肥胖症儿童脂溶性维生素A、D、E水平及其影响因素

目的调查肥胖症儿童脂溶性维生素A、D、E水平，并分析其影响因素。方法选取2019年1月至2021年4月就诊于西安市儿童医院营养科的273例肥胖症儿童（肥胖症组）为研究对象，同期健康体检的226例正常体重儿童为对照组。对两组儿童进行体格及体成分的测量，并检测血清维生素A、D、E浓度。结果与对照组比较，肥胖症组血清维生素A［（1.32±0.21）μmol/L vs（1.16±0.21）μmol/L］、维生素E［（9.3±1.4）mg/L vs（8.3±1.2）mg/L］水平较高（P<0.001），25羟维生素D［25-hydroxyvitamin D，25(OH)D］水平［（49±22）nmol/L vs（62±24）nmol/L］较低（P<0.001）。在肥胖症组中，边缘型维生素A缺乏率为5.5%（15/273），维生素D缺乏/不足率为56.8%（155/273），维生素E不足率为4.0%（11/273）。控制体重指数和腰身比后，肥胖症儿童维生素A水平与年龄呈正相关（P<0.001），维生素E和25(OH)D水平与年龄呈负相关（P<0.001）。在控制年龄因素后，未发现肥胖症儿童血清维生素A、维生素E、25(OH)D水平与其肥胖程度、体脂百分比、肥胖时长的相关性，但维生素A和维生素E水平与其腰身比呈正相关（P<0.001）。结论肥胖症儿童的血清维生素A和维生素E水平较高，尤其是腹型肥胖者，而血清维生素D营养状况较差，且随着年龄的增长，状况愈差。因此，应关注肥胖症儿童维生素D营养状况并积极补充。     

经一氧化氮吸入治疗的新生儿持续肺动脉高压患儿死亡的早期影响因素分析

目的探索经一氧化氮吸入（inhaled nitric oxide，iNO）治疗的新生儿持续肺动脉高压（persistent pulmonary hypertension of the newborn，PPHN）患儿死亡的早期影响因素，以便于早期识别高危儿。方法回顾性选取2017年7月至2021年3月于南京医科大学附属儿童医院新生儿医疗中心接受iNO治疗的105例PPHN患儿（胎龄≥34周、入院日龄<7 d）为研究对象。收集患儿的一般资料及临床资料，根据出院时临床结局分为存活组（n=79）和死亡组（n=26）。采用单因素及多因素Cox回归分析探讨经iNO治疗的PPHN患儿死亡的影响因素。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线计算独立影响因素预测患儿死亡的截断值。结果105例经iNO治疗的PPHN患儿，其中死亡26例（26/105，24.8%）。多因素Cox回归分析提示，iNO治疗非早期反应（HR=8.500，95%CI：3.024~23.887，P<0.001）、1 min Apgar评分≤3分（HR=10.094，95%CI：2.577~39.534，P=0.001）、入院12 h内最低PaO₂/FiO₂值较低（HR=0.067，95%CI：0.009~0.481，P=0.007）及最低pH值较低（HR=0.049，95%CI：0.004~0.545，P=0.014）是PPHN患儿死亡的独立影响因素。ROC分析显示，入院12 h内最低PaO₂/FiO₂值及最低pH值预测PPHN患儿死亡的截断值分别为50、7.2，灵敏度、特异度分别为84.6%、73.4%及76.9%、65.8%，曲线下面积分别为0.783、0.746。结论需iNO治疗的PPHN患儿病死率高，iNO治疗非早期反应、1 min Apgar评分≤3分、入院12 h内最低PaO₂/FiO₂值<50及最低pH值<7.2为此类患儿死亡的独立影响因素。监测及评估上述指标，将有助于早期识别高危儿，制定治疗策略，以改善PPHN患儿预后。     

