼠及正常大鼠,采用清醒及麻醉状态下血压直接测量法,研究MC对血压的影响及其作用特点。结果:MC降低了高血压模型大鼠的收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MAP)及心率(HR);而对正常大鼠血压及心率无明显影响。结论:MC具有降血压作用;但对正常大鼠血压无明显影响。     

羟基积雪草苷对小鼠抑郁行为和大鼠不同脑区单胺氧化酶活性的影响

目的:研究羟基积雪草苷(madecassoside, MC)对实验小鼠抑郁行为及对大鼠不同脑区单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)活性的影响.方法:以丙咪嗪为阳性对照药,采用小鼠强迫游泳实验和利舍平拮抗实验,观察MC对小鼠游泳不动时间和利舍平诱导的小鼠体温降低的影响;分别以吗氯贝胺和帕吉林为阳性对照药,测定急性(3 d)和慢性(21 d)给予大鼠MC对不同脑区单胺氧化酶A (monoamine oxidase-A,MAO-A)和单胺氧化酶B(monoamine oxidase-B,MAO-B)活性的影响.结果:(1) MC高、中、低剂量(10、20、40 mg/kg)均可显著减少小鼠的游泳不动时间(P<0.01).(2)低剂量(10 mg/kg)和中剂量(20 mg/kg)均能显著拮抗利舍平诱导的小鼠体温降低(P<0.05),但高剂量(40 mg/kg)对利舍平诱导的小鼠体温降低无显著性影响(P>0.05).(3)急性给药,MC高、中、低剂量均显著降低大鼠海马MAO-A活性(P<0.01),高剂量显著降低下丘脑MAO-A活性(P<0.01),对皮质MAO-A活性无显著性影响(P>0.05);慢性给药,MC对皮质和下丘脑MAO-A 的活性没有显著影响(P>0.05),MC高剂量可显著增加海马MAO-A的活性(P<0.01).(4)急性给药,MC低、中剂量可显著降低大鼠大脑皮质MAO-B的活性(P<0.05),MC低剂量可显著降低下丘脑MAO-B的活性(P<0.05),而MC中剂量显著增加海马MAO-B的活性(P<0.01); 慢性给药,MC高、中、低剂量对不同脑区MAO-B的活性均没有显著影响(P>0.05).结论:MC具有抗抑郁作用,其作用可能与降低脑内MAO的活性有关,急性给药比慢性给药对MAO的影响更为显著,引起这种差异的原因尚需作进一步研究.     

羟基积雪草苷对转基因肌萎缩侧索硬化小鼠的治疗作用

目的探讨羟基积雪草苷对铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn superox ide d ism u tase,SOD 1)-G 93A突变肌萎缩侧索硬化(am yotroph ic latera l scleros is,ALS)小鼠的治疗作用。方法通过行为学和组织学测定,观察羟基积雪草苷对SOD 1-G 93A突变ALS小鼠发病时间、生存时间、运动功能变化和神经元病理改变的影响。结果羟基积雪草苷(61.1±11.0)和(185.6±18.7)m g/(kg.d)在小鼠日龄70 d时开始给药至死亡,能分别延长SOD 1-G 93A突变ALS小鼠的生存时间11.4和9.4 d,但对发病时间无影响;同时(61.1±11.0)m g/(kg.d)组小鼠在肌力缓慢下降期运动功能降低减缓,与对照组比较差异显著(P<0.05)。120 d时L 2~5组织切片显示两治疗组脊髓前角运动神经元数明显高于SOD 1-G 93A对照组(P<0.05),多数运动神经元胞浆中仍有尼氏体存在。结论羟基积雪草苷对SOD 1-G 93A突变转基因小鼠运动神经元变性有保护作用,能延长小鼠的生存时间。     

