雌激素受体β亚型对人乳腺癌细胞株生物学特性的影响（摘要）

目的探讨雌激素受体β亚型（ERβ）对人乳腺癌细胞株生物学特性的影响和作用机制。方法构建ERβ稳定高表达的MDA—MB-435细胞株。运用噻唑蓝（MTT）法、流式细胞术和Transwell等方法，观察不同雌激素浓度下ERβ对该细胞株增殖、侵袭和转移特性的影响。采用RT—PCR和（或）Westernblot、明胶酶谱技术检测相关基因的表达水平。结果ERB可显著提高MDA—MB-435细胞的增殖速度和侵袭迁徙能力，且呈非雌激素依赖性。与对照细胞相比，ERβ高表达的细胞s期比例显著增多（P=0．01）；β21 mRNA表达水平降低33．3％（P=0．03），蛋白表达水平降低47．4％（P=0．02）；基质金属蛋白酶（MMP）-9mRNA表达水平增高91．3％（P〈0．01），活性增高67．3％（P=0．02）；Ets-1 mRNA表达水平增高62．2％（P=0．01），蛋白表达水平增高51．0％（P=0．01）；cyclinA、cyclinE、cyclinD1、MMP—1、MMP-2、MMP-7、血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在mRNA水平未见明显差异。结论ERβ有促进乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移的作用。降低β21的表达、增加Ets—1和MMP-9的表达并增强MMP-9的活性是其可能的作用机制之一。     

重亚硫酸盐修饰直接测序技术检测p16基因甲基化的研究

目的建立稳定的重亚硫酸盐直接测序技术，检测p16基因甲基化状况。方法提取正常人全血基因组DNA．建立起稳定的重亚硫酸盐直接测序平台，利用该技术检测结直肠癌细胞株pl6基因甲基化状况。结果应用列联表的Fisher，Exact Test比较3种纯化方法的测序结果，乙醇／醋酸钠和过柱纯化与SAP—ExonI纯化法比较，测序结果差异有统计学意义（P〈0．05）；应用重亚硫酸盐直接测序技术，可检测出p16基因目的片段中CpG岛所有CpG位点的甲基化状况。结论应用SAP—ExonI纯化法，建立了稳定的重亚硫酸盐直接测序技术，并可检测出目的片段中CpG岛所有CpG位点的甲基化状况。     

温肾方对自身免疫性甲状腺炎甲状腺组织TNF-α、IFN-γ表达的影响

目前认为,细胞因子参与了自身免疫性甲状腺炎(AITD)的发生、发展与转归.体内甲状腺组织肿瘤坏死因子(TNF-a)过多分泌可增强γ-干扰素(IFN-γ)诱导甲状腺滤泡上皮细胞HLA抗原的产生,导致甲状腺自身免疫性损害.本实验观察中药温肾方对自身免疫性甲状腺炎大鼠模型(EAT)TNF-amRNA、IFN-γ mRNA表达及甲状腺自身抗体的影响,探讨温肾方对自身免疫性甲状腺炎治疗作用的机制.     

基于化学成分与肠道菌群探讨消癌解毒方中黄连-乌梅药对的配伍机制

目的 探讨黄连-乌梅药对与消癌解毒方水煎液中部分生物碱类成分的含量差异,并比较药对与全方对小鼠肠道菌群的影响。方法 采用Extend-C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,以0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）进行梯度洗脱,流速0.3 mL/min,柱温35 ℃,进样量2 μL;离子化模式为电喷雾离子化（ESI）,以正离子模式检测,开展方法学验证和含量测定研究。按照给药不同将小鼠分为正常组、全方高浓度组、全方低浓度组、药对高浓度组和药对低浓度组,连续灌胃给药7 d,每组分别收集粪便样本,进行16S rRNA基因测序。结果 建立的含量测定方法在一定浓度范围内线性关系良好,方法学验证结果均符合相关要求,木兰花碱与非洲防己碱在黄连、药对以及全方中的含量分别为:(4.433±0.133)(8.905±0.154) mg/g,（3.545±0.033）（9.170±0.051） mg/g,（5.287±0.038）（13.861±0.690） mg/g。全方组和药对组中拟杆菌门Bacteroides的丰度均高于正常组,而全方组和药对组中厚壁菌门Firmicutes的丰度均低于正常组。药对高浓度组中的疣微菌门Verrucomicrobia和变形菌门Proteobacteria的丰度高于其他组。结论 液质联用方法和相关参数简便、可靠,可用于有关成分的含量检测。与单味药中含量相比,经过药对配伍后,非洲防己碱含量增加,而木兰花碱含量则略有降低;经过全方配伍后,2种成分的含量均增加。此外,肠道菌群实验表明无论是药对还是全方在给药后,会不同程度地影响肠道菌群内部占比改变,其可能对调节肠道系统平衡,具有一定帮助作用,从而为进一步阐释黄连-乌梅在消癌解毒方中配伍机制提供了参考和依据。      

乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的观察乳铁蛋白(Lf)对大鼠成骨细胞增殖分化的影响,初步探讨Lf对成骨细胞的作用机制。方法用不同浓度的Lf干预成骨细胞,在不同时间分别测定细胞数目的增殖、细胞内碱性磷酸酶活性,并用半定量RT-PCR法检测成骨细胞内RANKL/OPG mRNA基因的表达。结果Lf呈时间和浓度依赖性地促进大鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶活性,每组实验在不同时间的差异均有显著的统计学意义(P<0.05),其中400μg/ml组在72h时细胞增殖数目达到最大。在碱性磷酸酶活性方面,400μg/ml组在72h时则有所下降。不同浓度Lf、不同作用时间均能促使成骨细胞中OPG mRNA表达增加,同时抑制RANKL mRNA表达。结论Lf能促进成骨细胞的增殖分化,并且能够调节成骨细胞RANKL/ OPG mRNA表达,从而抑制破骨细胞介导的骨吸收。     

基于高通量测序的植入前遗传学检测技术在1例染色体平衡易位家系中的应用

目的 报道应用基于高通量测序的植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)技术对1例染色体平衡易位家系的胚胎染色体进行分析,探讨了染色体平衡易位夫妇的胚胎整倍体率和形成机制.方法 应用体外受精(in vitro fertilization,IVF)、囊胚培养和基于高通量测序...     

小头畸形-癫痫-发育迟缓综合征1家系遗传学分析并文献复习

目的探讨小头畸形-癫痫-发育迟缓(microcephaly-seizures-development delay, MCSZ)综合征的临床表现和遗传学病因。方法对2018年6月在本院就诊的1个MCSZ家系中患儿及其父母行全基因外显子组测序和生物信息学分析, 将所得的致病性变异用Sanger测序法验证。明确患儿的分子诊断后, 对该家系2020年再妊娠胎儿行产前基因诊断。并通过文献复习, 总结和分析国内外已报道的MCSZ综合征病例的临床特征及遗传学特点。结果 (1)本病例:患儿女性, 8月龄, 因"头围小, 反复抽搐"收入院, 临床表现为小头畸形、多发性癫痫、精神发育迟缓。听觉诱发电位示左侧耳神经通路中度损害, 全外显子组测序发现患儿存在PNKP基因复合杂合变异。其中致病性c.199-10₂03delinsTCTGAGGGGT变异遗传自父亲, 可能致病性c.1505C>T(p.P502>L)变异遗传自母亲, 两变异均为文献未报道的变异。结合临床表现考虑遗传学病因为PNKP基因复合杂合变异。该家系再孕胎儿未遗传来自父母的PNKP基因变异, 夫妇选择继续妊娠。...     

Wee1在小鼠1-细胞期受精卵中的表达和定位

目的 研究Wee1在小鼠1-细胞期受精卵发育全过程(G₁、S、G₂、M期)中的表达和定位,为进一步探究Wee1对小鼠胚胎有丝分裂(主要是G₂/M转换)的作用提供理论依据。方法 应用qRT-PCR和免疫印迹技术分别检测小鼠1-细胞期受精卵在G₁、S、G₂、M不同时期Wee1的表达谱,并利用间接免疫荧光观察Wee1蛋白在1-细胞期受精卵发育全过程中的定位。结果 Wee1 mRNA和蛋白在不同时期的表达水平变化趋势一致：从G₁到G₂期表达水平持续升高(P<0.05),但进入M期后表达水平显著降低(P<0.01)。间接免疫荧光显示：Wee1蛋白在G₁、S期定位于细胞质,在G₂期Wee1蛋白开始向核转位,M期细胞核内Wee1蛋白明显增多。结论 小鼠1-细胞期受精卵的发育伴随Wee1表达水平的改变和Wee1蛋白的核浆转位,提示Wee1表达水平及其蛋白亚细胞定位的改变可能是调节小鼠1-细胞期受...     

一个孤独症谱系障碍核心家系 KIF1A基因错义变异及其蛋白表达和结构分析

目的:报告1个携带 KIF1A基因错义变异的孤独症谱系障碍核心家系,并分析 KIF1A基因的致病变异及其表达蛋白结构。 方法:提取患儿及其双亲外周血DNA,利用全外显子组测序(whole exome sequencing,WES)技术进行测序,并应用Sanger测序法进行验证。对可疑变...