改良型TAT-VP3融合蛋白的基因合成、原核表达载体构建及表达的实验研究

目的 研究改良型TAT-VP3融合蛋白的基因合成、原核表达载体的构建及其原核表达.方法 首先通过基因拼接法合成VP3基因并委托生物技术公司合成改良型TAT基因.然后于原核表达载体pGEX-6p-1上构建改良型TAT-VP3融合蛋白的基因.最后将构建好的原核表达载体转导入基因工程菌DH-5α中并诱导其表达.结果 成功合成了VP3基因,构建了改良型TAT-VP3融合蛋白的原核表达载体,并经基因测序证明构建无误;成功的在基因工程菌DH-5α中诱导了改良型TAT-VP3融合蛋白的表达.结论 改良型TAT-VP3融合蛋白的基因合成、原核表达载体的构建及其原核表达是可行的,为进一步的蛋白制备及活性研究打下了基础.     

氨溴索对吸烟大鼠肺组织激活蛋白-1、铜锌超氧化物歧化酶表达的影响

目的 通过研究氨溴索对吸烟大鼠肺组织中激活蛋白-1(AP-1)、铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)表达的影响,探讨氨溴索在慢性阻塞性肺疾病(ODPD)抗氧化治疗中的作用及其机制.方法 健康雄性Wistar大鼠30只随机分为对照组、吸烟组、氨溴索组,分别采用原位杂交半定量技术、免疫组织化学法和免疫细胞化学法检测支气管上皮细胞及肺泡巨噬细胞中AP-1(c-jun和c-fos亚单位)和CuZn-SOD mRNA及其蛋白的表达水平.结果 吸烟组大鼠支气管上皮细胞和肺泡巨噬细胞c-jun、c-los、CuZn-SOD mRNA及其蛋白表达水平明显高于对照组(均P<0.05);氨溴索组c-jun、c-fos mRNA及其蛋白、CuZn-SOD mRNA表达水平明显低于吸烟组(均P<0.01),而CuZn-SOD蛋白表达水平与其他两组相比无统计学差异(P>0.05).结论 氨溴索可以降低吸烟大鼠肺组织AP-1 mRNA及其蛋白和CuZn-SOD mRNA的表达,其可能通过降低AP-1的表达在COPD治疗中发挥一定的抗氧化作用.     

针刺组方影响SAMP10脑CaN mRNA特异性表达的实验研究*

[目的]了解不同的针刺配穴组方对快速老化小白鼠(SAMP10)脑钙调神经磷酸酶(CaN)mRNA表达的影响.[方法]用α-32P-dCTP标记探针,Northern杂交法进行mRNA表达水平的半定量分析,分别以取穴水沟、内关的醒脑开窍法(针刺泻实组)和取穴肝俞、肾俞的滋补肝肾法(针刺补虚组)干预8月龄SAMP10(模型组).[结果]与正常组比较,模型组CaN mRNA表达水平下降.醒脑开窍法可提高CaN mRNA表达至接近正常水平(P＜0.05),滋补肝肾法有升高其表达的趋势(P＞0.05),提示醒脑开窍法优于滋补肝肾法.[结论]CaN mRNA表达水平低下可能是脑老化的机制之一,针刺能提高CaN mRNA表达水平,并具有组方配穴的特异性,提示醒脑开窍法可能是干预脑老化的潜在策略.     

mRNA差异显示技术与肿瘤分子生物学研究

信使ＲＮＡ差异显示技术可通过分离、克隆直核细胞的ｍＲＮＡ，比较正常细胞和肿瘤细胞中不同表达的基因。因该方法简便、特异、敏感、可复性强等特点，将成为研究肿瘤分子生物学基础的良好工具。本文综述了ｍＲＮＡ差异显示技术的基因原理、主要操作方法及其在肿瘤研究中的应用。     

检测人巨细胞病毒晚期mRNA在诊断子宫内活动性感染的价值

目的 探讨人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）晚期ｍＲＮＡ检测在宫内活动性感染中的应用价值。方法 采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）法对４２例ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性孕妇外周血及部分胎儿附属物进行ＨＣＭＶ晚期ｍＲＮＡ检测。结果 ４２例ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性孕妇中,检出晚期ｍＲＮＡ２３便,两者符合率为５４．７％。对其中１３例晚期ｍＲＮＡ阳性孕妇胎儿附属物进行检测,７例阳性,母婴传播率为５３．８％,而１２例晚期ｍＲ     