一测多评法同时测定积雪草总苷及其2种制剂中3种成分

目的建立一测多评法同时测定积雪草总苷及积雪苷片、积雪苷霜软膏中3种成分的含有量。方法各样品甲醇提取液的分析采用Eclipse XDB-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-(2 mmol/L羟丙基-β-环糊精)(24∶76);体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长205 nm。以羟基积雪草苷为内标,计算其他2种成分的相对校正因子,测定含有量。结果积雪草苷B、羟基积雪草苷、积雪草苷在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 8),平均加样回收率97.93%～102.05%,RSD 0.61%～2.06%。一测多评法所得结果与外标法接近。结论该方法稳定可靠,可用于积雪草总苷及其2种制剂的质量控制。     

积雪草总苷及其制剂的含量研究.Ⅱ.积雪草总苷中积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B含量的HPLC法测定

应用流动相中添加β-环糊精法,建立了HPLC法测定积雪草总苷中的积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B的含量.采用C_(18)色谱柱,以乙腈-4 mmol/L β-环糊精溶液(25:75)流动相,检测波长204 nm.积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B均在2～20μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.25%、98.41%和100.15%,RSD分别为1.12%、1.21%和1.20%.     

羟基积雪草苷对脂多糖诱导大鼠发热及相关炎症因子影响研究

目的:观察羟基积雪草苷的解热作用。方法:腹腔注射脂多糖100μg/kg制备大鼠发热模型,连续6h监测大鼠体温变化,6h后取血、肝脏和脑组织。羟基积雪草苷造模前连续3天灌服,对乙酰氨基酚组于造模前30min一次性腹腔注射50mg/kg。肝组织髓过氧化物酶(MPO)活性检测采用MPO试剂盒,酶联免疫法(ELISA)测脑组织前列腺素E2(PGE2)和血浆白介素-6(IL-6)含量。结果:羟基积雪草苷10、20和40mg/kg组体温明显低于模型组,其中40mg/kg组与对乙酰氨基酚组相当。与模型组比较,羟基积雪草苷3个剂量组明显降低发热后6h肝组织MPO活性、脑组织PGE2和血浆IL-6的含量。结论:羟基积雪草苷具有解热作用,该作用可能与抑制抑制炎症因子PGE,IL-6,MPO活性有关。     

RP-HPLC测定积雪苷缓释片释放液中的2个指标成分

目的建立可同时测定积雪苷缓释片释放液中的2个指标成分——积雪草苷(asiaticoside,AS)和羟基积雪草苷(madecassoside,MS)的RP-HPLC。方法以DIAMONSIL C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-甲醇-水(22∶35∶50)为流动相,柱温控制在25℃,流速0.8 mL.min-1,检测波长为204 nm,建立了可同时用于释放液中的AS和MS分离测定的RP-HPLC。结果方法学评价结果显示,积雪草总苷中MS和AS的峰面积与浓度之间呈良好的线性(浓度范围均为2~200μg.mL-1,r=0.999 9),方法的回收率MS为99.9%~101.0%,AS为100.3%~103.1%(n=6),日内日间精密度小于1.9%。结论本方法可同时测定积雪苷缓释片释放液中的2个指标成分。方法专属性强,快速简单,重现性好。     

HPLC-ELSD法测定三金片和三金胶囊中积雪草苷和羟基积雪草苷的含量

目的:建立三金片和三金胶囊中有效成分积雪草苷和羟基积雪草苷的 HPLC-ELSD 分析方法。方法:采用 Nova-pakC_(18)色谱柱(3.9mm×150 mm,4μm),以甲醇-水(48:52)为流动相,流速为0.8 mL·min~(-1),柱温为35℃。蒸发光散射检测器漂移管的温度为90℃,气体(空气)流速为2.1 L·min~(-1)。结果:积雪草苷和羟基积雪草苷的线性范围分别为0.62～12.48μg(r=0.9992)和0.56～11.12μg(r=0.9991)。三金片和三金胶囊中,积雪草苷的平均回收率分别为98.33%(RSD 2.4%)和100.8v(RSD 1.7%),羟基积雪草苷的平均回收率分别为99.30%(RSD 2.1%)和99.55%(RSD 2.6%)。结论:本方法简便快捷、定量准确,可用于三金片和三金胶囊中积雪草苷和羟基积雪草苷的含量测定。