系统性红斑狼疮患者脱氧核糖核酸酶1基因表达研究

目的　研究脱氧核糖核酸酶 1(deoxyribonuclease ,DNASE1)基因表达及 m RNA剪接形式与系统性红斑狼疮 (systemic lupus erythematosus,SL E)的关联性。　方法　以实时荧光定量聚合酶链反应 (real- time PCR)方法检测 DNASE1的 m RNA表达水平 ,以毛细管电泳技术分析 m RNA编码区替代剪接体 ,结合单核苷酸多态性 (single nucleotide polymorphisms,SNPs)单倍型了解基因结构对表达的影响。　结果　SL E患者 DNASE1基因表达水平显著高于正常对照 (P<0 .0 0 1) ,未发现 SL E疾病活动性指数积分与基因表达水平存在相关性 ,但性别分析显示女性患者 DNASE1基因表达水平高于男性患者 (P<0 .0 1)。 8名正常人与 18例患者的毛细管电泳结果显示 ,患者与正常人替代剪接谱系不同 ,且 380 bp处存在明显条带 ,具有不同单倍型的 SL E患者替代剪接谱系亦有差异。　结论　 SL E患者 DNASE1基因表达异常 ,并存在与正常人不同的 m RNA剪接体。 DNASE1基因与 SL E发病相关     

含生长抑素mRNA神经元在移植视网膜发育中的表达

将６０例鼠龄１４ｄＳＤ大鼠视网膜移植到出生后１ｄ大鼠中脑偏左侧处，同时摘除新生鼠的右眼。术后１０ｄ至２２ｄ分别取移植视网膜及其中脑，在相应的年龄取正常视网膜作对照，应用原位杂交组化技术──地高辛标记的生长抑素的ｃＲＮＡ探针检测移植和正常视网膜中含生长抑素ｍＲＮＡ神经元出现时间、发育规律及定位分布。同时用免疫组化方法显示生长抑素免疫反应神经元的形态，以作对照和补充。原位杂交组化实验结果表明：在出生当天的移植视网膜节细胞层已出现阳性表达，出生后４ｄ，外核层也出现小的含生长抑素ｍＲＮＡ神经元，此种神经元随后减少、消失；与此同时内核层及节细胞层内含生长抑素ｍＲＮＡ神经元逐渐增多，至生后１２ｄ接近成年水平。通过对非移植大鼠视网膜进行正常对照观察，移植视网膜与非移植的正常视网膜生后发育的结果相似。生长抑素免疫反应神经元与原位杂交含生长抑素ｍＲＮＡ神经元的表达部位是一致的，但生长抑素免疫反应神经元可见其突起。     

新等位基因人类白细胞抗原B*4609的发现和确认

目的 鉴定一个人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)新等位基因HLA-B*4609.方法 使用序列特异性寡核苷酸PCR技术进行HLA基因分型,发现反应格局异常的可疑新等位基因,应用分子克隆和DNA双向测序技术测定新等位基因的核苷酸序列,并与已知等位基因进行序列比对分析.结果 检出1个样本HLA-B位点反应格局异常,DNA测序分型结果一个为B*151101,另一个的核苷酸序列与已知的HLA等位基因均不同,该基因序列与同源性最高的HLA-B*460101基因序列相比,在第3外显子区域中527位碱基发生A→T突变,导致176位编码氨基酸由谷氨酸(GAG)变成缬氨酸(GTG).结论 样本中含有HLA-B新等位基因序列.该序列申报后,被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B*4609.     

马桑内酯致痫后大鼠海马生长抑素mRNA表达的变化

为探讨马桑内酯致痫与生长抑素的关系，用原位杂交组织化学法研究了马桑内酯致痫后大鼠海马生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经元的变化，结果表明：致痫组大鼠ＣＡ１，ＣＡ２区及齿状回生长抑素ｍＲＮＡ的反应明显增强，以上各区的中，小神经内生长抑素ｍＲＮＡ神经元的数目及强度明显高于正常对照组，两者有显著性差异。     

醛固酮对肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物1基因表达的影响

目的:探讨醛固酮(ALD)对大鼠肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物l(PAI-1)基因表达的影响.方法:(1)以不同浓度的ALD(10-11、10-10、10-9、10-8、10-7 mol/L)刺激肾小球系膜细胞72 h后,用半定量RT-PCR法检测该细胞中PAI-1 mRNA的表达.(2)以10-7 mol/L的ALD刺激肾小球系膜细胞不同时间(12、24、48、72 h)后,用半定量RT-PCR法检测该细胞中PAI-1 mRNA的表达.结果:半定量RT-PCR结果显示,ALD促进培养的大鼠肾小球系膜细胞PAI-1mRNA的表达,且具有浓度依赖性和时间依赖性的特点.结论:ALD促进大鼠肾小球系膜细胞PAI-1 mRNA的表达,从而抑制细胞外基质的降解,促进肾小球疾病进展.     

