LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中4种黄连生物碱的含量

目的: 建立LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中黄连碱、药根碱、巴马汀和小檗碱含量的方法。 方法: 采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm),流动相乙腈-水(含2 mmoL乙酸铵和0.05%甲酸),流速0.3 mL·min^-1,柱温30 ℃,以士的宁为内标,血浆样品用4倍量乙腈萃取并沉淀蛋白,用电喷雾离子化(ESI)和正离子多离子反应监测(MRM)模式检测,选择离子对为药根碱m/z 338.227→m/z 322.824;黄连碱m/z 320.244→m/z 291.996;巴马汀:m/z 352.243→m/z 308.016;小檗碱:m/z 336.227→m/z 277.981;士的宁:m/z 335.264→m/z 184.017。 结果: 药根碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的线性范围分别为1.01~505,1.06~530,1.13~565,1.07~535 μg·L^-1;定量下限分别为0.539 2,0.646 3,0.761 5,0.197 1 μg·L^-1; 平均回收率分别为103.90%,101.50%,101.58%,115.54%;日内和日间精密度、稳定性的RSD均<10%。 结论: 建立的方法准确、灵敏、特异、简便,适用于大鼠血浆中黄连碱、药根碱、巴马汀和小檗碱的同时测定及药动学研究。     

LC-MS-MS测定黄连解毒汤中3种生物碱在大鼠血清的含量及其药代动力学研究

目的:建立灵敏、特异、准确、可靠的药根碱、巴马汀、小檗碱在大鼠血清中液质联用(LC-MS-MS)分析方法,用于黄连解毒汤中3种生物碱在正常大鼠体内药代动力学研究.方法:优化药根碱、巴马汀、小檗碱及内标延胡索乙素质谱检测条件,确定相关条件并开展方法学考察.正常大鼠灌胃给予黄连解毒汤,经时取血,样品经处理后将该方法用于3种成分的测定.DAS药代动力学软件拟合房室模型,计算药动参数.结果:在ESI(+)离子化条件下采用MRM工作模式,用,m/z 338～322,351.9～308,336-319.8来分别检测药根碱、巴马汀、小檗碱,同时以m/z 356.1～192.1来检测内标延胡索乙素.药根碱在0.2～25μg·L~(-1)、巴马汀、小檗碱在O.4～50μg·L~(-1)呈良好线性关系.3种生物碱在高、中、低3个浓度的准确度、精密度、稳定性等均符合要求.药根碱、巴马汀、小檗碱在正常大鼠体内药动学过程符合一室开放模型.结论:应用LC-Ms-s技术建立了测定药根碱、巴马汀、小檗碱血药浓度的方法,并成功应用于黄连解毒汤正常大鼠体内这3个成分的药动学研究,为中药复方药动学研究提供了可以借鉴的分析方法.     

黄藤中巴马汀与药根碱在大鼠体内药动学及口服生物利用度的研究

该文通过灌胃和尾静脉2种方式对大鼠给予黄藤总生物碱,采用RP-HPLC测定大鼠血浆中巴马汀与药根碱的浓度变化后,通过3P97软件计算巴马汀与药根碱的药代动力学参数和口服生物利用度。大鼠经灌胃与尾静脉2种方式给予黄藤总生物碱60 mg·kg~(-1)后,测得的主要药代动力学参数如下:灌胃给药组中巴马汀和药根碱的Cmax分别为(0.91±0.06),(0.70±0.08)mg·L~(-1),tmax分别为(35.24±0.83),(47.76±1.24)min,t1/2分别为(187.03±1.53),(105.64±16.99)min,AUC分别为(280.30±18.69),(144.36±1.06)mg·min·L~(-1);静脉注射给药组中巴马汀和药根碱的t1/2分别为(172.18±12.38),(147.26±1.82)min,AUC分别为(2 553.14±214.91),(328.83±10.81)mg·min·L~(-1)。巴马汀的口服生物利用度为10.98%,药根碱的口服生物利用度为43.90%。     

