四妙方颗粒剂与汤剂防治非酒精性脂肪性肝病的对比研究

目的明确四妙方防治非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的作用,并比较四妙方颗粒剂与汤剂中主要成分质量分数与防治NAFLD的药效差异。方法 HPLC检测四妙方颗粒剂与汤剂中黄柏碱、木兰花碱、β-蜕皮甾酮、药根碱、巴马汀与小檗碱的质量分数。将C57BL/6小鼠随机分为对照组,模型组,四妙方颗粒剂低、高剂量(10、20 g/kg)组,四妙方汤剂低、高剂量(10、20 g/kg)组,通过高糖高脂饮食建立NAFLD小鼠模型,给予四妙方颗粒剂与汤剂进行干预,检测各组小鼠的体质量、肝脏质量、附睾脂肪质量和血清脂质、肝脏脂质水平;采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠肝组织病理变化。结果四妙方汤剂中6种成分的质量分数均高于颗粒剂,四妙方全方的色谱峰主要来源于黄柏,其余药味的色谱峰较少。与对照组比较,模型组小鼠体质量、肝脏质量、附睾脂肪质量和血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、尿酸水平及丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性及肝脏中三酰甘油(triglycerides,TG)水平均显著升高(P<0.05、0.01),且脂肪严重变性。与模型组比较,四妙方颗粒剂与汤剂均能有效降低小鼠体质量、肝脏质量、附睾脂肪质量及血清中TC、LDL-C、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、尿酸水平及AST、ALT活性及肝脏中三酰甘油(triglycerides,TG)水平(P<0.05、0.01),且汤剂低剂量组药效优于颗粒剂低剂量组;四妙方颗粒剂与汤剂均能减少脂质聚积、脂肪变性,汤剂低剂量组药效优于颗粒剂低剂量组。结论四妙方汤剂中的化学成分质量分数高于颗粒剂,低剂量下汤剂药效优于颗粒剂,高剂量下颗粒剂与汤剂差异较小。     

6种黄连饮片中6种生物碱的RP-HPLC含量测定及与“治消渴”药效学的谱-效关系分析

建立生品、姜炙、醋炙、酒蒸、酒炙、萸炙6种黄连饮片中6种生物碱(盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱)的含量测定方法,并结合药效学结果探索其与药效学研究结果及中医疗效之间的关系。采用Welch XtimateTMC18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以0.1%三乙胺溶液(用碳酸氢铵和氨水调节p H 10)为流动相A,乙腈为流动相B,进行梯度洗脱(0~15 min,10%~25%B;15~25 min,25%~30%B;25~40 min,30%~45%B),流速1.0 m L·min-1,柱温30℃,检测波长270 nm。6种生物碱分别在0.85~16.96 mg·L-1(r=0.999 7),1.25~24.96 mg·L-1(r=0.999 9),2.05~40.96 mg·L-1(r=0.999 9),3.65~72.96 mg·L-1(r=0.999 9),2.88~57.06 mg·L-1(r=0.999 8),13.25~264.96 mg·L-1(r=0.999 6)呈现良好的线性关系,平均加样回收率(n=9)分别为102.4%(RSD 1.2%),101.8%(RSD 1.3%),100.3%(RSD 1.8%),100.7%(RSD 1.8%),101.2%(RSD 1.5%),97.90%(RSD 2.0%)。测定6种黄连饮片共36个批次的6种生物碱的平均质量分数分别为3.55,4.49,9.12,19.17,15.69,62.56 mg·g-1。该文建立含量测定方法准确性高、重复性好,可用于6种黄连饮片中6种生物碱的含量测定。采用主成分分析、分层聚类分析对含量测定及前期药效学研究结果进行数据分析,结果表明酒蒸、酒炙、萸炙3种黄连饮片与生品黄连饮片存在明显差异,酒蒸饮片与生品饮片具有最大的差异,其差异主要与血清甘油三酯(TG)、空腹血糖水平(FBG)有关,另外,盐酸非洲防己碱是6种生物碱成分中影响最大的生物碱成分。酒蒸、酒炙、萸炙3种黄连饮片用于中医临床"治消渴"(防治糖尿病)更有优势,特别是在治疗糖尿病高脂血症方面。     

戊己丸UPLC-MS/MS指纹图谱研究

目的建立戊己丸UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,确定各色谱峰的药材来源,同时对各成分进行定性研究,为其物质基础、质量控制、研究开发和应用提供科学依据。方法采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.05%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱;柱温40℃,体积流量0.4 mL/min,进样量2μL。利用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版"对其进行相似度评价。结果建立了戊己丸UPLC-MS/MS指纹图谱的共有模式,确定了38个共有峰,并根据对照品和参考文献定性指认了9个共有峰分别为盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、黄连碱、表小檗碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯、芍药苷,推断出4个共有峰分别为木兰花碱、芍药内酯苷、格陵兰黄连碱、1-甲基-2-壬基-4(1H)-喹诺酮。对11批由不同产地和品种药材制备的戊己丸的相似度进行了考察,其相似度在0.90以上。结论建立了戊己丸的UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,该分析方法快速、灵敏、简便,为戊己丸的质量控制提供实验依据。     

