Kaempferol stimulates large conductance Ca2+ -activated K+ (BKCa) channels in human umbilical vein endothelial cells via a cAMP/PKA-dependent pathway

BACKGROUND AND PURPOSE: Kaempferol has been shown to possess a vasodilator effect but its mechanism of action remains unclear. In this study, experiments were carried out to study the effect of kaempferol on K+ channels in endothelial cells. EXPERIMENTAL APPROACH: K+ channel activities in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were studied by conventional whole cell and cell-attached patch-clamp electrophysiology. KEY RESULTS: Kaempferol stimulated an outward-rectifying current in HUVECs in a dose-dependent manner with an EC50 value of 2.5+/-0.02 microM. This kaempferol-induced current was abolished by large conductance Ca2+ -activated K+ (BKCa) channel blockers, such as iberiotoxin (IbTX) and charybdotoxin (ChTX), whereas the small conductance Ca2+ -activated K+ (SKCa) channel blocker, apamin, and the voltage-dependent K+ (KV) channel blocker, 4-aminopyridine, had no effect. Cell-attached patches demonstrated that kaempferol increased the open probability of BkCa channels in HUVECs. Clamping intracellular Ca2+ did not prevent kaempferol-induced increases in outward current. In addition, the kaempferol-induced current was diminished by the adenylyl cyclase inhibitor SQ22536, the cAMP antagonist Rp-8-Br-cAMP and the PKA inhibitor KT5720, but was not affected by the guanylyl cyclase inhibitor ODQ, the cGMP antagonist Rp-8-Br-cGMP and the PKG inhibitor KT5823. The activation of BKCa channels by kaempferol caused membrane hyperpolarization of HUVECs. CONCLUSION AND IMPLICATIONS: These results demonstrate that kaempferol activates the opening of BKCa channels in HUVECs via a cAMP/PKA-dependent pathway, resulting in membrane hyperpolarization. This mechanism may partly account for the vasodilator effects of kaempferol.     

基于UPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS技术的酸枣仁化学成分分析及其抗阿尔茨海默病机制的网络药理学研究

目的 通过超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱（UPLC-Q-Exactive-Focus-MS/MS）分析酸枣仁中的化学成分,依据解析的化学成分及中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、本草组鉴数据库（HERB）获取的酸枣仁主要成分结合网络药理学和分子对接技术初步预测其抗阿尔茨海默病（AD）的药效物质基础,筛选出潜在功效成分,预测作用机制。方法 采用UPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS对酸枣仁进行化学成分分析,分别在正、负离子模式下扫描,结合对照品、文献中的碎片离子信息、保留时间进行匹配,确认化学成分。利用TCMSP、HERB数据库获取酸枣仁的主要成分及其对应作用靶点信息;通过GeneCards、OMIM数据库获得AD相关疾病靶点;将酸枣仁主要成分对应靶点与AD靶点取交集,借助String 11.5平台和Cytoscape 3.7.2软件绘制交集基因蛋白质相互作用（PPI）网络;利用DAVID 6.8对核心靶点进行基因本体（GO）功能与京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析,通过微生信云平台对富集结果可视化;借助AutoDock Tools软件对核心成分及关键靶点基因进行分子对接。结果 酸枣仁定性分析中共鉴定出40个化合物,主要包括3个有机酸类、28个黄酮类、8个生物碱类、1个皂苷类;筛选出发挥改善AD作用的核心成分5个,包括拟雌内酯、油酸、山柰酚、乌药碱、酸李碱;酸枣仁改善AD的核心靶点有JUN、AKT1、STAT3、MAPK14、ESR1、IL16等;KEGG通路分析共得到157条通路,其中PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、HIF-1信号通路排名靠前;GO富集分析得到生物过程（BP）条目336个、细胞组分（CC）条目45个、分子功能（MF）42个。分子对接结果显示,酸枣仁的4个核心成分与关键靶点间存在分子结合位点且结合能较强,均小于-20.93 kJ·mol^-1。结论 通过UPLC-Q-Exactive-Focus-MS/MS解析的化学成分结合网络药理学、分子对接预测了酸枣仁是通过多成分、多靶点、多途径来发挥抗AD作用的。     