云南青牛胆块根的化学成分研究

目的对云南青牛胆块根的化学成分进行研究。方法用常压硅胶柱色谱、反相色谱、薄层色谱及Sepha-dex LH-20柱色谱法分离,根据理化性质和波谱数据鉴定其结构。结果分离得到11个化合物,分别鉴定为古伦宾(columbin,1)、非洲防己苷C(pal matoside C,2)、去氧黄藤苦素(绿白黄藤素,fibleucin,3)、巴马亭(pal matine,4)、药根碱(jatrorrhizine,5)、非洲防己碱(columbamine,6)、20-hydroxyecdysone(7)、abutasterone(8)、2-deoxy-20-hydroxyecdysone3-O-β-D-glucopyranoside(9)、(+)-lyoniresinol-2α-O-β-D-glucopyranoside(10)和α-D-glucopyrano-syl-(2→1)-α-D-glucopyranoside(11)。结论所有化合物均为首次从云南青牛胆中分离得到。     

CYP450 1A2 and multiple UGT1A isoforms are responsible for jatrorrhizine metabolism in human liver microsomes

Jatrorrhizine, one of the protoberberine alkaloids derived from the plant Coptis chinensis, is expected to be developed as a new gastric prokinetic drug, but its metabolic characteristics in humans remain unknown. This study characterized the phase I and phase II metabolites, metabolic kinetics, and cytochrome P450 (CYP) and UDP‐glucuronosyltransferase (UGT) enzymes responsible for the metabolism of jatrorrhizine in human liver microsomes (HLMs). Chemical inhibition in HLMs and metabolism by recombinant human CYP or UGT enzymes were employed to determine the key metabolic enzyme subtypes. In HLMs, demethyleneberberine (demethylated product) and jatrorrhizine glucuronide were identified as the phase I and phase II metabolites, respectively. The enzyme kinetics for both demethylation and glucuronidation were fitted to the Michaelis–Menten equation. Demethylation was inhibited significantly by furafylline and predominantly catalysed by recombinant CYP1A2, whereas glucuronidation was inhibited by silibinin, quercetin, as well as 1‐naphthol and catalysed by recombinant UGT1A1, UGT1A3, UGT1A7, UGT1A8, UGT1A9 and UGT1A10. These results showed that jatrorrhizine is metabolized by human CYP1A2 and multiple UGT1A isoforms. Copyright © 2013 John Wiley & Sons, Ltd.     

黄连与吴茱萸不同配比中黄连主要生物碱在家兔体内药动学研究

目的:采用LC/MS法测定家兔血浆中小檗碱、巴马汀及药根碱含量,并探讨其在家兔体内的药动学过程.方法:家兔分成3组,分别口服给予不同配比黄连吴茱萸0.84,1.26,2.94 g·kg-1后不同时间点采血,LC-MS法测定血药浓度,并计算其药动学参数.结果:家兔口服给予不同配比黄连吴茱萸0.84,1.26,2.94 g.kg-1后,用房室模型计算药动学参数,小檗碱的AUC0_t平均值为3 762,4 456,4 823 μg·L-1·min -;t1/2α平均值为51.33,38.93,39.02 min;t1/2β平均值为6.69×106,0.45×106,4.77 ×106min;Cmax平均值为6.47,6.65,7.64 μg·L-1;tmax均为90 min.巴马汀的AUC0_1平均值为2 291,2 635,3 069 μg·L-1·min-t;t1/2α平均值43.16,46.95,50.57 min;t1/2β平均值3440,3 598,2 788 min; Cmax平均值为3.41,4.83,5.32μg·L-1;tmax均为90 min.药根碱的AUC0-t平均值为521,429,806μg·L-1·min-1;t1/2α平均值为59.53,254.06,43.42 min;tt/2β平均值为9 700,259,1 348 min;Cmax平均值为0.78,1.16,1.51μg·L-1;Tmax均为90 min.结论:小檗碱、巴马汀药动学变化趋势较为相似,峰值血药浓度和生物利用度均随黄连配比的增加而增加,而药根碱无明确变化趋势.     