结直肠癌IGF—ⅠmRNA表达与浸润转移的关系

目的：探讨ＩＧＦ－ⅠｍＲＮＡ在结直肠癌组织中的表达。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测２８例结直肠癌组织及癌周正常组织ＩＧＦ－１ｍＲＮＡ的表达。结果：２８例结直肠癌中,ＩＧＦ－ⅠｍＲＮＡ表达阳性者２０例,癌周组织令３例阳性,癌组织中的表达率明显高于癌周组织;Ｃ、Ｄ期癌表达率明显高于Ａ、Ｂ期癌,结论：ＩＧＦ－１在结直肠癌组织中存在广泛的表达,ＩＧＦ－１ｍＲＮＡ的表达与结直肠癌的转移有关。     

全外显子测序在产前诊断中的研究进展

近年来,二代测序(NGS)技术发展迅猛,逐渐被应用于产前诊断,其中全外显子测序(WES)在临床中应用较广泛,主要检测基因组的编码区(外显子),相比于传统染色体分析及微阵列检测等,WES监测范围广、检出率高、性价比高,目前在诊断产前胎儿骨骼异常和胎儿颈部透明层增厚(NT)的应用中较为常见。但同时其也面临着相关的挑战,如产前样本对测序的限制、测序结果的解读及进行测序的时机及必要性。因此为了在产前诊断的范畴中更好地应用WES技术,降低出生缺陷的发生率,本文概述了全外显子测序技术的优势,探讨在产前诊断临床中的应用及面临的挑战。     

中药对股骨头缺血坏死修复过程中血管内皮生长因子基因表达的影响

目的：探讨具有活血补肾作用的中药丹仙康骨胶囊对股骨头缺血坏死修复过程中血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响。方法：采用手术方法制作兔股骨头缺血坏死模型，应用逆转录一聚合酶链反应(RT-PC=R)、免疫组化、微血管灌注及组织形态学方法观察中药丹仙康骨胶囊治疗兔股骨头坏死过程中血管内皮生长因子基因(VEGFmRNA)表达、血管生成及骨组织修复情况。结果：股骨头坏死模型组4周时可见有坏死骨周围VEGFmRNA表达呈阳性，但随着时间的推移而减少，至8、12周时VEGFFmRNA表达均为阴性，再生血管密度低，只见少量间充质细胞增生及新骨形成；丹仙康骨胶囊治疗组至8、12周时VEGFmRNA表达呈强阳性，并可见明显血管增生，血管密度显著增高，大量新骨形成。结论：活血补肾的丹仙康骨胶囊能促进股骨头缺血坏死修复过程中VEGFmRNA的表达、血管的再生和新骨的形成。     

当归制剂对脂多糖诱导的肝组织炎性损伤的影响及分子机制初探

目的　探讨应用当归制剂对脂多糖诱导的肝组织炎症反应的影响及其分子机制。方法　将ICR小鼠分为用药组、实验对照组及正常对照组 3组 ,采用脂多糖 (LPS)配合卡介苗 (BCG)注射法建立小鼠 (用药组和实验对照组 )肝脏炎性损伤模型 ,经腹腔给用药组小鼠注射当归制剂 ,给实验对照组注射等量生理盐水 ,连续给药 10d后 ,常规组织病理学观察 ,比较小鼠肝组织炎症反应情况。同时用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)检测小鼠脾脏单个核细胞TNF -αmRNA表达的变化。结果　用药组小鼠肝脏的炎症反应明显弱于实验对照组 (P <0 .0 5 ) ;肝脏炎性损伤小鼠脾脏单个核细胞TNF -αmRNA的表达在注射LPS后 4h较正常对照组小鼠明显增加 (P <0 .0 1) ,在注射后 7h时达到峰值 ,而后有所下降 ;在注射LPS后 7h ,用药组小鼠TNF -αmRNA的表达与实验对照组相比 ,无显著差异。结论　当归制剂能显著抑制脂多糖诱导的肝组织炎症反应 ,明显减轻肝组织的炎性损伤 ,然而其主要抑制作用可能并非通过影响炎性介质TNF -αmRNA的表达来实现。