超早产儿/超低出生体重儿临床结局的性别差异：一项倾向性评分匹配研究

目的通过倾向性评分匹配方法，探讨性别对超早产儿/超低出生体重儿（extremely preterm infant/extremely low birth weight infant，EPI/ELBWI）临床结局的影响。方法回顾性分析2011年1月1日至2020年12月31日住院的731例EPI或ELBWI的临床资料，将731例EPI/ELBWI分成男婴组与女婴组。通过倾向性评分匹配方法1∶1匹配，匹配变量包括：胎龄、出生体重、放弃积极治疗比例、小于胎龄儿比例、使用肺表面活性物质比例、1 min Apgar评分≤3分比例、机械通气比例、机械通气时间、产前使用疗程不足糖皮质激素比例和妊娠期高血压疾病比例，比较两组患儿住院期间主要并发症的发生率和出院存活率。结果匹配前，男婴组新生儿呼吸窘迫综合征、支气管肺发育不良、重度脑室内出血、脑室周围白质软化、坏死性小肠结肠炎、动脉导管未闭的发生率均显著高于女婴组（P<0.05）；匹配后，男婴组仅支气管肺发育不良的发生率显著高于女婴组（P<0.05）。匹配前后，两组患儿的出院存活率差异均无统计学意义（P>0.05）。结论男婴EPI/ELBWI并发支气管肺发育不良的风险高于女婴，但男婴和女婴EPI/ELBWI的转归相似。     

超声引导下不同部位中心静脉置管在婴幼儿休克中的应用及临床分析

目的分析超声引导下不同部位中心静脉置管在婴幼儿休克中应用的临床特点，探讨在婴幼儿休克中应如何快速选择中心静脉置管部位。方法回顾性收集2016年1月至2020年12月广东医科大学附属东莞儿童医院儿童重症监护室收治的112例诊断为休克并进行中心静脉置管的婴幼儿临床资料，根据是否在超声引导下进行置管分为超声组（70例）及体表定位组（42例），总结分析患儿在超声引导下不同部位置管的应用情况，对各部位置管的一针成功率、总成功率、置管时间及并发症进行比较。结果与体表定位组相比，超声组颈内静脉及股静脉置管的一针成功率增高，置管时间缩短，并发症发生率减少（P<0.05）。超声组中，行颈内静脉置管比例最高（51%，36/70），其次为股静脉（33%，23/70），锁骨下静脉最少（16%，11/70）。超声引导下不同置管部位比较，颈内静脉成功置管时间最短［5.5（5.0，6.5）min］（P<0.05）；不同置管部位的并发症发生率比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论在婴幼儿休克状态下，应用超声引导下行颈内静脉置管可作为临床医生优先选择的置管方式。     

Effects of traditional herbal medicine, Hwaotang, on atherosclerosis using the spontaneous familial hypercholesterolemia model, Kurosawa and Kusanagi-hypercholesterolemic rabbits and the venous thrombosis rats

Hwaotang (HOT), a traditional Korean medicinal formulation, is a dried decoctum of a mixture of seven herbal medicines, consisting of Angelica gigantis Radix, Rehmanniae Radix, Paeoniae Radix, Ciniamomi Cortex, Cnidii Rhizoma, Persicae Semen and Carthami Flos. In the present study, the inhibitory effects and anti thrombic properties of HOT on the progression of atherosclerotic lesions were studied using the spontaneous familial hypercholesterolemia (FH) model, Kurosawa and Kusanagi-hypercholesterolemic (KHC) rabbits and rats. Changes in blood chemistry, pathology and low-density lipoprotein (LDL) oxidation were measured in a control and HOT group. In the control group, the area of atheromatous plaques of the aorta progressed between week 12 (36.65%) and week 14 (46.22%). This progression of atherosclerotic lesions did not occur in the HOT-treated group after 12 (24.24%) and 14 (23.34%) weeks. Antioxidative effects on LDL were seen in the HOT in weeks 12 and 14. HOT improved the hypercholesterolemia in the KHC rabbits. On the other hand, HOT and five of the seven herbs, except Cnidii Rhizoma and Carthami Flos, inhibited the endotoxin-induced hepatic venous thrombosis in high cholesterol diet-treated rats. However, Ciniamomi Cortex showed a very weak inhibitory effect on the endotoxin-induced hepatic venous thrombosis. The extract also inhibited the endotoxin-induced decrease in blood platelets and fibrinogen, and endotoxin-induced increase in fibrin degradation products (FDP) on disseminated intravascular coagulation in normal rats. In conclusion, these results suggest that HOT has inhibitory effects on the development of atheromatous plaque formation in spontaneous FH rabbits. It is also suggested that the antioxidative effects of HOT on LDL led to the beneficial effects observed in this study. The protection by HOT and its herbs on the artificially induced ischemic infarction might be related to their inhibitory effects on disseminated intravascular coagulation, platelet coagulation and thrombotic action.     