杂合型单核苷酸多态性定量焦测序测定法用于唐氏综合征快速诊断的探索

目的 通过筛查人21号染色体上的杂合型单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,初步建立基于定量焦磷酸测序反应的唐氏综合征分子诊断方法.方法 基于改进引物设计的等位基因特异性扩增法,在21号染色体上选取7个SNP位点进行杂合子筛选,通过焦测序法检测SNP中两个等位基因型的比值,并作为诊断唐氏综合征的依据.结果 通过对84名正常中国人基因组样本进行筛查,得到6个杂合率较高的SNP位点.6个SNP位点的杂合子覆盖率为92.9%.应用这6个SNP位点对10例唐氏综合征患者的样本进行了焦测序定量检测,结果表明10例患者样本中有9例样本的两个基因型比值为2:1或1:2,1例未检出杂合子,检出率为90%.结论 初步建立了一种唐氏综合征辅助诊断方法,具有成本低、操作简单、快速和结果明了的优点,可以有效地快速诊断唐氏综合征,为今后进一步完善该方法,并将其用于临床诊断奠定了基础.     

阿糖胞苷上调白血病细胞CD86分子及细胞因子表达的研究

目的:观察阿糖胞苷(Ara-C)对急性白血病细胞CD86分子表达的影响,并探讨其作用机制.方法:流式细胞术(FCM)检测U937、HL60、NB4细胞经Ara-C处理前后CD86分子表达变化,RT-PCR检测Ara-C对各组细胞CD86mRNA、NF-кB以及细胞因子IFN-γ的表达变化.结果:经Ara-C处理的急性白血病细胞CD86分子表达与对照组相比均明显升高(P<0.05);CD86 mRNA表达水平也明显增强;Ara-C处理后细胞核内NF-кB表达明显上调;并且IFN-γ mRNA在T细胞活化72 h可检测到.结论:Ara-C能使U937、HL60、NB4急性白血病细胞CD86表达增加,有利于NF-кB等转录因子活化,促进CD86转录增强、表达增加并可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-2在T细胞活化中起着更重要的作用.     

检测膀胱肿瘤Survivin蛋白及其mRNA表达的临床意义

目的为明确Survivin作为膀胱肿瘤患者的肿瘤诊断和监测标志物的可能性,我们检测了Survivin在膀胱肿瘤和非肿瘤患者病变组织的Survivin蛋白及其mRNA表达情况。方法从我科住院病人和膀胱镜检患者中获取31例膀胱癌患者(实验组)和24例非肿瘤患者(对照组)的组织标本,用免疫组织化学法(IHC)和RT-PCR检测Survivin蛋白和基因在肿瘤组织和非肿瘤组织中的表达情况。并对结果行相应的统计学分析。结果IHC检测实验组和对照组Survivin蛋白的阳性率分别为74%(23/31)和4%(1/24),χ2检验P<0.001,IHC的阳性率与肿瘤的分级分期有一定的关系;实验组和对照组RT-PCR检测Survivin mRNA的表达阳性率分别为90%(30/31)和4%(1/24),χ2检验P<0.001。结论膀胱肿瘤组织Survivin蛋白和基因的表达量高于对照组,因此,Survivin有望成为膀胱瘤高危人群筛选,肿瘤诊断和监测的工具之一。     

hSSTR1mRNA在人肺癌组织中的表达

ｈＳＳＴＲ１ｍＲＮＡ在人肺癌组织中的表达汪静武胜昔２王连刚１邓敬兰乔宏庆（第四军医大学西京医院核医学科１实验外科２解剖学教研室，西安７１００３２）人生长抑素受体（ｈＳＳＴＲ）在多种神经内分泌肿瘤中呈高密度分布，通过ｈＳＳＴＲ可介导外源性生长抑素类似物...     

择时电针“阳虚”、“阴虚”大鼠创伤痛下丘脑PENKmRNA表达的比较研究

目的 为了系统地比较不同时辰、不同机体状态,择时针刺镇痛的作用机制。方法 实验在“阳虚”、“阴虚”模型的基础上,进行截肢术造成创伤痛模型,电针“太溪”和“足三里”,以原位杂交的方法,检测下丘脑PENKmRNA的表达。比较不同时辰电针对“阳虚”、“阴虚”大鼠创伤痛下丘脑PENKmRNA表达的影响。结果 电针可增加“阳虚”、“阴虚”创伤痛大鼠下丘脑PENKmRNA表达。具有明显的昼夜节律性。结论 电针不同程度增加下丘脑PENKmRNA的表达,并呈昼夜节律性。其表达的最佳时辰,“阳虚”组在午时,“阴虚”组在子时,两者呈相互对应性。