Effect of jatrorrhizine on delayed gastrointestinal transit in rat postoperative ileus

Objectives Postoperative ileus is major cause of postoperative complication and prolonged hospitalization. Jatrorrhizine, which is a protoberberine alkaloid isolated from the medicinal plants Berberis aristata and Coptis chinensis, has been found to increase contractility of gastric antral and ileum smooth muscles of rat gastrointestinal tract. We have investigated whether jatrorrhizine could offset gastrointestinal transit in rat with postoperative ileus. Methods Postoperative ileus was induced by laparotomy with intestinal manipulation under anaesthesia. Gastrointestinal transit was evaluated by measurement of gastric emptying, geometric centre and the migration of Evans blue. Key findings Postoperative ileus significantly delayed gastric emptying and intestinal transit. Jatrorrhizine dose‐dependently (0.1, 0.3 and 1 mg/kg) offset delayed gastric emptying and intestinal transit (geometric centre and the migration of Evans blue) in postoperative ileus. Pretreatment of animals with atropine inhibited the action of jatrorrhizine on gastric emptying and intestinal transit, but pretreatment of animals with SB204070 did not influence the effect of jatrorrhizine on gastric emptying and intestinal transit in postoperative ileus. Conclusions Jatrorrhizine offset postoperative ileus‐induced delayed gastric emptying and intestinal transit in rats, an action mediated via the cholinergic pathway, but not involving activation of 5‐HT₄ receptors.     

非水毛细管电泳法测定金果榄中巴马汀和药根碱含量

 目的非水毛细管电泳法测定不同产地金果榄药材中巴马汀和药根碱含量。方法在石英毛细管(50.0 cm×75μm)中,以75 mmol·L^-1醋酸铵-0.1%冰醋酸甲醇溶液为电泳介质,运行电压15 kV,柱温25℃,检测波长265 nm。结果巴马汀和药根碱分别在1.99～99.5 mg·L^-1(r²=0.998 5)和2.26～113 mg·L^-1(r²=0.998 5)的范围内线性关系良好;其平均加样回收率分别为101.9%(RSD=4.2%)和100.9%(RSD=3.5%)。结论本实验方法快速简便,准确可靠,适用于金果榄等药材中巴马汀和药根碱的含量测定。     

HPLC法测定香连制剂中盐酸小檗碱、巴马汀和药根碱含量

建立香连制剂中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱含量测定方法。采用高效液相法测定香连片(丸)中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱含量,色谱柱:Diamonsil C18;流动相:0.2 mol.L-1磷酸二氢钠(用磷酸调节pH至3.0)-乙腈(70∶30);流速:1 mL.min-1;柱温:30℃;检测波长:345 nm。盐酸小檗碱在10.2~510 ng范围内线性关系良好,r=0.9997,平均回收率为98.43%,RSD=2.0%;盐酸巴马汀在5.0~250 ng范围内线性关系良好,r=0.9998,平均回收率为98.51%,RSD=2.4%;盐酸药根碱在4.8~240 ng范围内线性关系良好,r=0.9992,平均回收率为97.57%,RSD=2.7%。该方法简便可行、重复性好,可更好评价香连片(丸)质量。     

黄连解毒汤物质基准量值传递分析

目的 阐明黄连解毒汤（Huanglian Jiedu Decoction,HJD）物质基准的关键质量属性,建立HJD物质基准指纹图谱并测定其中盐酸黄连碱、表小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄柏碱、黄芩苷、栀子苷含量及其转移率,为后期HJD的复方制剂研究奠定基础。方法 按古代工艺制备15批物质基准,测定出膏率,建立物质基准的HPLC指纹图谱并进行相似度评价,确定共有峰,同法测定物质基准中8种成分的含量,进行饮片到物质基准量值传递分析。结果 15批HJD物质基准平均出膏率为16.02%,指纹图谱共有18个共有峰,与对照指纹图谱的相似度均大于0.9;指认出8个色谱峰分别为盐酸黄连碱、表小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄柏碱、黄芩苷、栀子苷。各指标成分从饮片到物质基准的转移率分别为盐酸黄连碱0.61%～1.08%,表小檗碱0.14%～0.24%,盐酸巴马汀0.93%～1.52%,盐酸小檗碱4.09%～6.36%,盐酸药根碱0.81%～1.07%,盐酸黄柏碱0.78%～1.06%,黄芩苷7.45%～12.26%,栀子苷0.42%～2.82%。结论 指纹图谱结合出膏...     