畲药食凉茶HPLC特征图谱和4种成分含量测定

目的 采用HPLC建立畲药食凉茶的特征图谱,并同时测定4种成分的含量。方法 以芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素和山柰素为对照品;采用Agilent Zorbax SB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,柱温30 ℃;乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1;检测波长360 nm。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对结果进行分析。结果 建立了食凉茶的特征图谱,确定5个共有峰。芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素和山柰素的线性范围分别为4.525~452.8 μg·mL^-1（r=0.999 9）,8.096~809.6 μg·mL^-1（r=1.000 0）,0.654~85.15 μg·mL^-1（r=1.000 0）,2.048~ 136.6 μg·mL^-1 （r=1.000 0）;平均加样回收率分别为100.51%（n=6,RSD=0.43%）,100.19%（n=6,RSD=0.88%）,99.98%（n=6,RSD=0.77%）,100.26%（n=6,RSD=0.69%）。结论 所建立的特征图谱相关性强,可结合4种成分含量测定全面控制畲药食凉茶的质量,为其规范使用提供科学依据。     

Flavonol monoglycosides isolated from the antiviral fractions of Persea americana (Lauraceae) leaf infusion

An infusion of Persea americana leaves (Lauraceae) strongly inhibited herpes simplex virus type 1 (HSV-1), Aujeszky's disease virus (ADV) and adenovirus type 3 (AD3) in cell cultures. Its fractionation, guided by anti-HSV-1 and ADV assays, allowed the isolation and identification of two new flavonol monoglycosides, kaempferol and quercetin 3-O-α-D -arabinopyranosides, along with the known kaempferol 3-O-α-L -rhamnopyranoside (afzelin), quercetin 3-O-α-L -rhamnopyranoside (quercitrin), quercetin 3-O-β-glucopyranoside and quercetin. The known quercetin 3-O-β-galactopyranoside was identified in a mixture. Afzelin and quercetin 3-O-α-D -arabinopyranoside showed higher activity against acyclovir-resistant HSV-1. Chlorogenic acid significantly inhibited the HSV-1 replication without any cytotoxicity. However, all the substances tested were less active than the infusion or fractions. The same substances did not affect ADV replication. Chemical structures were elucidated by the analysis of UV, ¹H and ¹³C NMR data, mainly by APT, homo and heteronuclear COSY experiments. The configuration of the D -arabinose unit, not usual in natural plant products, was established on the basis of the optical rotation of the free sugar obtained after acid hydrolysis. Copyright © 1998 John Wiley & Sons, Ltd.     

RP-HPLC法对元宝枫果翅中3种黄酮苷元的研究

目的研究元宝枫果翅活性与其有效成分的相关性。方法利用反相高效液相色谱法测定不同季节元宝枫果翅中槲皮素、山柰酚和异鼠李素含量。结果不同季节样品中3种黄酮苷元的定量分析结果分别为槲皮素平均回收率99.8%,RSD=0.72%;山柰酚平均回收率为100.8%,RSD=1.09%;异鼠李素平均回收率为102.4%,RSD=1.61%。结论元宝枫果翅中含有中槲皮素、山柰酚和异鼠李素,其含量随季节变化。     