IRE1α缺陷通过上调内质网钙稳态蛋白降低软骨细胞的自噬功能

目的探究肌醇依赖性激酶1α（IRE1α）通过调控内质网钙稳态蛋白（CHERP）影响软骨细胞自噬功能的相关机制。方法衣霉素（TM）处理人软骨细胞C28/I2，Western blot检测不同时间点的内质网应激和自噬相关蛋白指标。4μ8c、雷帕霉素（Rapa）处理C28/I2（分为：NC组、4μ8c组、Rapa组、4μ8c+Rapa组），Western blot检测自噬相关蛋白指标。分别从软骨组织特异性ERN1基因敲除小鼠（ERN1 CKO）和对照小鼠（Control）软骨组织分离原代软骨细胞，qPCR检测ERN1及自噬相关蛋白ATG5、ATG7的mRNA水平，Western blot检测IRE1α/p-IRE1α、CHERP表达水平，流式细胞术检测胞内钙离子含量。巴佛洛霉素A1（Bafilomycin A1）处理原代软骨细胞（分为Control组、Control+Bafilomycin A1组、ERN1 CKO组、ERN1 CKO+Bafilomycin A1组），Western blot检测LC3Ⅱ、LC3Ⅰ的表达。自噬双荧光病毒在Rapa处理下检测自噬流（分为Control+Rapa组、ERN1 CKO+ Rapa组）。C28/I2中过表达CHERP与IRE1α，免疫荧光检测自噬水平。结果TM处理C28/I2细胞后，内质网应激相关标志蛋白表达上调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调（P＜0.05），p62表达下调（P＜0.05）。相较对照组，Rapa上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值（P＜0.001），4μ8c+ Rapa组相较Rapa组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低（P＜0.05）。相较于对照组，原代软骨细胞中敲除ERN1/IRE1α后，ERN1（P＜0.01）、ATG5（P＜0.001）、ATG7（P＜0.001）mRNA水平显著下调。IRE1α/p-IRE1α蛋白表达缺失或显著下调（P＜0.01），CHERP蛋白表达上调（P＜0.05），胞内钙离子含量显著上升（P＜0.001）。巴佛洛霉素A1处理原代软骨细胞后，Control+Bafilomycin A1组较Control组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调（P＜0.01），ERN1 CKO+Bafilomycin A1组较ERN1 CKO组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调（P＜0.05）、较Control+Bafilomycin A1组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下降（P＜0.05）。自噬双荧光病毒处理后，ERN1 CKO+Rapa组较Control+Rapa组未淬灭LC3-GFP荧光增强（P＜0.05）。C28/I2细胞中过表达CHERP降低LC3荧光强度，过表达IRE1α增强LC3荧光表达并能部分挽救CHERP导致的荧光降低情况。结论IRE1α缺陷通过上调内质网钙稳态蛋白，升高胞内钙离子含量，进一步导致软骨细胞的自噬功能受损。     