基于高分辨质谱数据库的黄连炮制前后生物碱变化规律

目的 构建黄连Coptis chinensis生物碱类成分的高分辨质谱数据库(HR-MS-Database),研究不同炮制方法炮制前后黄连生物碱类化学成分的变化。方法 采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用(UPLC/Q-TOF-MS)技术手段,借助SCIEX公司LibraryView数据库平台,建立黄连生物碱类成分高分辨质谱数据库,并对不同黄连炮制品中炮制前后的生物碱类成分含量进行测定和差异分析。结果 建立黄连生物碱类成分高分辨质谱数据库,包含黄连生物碱类成分31种;对姜黄连、酒黄连、萸黄连及黄连生品4种样品测定结果显示,黄连炮制前后生物碱成分差异明显。黄连经姜炙后,药根碱、表小檗碱、非洲防己碱含量略有上升,黄连碱、小檗碱含量略有下降,巴马汀含量未见改变;萸黄连中药根碱、表小檗碱、小檗碱含量下降,黄连碱、巴马汀及非洲防己碱含量未见变化;而酒黄连中所测定的6种生物碱含量均显著提高(P<0.05)。结论 建立了一种黄连炮制前后生物碱类成分变化规律的快速识别方法,并定量了在黄连炮制前后含量变化显著的6种生物碱,为黄连炮制品的药效物质基础与质量控制标准研究提供参考。     

黄柏不同炮制品中生物碱类成分在肾小管上皮细胞中的摄入差异考察

目的 探讨人肾小管上皮HK-2细胞摄取黄柏Phellodendri Chinensis Cortex中生物碱类成分的情况，以及HK-2细胞摄取黄柏中生物碱类成分的途径，从细胞层面验证黄柏“盐炙入肾”理论。方法 利用UPLC-QqQ-MS技术分析HK-2细胞摄取生黄柏、盐黄柏和酒黄柏中的黄柏碱、木兰花碱、药根碱、小檗红碱和小檗碱5种成分差异，黄柏及其炮制品中5种生物碱类成分随着给药时间的含量变化；以及分析有机阴离子转运蛋白（organic anion transporters,OATs）抑制剂丙磺舒和有机阳离子转运蛋白（organic cation transporters,OCTs）抑制剂四乙基氯化铵对HK-2细胞摄取黄柏及其炮制品中5种生物碱类成分的影响。结果 HK-2细胞对黄柏不同炮制品摄取差异表现为盐黄柏组>生黄柏组>酒黄柏组。抑制剂组HK-2细胞摄取差异主要表现为丙磺舒（OATs抑制剂）组>四乙氯化基铵（OCTs抑制剂）组。结论 黄柏中生物碱成分可以被HK-2细胞摄取，其转运机制主要是OCTs介导的结果。盐炙品生物碱摄取较高，可能是盐炙提高了肾脏摄取型转运蛋白...     

Jatrorrhizine ameliorates Schwann cell myelination via inhibiting HDAC3 ability to recruit Atxn2l for regulating the NRG1-ErbB2-PI3K-AKT pathway in diabetic peripheral neuropathy mice

Diabetic peripheral neuropathy (DPN) is a chronic complication associated with nerve dysfunction and uncontrolled hyperglycemia. Unfortunately, due to its complicated etiology, there has been no successful therapy for DPN. Our research recently revealed that jatrorrhizine (JAT), one of the active constituents of Rhizoma Coptidis, remarkably ameliorated DPN. This work highlighted the potential mechanism through which JAT relieves DPN using db/db mice. The results indicated that JAT treatment significantly decreased the threshold for thermal and mechanical stimuli and increased nerve conduction velocity. Histopathological analysis revealed that JAT significantly increased the number of sciatic nerve fibers and axons, myelin thickness, and axonal diameters. Additionally, JAT markedly elevated the expression of myelination-associated proteins (MBP, MPZ, and Pmp22). The screening of histone deacetylases (HDAC) determined that histone deacetylase 3 (HDAC3) is an excellent target for JAT-induced myelination enhancement. Liquid chromatography–mass spectrometry—(MS)/MS and coimmunoprecipitation analyses further confirmed that HDAC3 antagonizes the NRG1-ErbB2-PI3K-AKT signaling axis by interacting with Atxn2l to augment SCs myelination. Thus, JAT ameliorates SCs myelination in DPN mice via inhibiting the recruitment of Atxn2l by HDAC3 to regulate the NRG1-ErbB2-PI3K-AKT pathway.