高效液相色谱法测定二妙丸中盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量

 目的建立同时测定二妙丸中盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量的高效液相色谱方法。方法采用AgilentExtend C₁₈色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以水-乙腈(55∶45,每100 mL中含磷酸二氢钾0.34 g,十二烷基硫酸钠0.17 g)为流动相,紫外检测波长345 nm,柱温35℃,流速1 mL·min^-1。结果盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的理论塔板数分别为6 085,6 995和6 970。盐酸药根碱回归方程为Y=141 547X-7 456.9,r=0.999 1,线性范围6.1～122 ng;盐酸巴马汀回归方程为Y=93 047X+47 140,r=0.999 5,线性范围0.128～1.28μg;盐酸小檗碱回归方程为Y=86 106X+87 243,r=0.999 6,线性范围0.12～1.2μg。3组分的平均回收率分别为99.69%,100.23%和99.32%,RSD分别为3.97%,2.04%和2.25%(n=6)。结论该法操作简单,可以同时测定盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量,精密度高,重复性好,检测快速,定量准确,可用于二妙丸的质量控制。     

HPLC法测定抗妇炎胶囊中木兰花碱、黄柏碱、药根碱、巴马汀、小檗碱、槐果碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱和氧化苦参碱

目的 采用高效液相色谱（HPLC）法同时测定抗妇炎胶囊中木兰花碱、黄柏碱、药根碱、巴马汀、小檗碱、槐果碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱和氧化苦参碱10种活性成分。方法 采用InerSustain AQ-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相A：乙腈–无水乙醇（80∶20）,流动相B：0.1%磷酸溶液,梯度洗脱,检测波长220 nm,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,进样量10 μL。结果 木兰花碱、黄柏碱、药根碱、巴马汀、小檗碱、槐果碱、苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱和氧化苦参碱分别在2.69～134.50、1.95～97.50、0.63～31.50、0.86～43.00、11.95～597.50、0.59～29.50、6.08～304.00、4.85～242.50、1.66～83.00、19.79～989.50 μg/mL线性关系良好（r≥0.999 3）;平均回收率分别为99.11%、98.23%、96.95%、97.78%、100.02%、97.21%、99.66%、99.52%、98.81%、100.08%,RSD值分别为1.04%、1.23%、1.37%、1.65%、0.70%、1.28%、0.65%、0.81%、1.11%、0.63%。结论 建立的HPLC法可用于抗妇炎胶囊中10种活性成分的测定,作为抗妇炎胶囊质量控制方法。     

响应面法优化盐关黄柏炮制工艺及其成分与色度相关性分析

目的 优化盐关黄柏salt-processed Phellodendri Amurensis Cortex炮制工艺,探讨盐关黄柏化学成分含量变化与色度值的相关性。方法 使用Hypers11 BDS C₁₈色谱柱,0.1%磷酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱;柱温为25 ℃;体积流量为1.0 mL/min;检测波长为208 nm;进样量为10 μL;采用HPLC法测定盐关黄柏有效成分含量。以盐水量、炒制时间、炒制温度为影响因素,黄柏碱、木兰花碱、药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、柠檬苦素的含量为评价指标,采用熵权法计算各指标权重,得到综合评分,利用Design-Expert 12.0软件,Box-Behnken设计-响应面法优化炮制工艺,并测定响应面法项下不同工艺参数的17份样品色度值,对其成分与色度值进行Pearson相关性分析及回归分析。结果 盐关黄柏最佳炮制工艺为每200 g关黄柏饮片加6.67%盐水60 mL、炒制温度为140 ℃、炒制时间为30 min。盐关黄柏中黄柏碱、木兰花碱、药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、柠檬苦素含量与色度值L^*（代表颜色明、暗）值呈负相关,与色度值a^*（代表颜色红、绿色度）、b^*（代表颜色黄、蓝色度）值均呈正相关。结论 优选的炮制工艺稳定可行,且盐关黄柏化学成分与色度有显著相关性,可通过外观色泽初步评价盐关黄柏的品质,对传统中药炮制工艺及其质量评价研究具有一定的参考价值。     

HPCE内标法比较戊己丸不同汤剂中4种有效成分量的差异

目的 通过毛细管区带电泳（HPCE）内标法,比较戊己丸传统汤剂、配方颗粒汤剂、复方颗粒汤剂中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、芍药苷成分量差异。方法 采用HPCE法,以50 mmol/L硼砂缓冲液-甲醇（2：1）的溶液作为缓冲液,工作电压为25 kV,压力进样5 kPa×15 s,电解质封口：5 kPa×10 s;柱温15 ℃。结果 该方法简便、准确,其中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱3种生物碱的量在配方颗粒汤剂中明显高于传统汤剂与复方颗粒汤剂,芍药苷则是在传统汤剂中量最高。结论 本法对戊己丸配方和复方颗粒剂在临床的推广以及质量控制具有指导价值。