小檗碱通过激活Nrf2-HO-1/GPX4通路抑制小鼠海马神经元HT22细胞的铁死亡

目的探讨小檗碱对于Erastin诱导小鼠海马神经元HT22细胞的铁死亡的保护作用及其可能机制。方法以HT22小鼠海马神经元细胞为研究对象，分为对照组、Erastin模型组、Erastin+30 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/L BBR组。采用CCK-8法、特异性Fe²⁺荧光探针、荧光染料（DAPI）检测和荧光探针（H2DCFH-DA）检测各实验组细胞的增殖情况、活性铁水平、细胞凋亡和活性氧（ROS）变化。RT-qPCR和Western blot分别检测各实验组细胞的Nrf2、HO-1、GPX4 mRNA和蛋白表达情况。以60 μmol BBR的最适浓度来进一步探究其作用机制，分为对照组、Erastin模型组、Erastin+60 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/L BBR+2 μmol Nrf2抑制剂ML385组。通过使用荧光探针和Western blot检测Nrf2抑制剂（ML385）作用后的活性铁的水平、活性氧含量以及Nrf2、HO-1、GPX4蛋白的表达来验证小檗碱调节的Nrf2-HO-1/GPX4通路对Erastin处理的HT22细胞的保护作用。结果0.5 μmol/L Erastin作用于HT22细胞8 h，细胞存活率与对照组相比显著被抑制（P < 0.05）；同时细胞凋亡、ROS以及活性铁含量增加（P < 0.05）。与Erastin组比较，Erastin+30 μmol/L BBR组和Erastin+60 μmol/L BBR组的细胞存活率明显升高（P < 0.05），同时显著降低细胞凋亡、ROS以及活性铁含量（P < 0.05）。小檗碱增加HT22细胞中Nrf2、HO-1、GPX4基因及蛋白的表达量（P < 0.05）。加入Nrf2抑制剂ML385后，Nrf2-HO-1/GPX4通路被抑制，并且ROS以及活性铁含量升高（P < 0.05）。结论Erastin诱导HT22细胞发生铁死亡，小檗碱抑制Erastin诱导的铁死亡，可能机制是激活了Nrf2-HO-1/GPX4通路。     

腺相关病毒衣壳保守区多价抗原肽的原核表达及多克隆抗体制备

目的原核表达和纯化腺相关病毒（AAV）衣壳保守区抗原肽，制备抗AAV衣壳保守区的兔多克隆抗体。方法设计并合成编码AAV衣壳蛋白保守区的DNA，将序列克隆到载体pET30a，获得质粒pET30a-AAV-CR，原核表达并纯化保守区多价抗原肽，考马斯蓝染色法及Western blot法对AAV保守区多价抗原肽进行鉴定。将日本大耳朵白兔分为实验组与对照组（1只/组），实验组注射AAV保守区蛋白制备多克隆抗体，对照组注射PBS，ELISA检测抗体效价，Western blot及细胞免疫荧光法检测抗体应用效果。结果成功构建了表达AAV衣壳保守区抗原肽的质粒pET30a-AAV-CR，表达纯化得到相对分子质量为17000的蛋白质；纯化后的蛋白可在兔体内诱导产生针对AAV衣壳保守区的抗体，且该抗体能广泛性识别AAV1-AAV10衣壳蛋白序列。结论诱导出AAV衣壳保守区蛋白并成功获得了抗AAV衣壳保守区的多克隆抗体，为后续载体开发以及生物学功能研究奠定了基础。     

Successful Treatment of Nephrotic Syndrome Due to Collapsing Focal Segmental Glomerulosclerosis Accompanied by Acute Interstitial Nephritis

A 39-year-old woman was hospitalized for nephrotic syndrome. Laboratory test results showed increased serum creatinine levels and urinary excretions of beta-2-microglobulin, and N-acetyl-beta-D-glucosaminidase. A renal biopsy revealed collapsing focal segmental glomerulosclerosis (FSGS) and acute interstitial nephritis. Despite treatment with pulse steroid followed by oral high-dose glucocorticoids and cyclosporines, heavy proteinuria persisted. After low-density lipoprotein apheresis (LDL-A) therapy was initiated, her proteinuria gradually decreased, leading to complete remission. A repeat renal biopsy after treatment revealed no collapsing glomeruli. Immediate LDL-A should be performed to treat cases of collapsing FSGS poorly responding to other treatments.