六种僵蚕炮制品的薄层鉴别与含量测定研究

目的:考察不同炮制方法对僵蚕中草酸铵、槲皮素和山奈酚的含量影响。方法:采用薄层色谱法对僵蚕6种炮制品进行薄层鉴别研究;采用高效液相色谱法测定各炮制品中草酸铵、槲皮素和山奈酚的含量。结果:僵蚕各炮制品的薄层色谱未见明显差异,但僵蚕经过炮制后体内草酸铵含量都有不同程度的下降。其中糖麸炒僵蚕的含量最低,而麸炒僵蚕中草酸铵含量下降的最少。僵蚕经过炮制后所含槲皮素与山奈酚的含量变化不大,与生品较为接近,但姜炙僵蚕与姜麸炒僵蚕中槲皮素与山奈酚的含量降低得较为明显。结论:不同炮制方法对僵蚕的化学成分含量有一定程度的影响,但影响幅度不尽相同。并且,不同的炮制方法功效各异,各有所长。为提高临床疗效和便于患者服用,可根据需要对其炮制方法灵活选择。     

中药基于Nrf2/ARE通路改善糖尿病心肌病的研究进展

糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)是糖尿病心血管并发症之一,约30％糖尿病患者会出现心功能障碍,并逐渐发展为DCM,最终导致心力衰竭而死亡.核因子E2相关因子2(nuclear factor NF-E2-related factor 2,Nrf2)是治疗DCM的作用靶点之一,在增强心...     

地骨皮活性成分对高糖致肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质的影响

目的?观察地骨皮中有效成分对高糖刺激的肾小球系膜细胞的增殖以及细胞外基质分泌的影响,研究其对糖尿病肾病的保护机制。方法?体外培养肾小球系膜细胞,分为高糖模型组（葡萄糖浓度为30?mmol/L）,空白对照组（葡萄糖浓度为5.5?mmol/L）,甜菜碱、山奈酚5个浓度剂量组（0.01、0.1、1、10、100?μmol/L）,用MTT法观察系膜细胞增殖情况,ELISA法观察细胞外基质分泌情况。结果?与高糖模型组比较,不同剂量甜菜碱组和山奈酚组,对高糖致肾小球系膜细胞增殖有不同程度的抑制。甜菜碱、山奈酚均能抑制细胞外基质的分泌,与高糖模型组比较有显著性差异（P<0.05~0.01）。结论?地骨皮中有效成分甜菜碱和山奈酚均具有抑制高糖刺激下系膜细胞增殖以及细胞外基质分泌的作用,推测地骨皮中有效成分具有治疗糖尿病肾病的作用。      

HPLC测定凤仙透骨草中的芦丁、槲皮素和山奈酚的含量

目的:建立凤仙透骨草中的芦丁、槲皮素和山奈酚的HPLC含量测定方法.方法:采用Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以乙睛-0.1％冰乙酸为流动相进行线性梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长260 nm.结果:芦丁、槲皮素和山奈酚与其他组份的色谱峰均得到基线分离,加样回收率平均值分别为98.89％,98.39％,98.48％,RSD分别为2.05％,1.51％,1.89％.结论:该方法快速、准确、重复性好,可作为凤仙透骨草质量控制的有效方法.     

一测多评法测定昆仙胶囊中10种黄酮类成分

目的建立一测多评法同时测定昆仙胶囊中10种黄酮类成分的含量,并验证此方法在昆仙胶囊中应用的可行性和适用性。方法采用HPLC法,以金丝桃苷为内参物,建立朝藿苷A、朝藿苷C、朝藿苷B、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山柰酚和宝藿苷I的相对校正因子(fs/i),并利用fs/i计算昆仙胶囊样品中成分的含量,同时用外标法计算各成分的含量,比较两种方法的差异,采用t检验法比较分析昆仙胶囊中10种黄酮类成分的含量。结果朝藿苷B、朝藿苷A、朝藿苷C、淫羊藿苷、木犀草素、槲皮素、川陈皮素、山柰酚和宝藿苷I的fs/i分别为0.756 5、2.199 4、1.232 7、1.008 5、0.635 7、0.576 0、0.487 5、0.545 6、0.675 8。采用一测多评法与外标法得到的10批昆仙胶囊样品含量测定结果 RSD2.0%,无显著差异。结论以金丝桃苷为内参物建立fs/i准确、可行,一测多评法可用于昆仙胶囊的质量评价。