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991.
目的获取番茄果实特异性E8启动子基因,为实现外源基因在转基因番茄中果实特异性表达做准备。方法培养中蔬5号(Zhongshu No.5)番茄幼苗, 采集叶片,用Omega公司的植物基因组提取试剂盒提取番茄基因组DNA;设计引物,从基因组中通过PCR扩增获得番茄果实特异性E81.1和E82.2启动子基因;克隆进pGEM-T载体,酶切鉴定;送上海基康公司测序;序列分析。结果从番茄基因组DNA中PCR扩增得到预期大小的启动子片段;构建重组pGEM-T-E81.1和pGEM-T-E82.2载体,经酶切证实具有与目标片段长度相符的插入片段;测序结果分析显示:番茄果实特异性E8启动子序列高度保守,所获得的Zhongshu No.5 E82.2启动子DNA序列与Deikman报道的Cherry种的E82.2启动子同源性为99%, 登陆GenBank, ID号为AF515784。结论成功获得Zhongshu No.5番茄果实特异性E81.1、E82.2启动子基因,为下一步转基因番茄口服疫苗的研制奠定了一定的工作基础。 相似文献
992.
HLA G分子是一种非经典HLA Ⅰ类抗原 ,相对于经典的Ⅰ类抗原 ,它的组织分布非常局限 ,具有有限的多态性。它的表达调控与经典Ⅰ类抗原存在着很大的差异 ,HLA G基因内经典Ⅰ类基因反式活化的3个主要元件增强子A、ISRE和SXY均发生变异 ,导致NF κB、IRF1、CⅡTA介导的反式激活途径对HLA G基因不能发挥作用。最早在母胎界面发现存在HLA G分子表达 ,它可以与NK细胞和CTL表面相应的杀伤细胞抑制性受体 (KIR)结合 ,从而抑制它们的杀伤作用 ,这可能是母胎耐受的重要机制。近来的研究表明HLA G分子还可表达于少数类型肿瘤细胞、一些受到感染的细胞和一些正常细胞。它的表达调控及其可能的功能是近来的研究热点。 相似文献
993.
PAI-1启动子区4G/5G基因多态性对血浆PAI-1水平影响 总被引:1,自引:0,他引:1
纤溶酶原活化剂抑制物 1(Plasminogenactivitorinhibitor 1,PAI 1)是丝氨酸蛋白酶抑制剂 (SERPIN)家族成员之一 ,是纤溶系统的主要抑制物 ,可迅速、有效地抑制u PA ,t PA的活性。血浆PAI 1水平变化是决定血浆纤溶活性的重要因素 ,是血栓性疾病的一个危险因子。PAI 1基因全长 12 .3kb ,包含 9个外显子 ,8个内含子。PAI 1基因的表达受多种因素调节 ,大量临床研究发现 ,PAI 1基因的启动子区 4G 5G单核苷酸多态性与心肌梗死 ,脑梗死 ,深部静脉血栓等血栓性疾病有相关性。但PAI… 相似文献
994.
目的:构建血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)Flt-1和KDR特异性短发夹环RNA(ShRNA)真核表达载体。方法:采用人U6SnRNA启动子,分别把被9bp序列间隔的19bp长短的Flt-1和KDR靶序列的反向重复序列,置于pEGFP-C1质粒载体中,分别构建成Flt-1和KDR短发夹环RNA,产生重组质粒pEGFP-C1/U6/Flt-1及pEGFP-C1/U6/KDR。分别用Pst和Sal Ⅰ酶切鉴定;并将经酶切鉴定后的重组质粒作测序分析。结果:VEGF受体Flt-1和KDR的ShRNA片段被成功克隆进pEGFP-C1质粒中,SalⅠ酶切鉴定可切出400bp大小的片段,DNA测序分析显示,重组质粒ShRNA编码序列与设计片断的序列完全一致。结论:针对Flt-1和KDR的特异性ShRNA真核表达载体PEGF/U6/Fit-1及PEGF/U6/KDR的成功构建,为进一步研究其基因功能打下了基础。 相似文献
995.
使用热休克蛋白基因启动子调控靶基因在肿瘤局部表达 总被引:5,自引:0,他引:5
目的:利用人热休克蛋白基因启动子结合加热选择性诱导目的基因在肿瘤局部表达,建立肿瘤基因治疗新方法。方法:分离不同大小的人热休克蛋白70基因5’端调控顺序作为启动子,以绿色荧光蛋白(GFP)作报告基因,构建热诱导型GFP表达质粒,转染体外培养的肿瘤细胞,或将稳定转导GFP表达质粒的肿瘤细胞移植到大鼠皮窗内,或将热诱导型GFP腺病毒注射到肿瘤内,加热后直接利用荧光显微镜观察GFP表达水平。结果:400bp人热休克蛋白70基因5’端调控顺序背景表达水平低,加热后可被显著激活,能作为启子有效驱动下游目的基因的表达,GFP作报告基因使体内外肿瘤细胞内目的基因的表达水平仅通过荧光显微镜便能直接观察到。结论:利用热诱导型启子结合加热能选择性诱导目的基因在肿瘤局部表达,为肿瘤基因治疗提供了一种新方法。 相似文献
996.
