加味酸枣仁汤对高中生失眠症的治疗作用以及5-HTTLPR基因多态性对疗效的影响

目的 探讨加味酸枣仁汤对高中生失眠症的疗效以及5-羟色胺转运体启动子区域(serotonin transporter-linked promoter region,5-HTTLPR)基因多态性与疗效的关系。 方法 收集失眠症高中生对照组50例和加味酸枣仁汤组47例。对照组仅调整作息时间,加味酸枣仁汤组同时给予加味酸枣仁汤1周。测定治疗前后匹兹堡睡眠质量指数(PSQI),用配对t检验比较差异。采集血液,测定5-HTTLPR基因型,用χ2检验分析与疗效的关系。 结果 加味酸枣仁汤治疗后,显著降低主观睡眠质量(2.17±0.38 vs. 0.77±0.48)、入睡时间(2.11±0.37 vs. 0.68±0.52)、睡眠时间(1.43±0.50 vs. 0.89±0.37)、睡眠效率(1.51±0.51 vs. 0.87±0.40)、睡眠障碍(1.40±0.54 vs. 0.85±0.42)、日间功能障碍(1.70±0.46 vs. 0.89±0.37)以及总分(10.32±1.07 vs. 4.96±0.95),均P＜0.001;该组治疗有效率72.34%(34/47)明显高于对照组6.00%(3/50),差异有统计学意义(P＜0.001);显效、有效患者LL基因型频率和L等位基因频率均高于无效者(P=0.007和P＜0.001)。 结论 加味酸枣仁汤对高中生失眠症有疗效,并受5-HTTLPR基因型影响。      

泛素水解酶22调控丝裂原活化蛋白激酶激酶6基因的转录活性

目的：克隆丝裂原活化蛋白激酶激酶6(mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)基因启动子,研究泛 素水解酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)对MKK6转录活性的调控作用。方法：采用PCR扩增MKK6基因启动 子片段,并以该片段为模板对USP22结合位点进行定点突变,将野生型与突变型启动子片段定向插入荧光素酶表达 载体pGL3-Basic;用重组载体与内参质粒pRL-TK共转染HeLa细胞,行双荧光素酶活性检测以确定其转录活性;利用 染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验观察USP22蛋白与MKK6启动子是否存在直接的结合;下 调USP22表达后,检测MKK6转录活性的变化。结果：成功扩增MKK6启动子及其突变体并构建荧光素酶表达载体; USP22结合位点的突变导致该启动子活性在HeLa细胞中明显降低(P<0.05);USP22与MKK6启动子在细胞中存在直接结 合;抑制USP22的表达导致MKK6转录水平明显下降(P<0.05)。结论：在HeLa细胞中,USP22有效地调控MKK6基因的 转录。     

人cGAS 基因启动子的克隆鉴定及功能初探

目的：构建人环鸟苷酸?腺苷酸合成酶（cyclic guanosine monophosphate?adenosine monophosphate synthase,cGAS）基因启动子,确认其活性,进而对转录调控机制进行初步探究。方法：采用 PCR 方法扩增人cGAS 基因 5′上游 1 254 bp（-1 178~+76 bp）的片段,酶切后连接到pGL3?basic 质粒,以该质粒为模板合成不同长度的启动子质粒。通过双荧光素酶报告基因实验验证不同质粒在Hela细胞中的活性,利用生物信息学方法预测启动子区存在的转录因子结合位点。通过点突变实验验证潜在的转录因子结合位点。结果：人cGAS启动子质粒初步构建成功。转染后,cGAS 启动子重组质粒的相对荧光素酶活性增加（P＜0.05）。人cGAS近端启动子区域（-414~+76 bp）经生物信息学软件分析可能含有 Sp1、CREB、USF1、RAP1、C?JUN、OCT?1等转录因子的结合位点。点突变实验证实Sp1、CREB正向调控该启动子区域。结论：人cGAS近端启动子区域（-414~+76 bp）存在较强的启动子活性,该区域含有多个潜在的转录因子结合位点。转录因子Sp1、CREB调控人cGAS启动子区。     

人FAT1基因启动子的克隆鉴定及其功能浅析

目的：克隆人脂肪非典型钙黏蛋白1（FAT atypical cadherin 1,FAT1）基因启动子,找到核心启动子区域并对其转录调控机制进行初步分析。方法：通过PCR方法获得人FAT1基因5′上游1 163 bp（-1 029~+134 bp）的片段,亚克隆至pGL3?basic载体;通过步移缺失构建不同缺失片段的重组质粒。双荧光素酶报告活性分析检测各重组质粒在A549细胞和HEK293T细胞中的活性,找到核心启动子区域。利用生物信息学方法预测核心区域的转录因子结合位点。结果：经测序、酶切鉴定,成功构建了人FAT1启动子荧光素酶活性报告基因重组质粒。与pGL3?basic质粒相比,人FAT1启动子重组质粒的相对荧光素酶活性增加（P < 0.05）。通过生物信息学软件预测人FAT1启动子区域（-233~-110 bp）可能含有TFAP2C、KLF5等转录因子结合位点。结论：成功构建人FAT1启动子不同缺失片段的荧光素酶报告基因重组质粒。通过荧光素酶活性比较,推测人FAT1的核心启动子区域位于-233~+134 bp区域,其中可能含有若干转录因子结合位点。     

甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR检测人精浆游离DNA睾丸和附睾特异性甲基化启动子

目的:建立检测精浆游离DNA(cfsDNA)启动子甲基化水平的甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR(MeDIP-qPCR)方法。方法:提取精液参数正常(6例)和输精管结扎(6例)男性的cfsDNA,将两组不同个体的cfsDNA分别进行混合,超声处理后形成DNA片段,通过MeDIP分离甲基化DNA片段,然后用qPCR方法检测启动子甲基化水平。结果:精液参数正常组的PRAME、PEG10、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4、DAZ1和CLPB启动子甲基化水平分别为14.93%、2.64%、0.69%、2.66%、17.50%、21.10%、5.98%、2.28%、13.50%和3.86%,明显低于输精管结扎组的121.25%、73.62%、16.25%、42.90%、76.74%、112.40%、59.79%、25.85%、91.90%和64.53%。其中,PRAME、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4和DAZ1等8个启动子MeDIP-qPCR的检测结果与启动子甲基化芯片结果一致。结论:通过MeDIP-qPCR方法可以定量检测到cfsDNA中的特异性启动子甲基化,为确定cfsDNA中睾丸和附睾特异性甲基化启动子提供了有效途径。     

Egr-1启动子调控的造血因子基因疗法对SCID小鼠辐射防护的初步探讨

目的 探讨辐射诱导启动子调控的造血因子基因表达对照射后造血保护的作用。方法 将构建的携带有Egr-1启动子的Flt3配基（FL）cDNA和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）cDNA双顺反子表达载体导入基质细胞后，联合人CD34^ 细胞输入经亚致死剂量照射的重症联合免疫缺陷（SCID）小鼠体内，观察外周血象动态改变和人造血细胞及其基质细胞植入的变化。结果 实验组与对照组相比外周血白细胞下降幅度明显减轻，恢复加快，骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞，而各组间骨髓中CD45^ 细胞、CD34^ 细胞、CFU－GM及骨髓有核细胞计数差异无显著性。结论 Egr-1启动子调控的造血因子基因疗法具有一定的辐射造血保护作用。     

利用杆状病毒早期启动子在昆虫细胞中持续表达人β—干扰素

在含苜蓿尺蠖核多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）早期基因启动子的载体ｐＡｃＩＥ１中，插入人β－干扰素（ＨｕＩＦＮ－β）基因，构建成转移载体ｐＩＥ１－ＩＢ；ｐＩＥ１－ＩＢ与含新霉素抗性基因（ＮＥＯ＾ｒ）的质粒ｐＩＥ１－ＮＥＯ共转染秋粘虫细胞（Ｓｆ９细胞），使ＨｕＩＦＮ－β基因和ＮＥＯ＾ｒ基因整合到细胞基因组上产生转化细胞，含Ｇ４１８的培基分离新霉素抗性克隆，并增殖传代；转化细胞株传至５０代以上，不同传代水平细     

基于ADC和增强MRI的影像组学模型预测低级别胶质瘤TERT启动子突变状态

目的:探讨基于ADC和增强MRI的影像组学模型对低级别胶质瘤端粒酶逆转录酶基因（TERT）启动子突变状态的预测价值。方法:回顾性搜集109例经病理证实的低级别胶质瘤患者,所有患者术前均行MRI检查,在ADC和对比增强T₁WI（T₁CE）图像上选取病灶最大层面,沿肿瘤边缘勾画ROI,提取影像组学特征。采用三联法（Fisher, POE+ACC,MI）和最小绝对收缩选择算子（LASSO）进行特征筛选,然后行多因素logistic回归分析,构建影像组学预测模型。采用ROC曲线评估预测模型的诊断效能。结果:在ADC和T₁CE图像上分别提取279个影像组学特征,最终筛选出11个影像组学特征,分别建立ADC模型、T₁CE模型和联合分析（ADC+T1CE）模型共3个影像组学模型。联合分析模型的预测效能最佳,训练集中曲线下面积（AUC）为0.928（95%CI:0.859～0.996）,验证集中AUC为0.878（95%CI:0.758～0.997）。结论:基于ADC和增强MRI的影像组学模型能有效预测低级别胶质瘤...