目的观察肝细胞生长因子(HGF)对大鼠系膜细胞增殖及对TGF—β1启动子活性的作用。方法应用MTT法观察HGF(0、0.1、1.0、1,0和100.0ng/mL)对大鼠系膜细胞增殖的影响;构建含不同长度人TGF—β1基因启动子片段的重组体phTGF2.14、phTGF1、12,以氯霉素乙酰基转移酶(CAT)为报告基因,并利用脂质体法将其转染至大鼠系膜细胞中,ELISA方法检测报告基因CAT的活性,以观察不同浓度的HGF(1.0、10、0ng/mL)对TGF—β1启动子活性的作用。结果大鼠系膜细胞经不同浓度的HGF干预后,各实验组与对照组相比细胞增殖水平差异无显著性,P〉0.05。在系膜细胞中,HGF的浓度分剐为1.0和10、0ng/mL时对重组体phTGF2、14及phTGF1、12的表达活性无抑制作用。结论HGF不能直接抑制大鼠系膜细胞增殖。在系膜细胞中HGF对TGF—β1启动子的表达活性无作用,提示其桔抗TGF—β1生物学作用的靶点并不是发生在基因转录水平。 相似文献
997.
增强型自杀基因载体治疗宫颈癌的体外实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨运用增强子增强hTERT启动子转录活性后,调控双自杀融合基因CDTK载体对人宫颈癌HeLa细胞的体外杀伤作用。方法将SV40增强子、CMV增强子、CMV增强子/启动子及SV40-CMV双增强子分别与hTERT启动子组合构建成报告基因载体。转染HeLa细胞后用双荧光素酶系统分析其活性差异;然后构建pHr—SCT/CDTKG治疗载体转染HeLa细胞,用流式细胞仅检测转染效率,RT-PCR检测融合自杀基因mRNA表达,HPLC检测5-Fu浓度,MTT分析载体杀瘤的效果。结果HeLa细胞中增强子能使hTERT启动子活性提高6-13倍,其中SV40-CMV双增强子/hTERT启动子的活性最高,达到CMV增强子/启动子的近3倍;体外转染pHr—SCT/CDTKG后可检测到cDTK的mRNA的表达;细胞上清中5-Fu最高浓度为50.83ug/mL;当5-FC浓度为200ug/mL、GCV浓度为10ug/mL时,HeLa细胞的相对细胞存活率为48.7%。结论SV40-CMV双增强子联合hTERT启动子能高效靶向的调控CDTK融合自杀基因杀伤宫颈癌细胞,因而是一种很有前景的基因治疗宫颈癌的策略。 相似文献
998.
子宫内膜癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在女性中继乳腺癌、肺癌和大肠癌之后居第4位.近20年,子宫内膜癌在世界范围内的发病率呈上升趋势.从分子水平探讨子宫内膜癌的发病机制,是近年来妇科肿瘤研究中的热点.现有研究证明,DNA甲基化是抑癌基因失活的第3种机制,而且在某些情况下是抑癌基因失活的惟一机制.为此,我们对子宫内腊癌组织中THBS1基因启动子区哉CpG岛的甲基化(简称启动子甲基化)状况进行栓测,以探讨其他子宫内腊癌的发生、发展中的作用. 相似文献
999.
hTERT-siRNA抑制胆囊癌细胞端粒酶活性及增殖运动的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:了解hTERT-siRNA对GBC-SD细胞代谢、侵袭和端粒酶活性、hTERT mRNA、hTERT蛋白、β-catenin mRNA、-βcatenin蛋白的作用,并探讨其相关机制。方法:在质粒pGCsi-H1/GFP-hTERT干扰后,采用端粒酶TRAP、半定量RT-PCR和Western blot方法检测胆囊癌细胞GBC-SD端粒酶活性、hTERT基因和-βcatenin基因mRNA、蛋白质表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)光吸收法检测琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、运用Transwell小室了解癌细胞侵袭情况。结果:pGCsi-H1/GFP-hTERT对GBC-SD端粒酶活性、SDH活性、侵袭、hTERT mRNA、hTERT蛋白均有抑制作用并随浓度升高而增强。pGCsi-H1/NEGative对上述指标无明显抑制作用,与pGCsi-H1/GFP-hTERT抑制作用比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:pGCsi-H1/GFP-hTERT可以抑制端粒酶、SDH活性及其侵袭力,其机制与hTERT mRNA及蛋白表达降低有关。 相似文献
1000.
目的:探讨BRCA1基因启动子甲基化对BRCA1蛋白表达的影响,与散发性乳腺癌发病之间的关系。方法:采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测51例散发的乳腺浸润性导管癌和10例乳腺良性组织的BRCA1基因启动子甲基化状态,免疫组织化学SP法检测相应组织的石蜡标本BRCA1蛋白表达水平。结果:10例乳腺良性组织中均未检测到BRCA1启动子的异常甲基化,结合免疫组织化学检测,BRCA1蛋白均在细胞核阳性表达,其中70%为强阳性表达;在51例散发性乳腺浸润性导管癌组织中检测到7例BRCA1启动子发生异常甲基化,甲基化比例为13.73%(7/51);其余44例(44/51,86.27%)未检测到BRCA1启动子甲基化。 相似文献