胃癌组织中癌基因激活和抑癌基因失活的研究

本文采用Southern杂交技术分析了42例胃癌及癌旁组织中癌基因c-Ha-ras、K-ras、N-ras、c-myc、N-myc、hst、EGFR、c-erbB-2和抑癌基因p53和Rb的变化;使用PCR-RFLP方法分析了p53基因第248和249位密码子的点突变。结果显示,胃癌组织中有多种癌基因激活和抑癌基因失活,但多集中在c-Ha-ras、c-erbB-2、hst、EGFR和p53基因。这些结果表明,多种癌基因和抑癌基因可能参与了胃癌的发生和发展。     

人野生型p53基因与逆转录病毒载体的构建及转染

应用逆转录病毒为载体构建了含人野生型ｐ５３基因的重组质粒，并成功地转染ψｃｒｉｐ包装细胞。本实验应用ＰＬＸＳＮ为载体，１．８ｋｂ野生型ｐ５３基因作为插入片段，通过Ｔ＿４ＤＮＡ连接酶进行连接。用〔α—￣（３２）Ｐ〕ｄＣＴＰ标记野生型ｐ５３基因片段（１．８ｋｂ）为探针进行原位杂交。筛选出重组体，将其命名为ＰＬＸＳＮ－５３，然后用该重组体对ψｃｒｉｐ包装细胞进行转染。收集转染后的细胞，准备下一步感染ｐ５３突变细胞株研究之用。该质粒的构建和细胞转染实验为进一步研究野生型ｐ５３基因的抑癌作用及其表达与调控原理奠定了基础。     

3种衰弱评估工具对老年腹部手术患者术后并发症预测效能的比较分析

目的：比较衰弱表型(Frailty Phenotype,FP)、衰弱量表(Frail scale,FS)、埃德蒙特衰弱量表(The Edmonton Frail Scale,EFS)3种衰弱评估工具对老年腹部手术患者术后并发症的预测效能,以期为衰弱评估工具的选择提供参考。方法：便利选取某三级甲等医院年龄≥60岁的老年腹部手术患者184例,采用FP、FS、EFS评估患者的衰弱状态,收集患者的一般资料、手术类型、手术方式以及术后并发症的资料。应用χ²检验,通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析FP、FS和EFS对老年腹部手术患者术后并发症的预测作用。结果：184例老年腹部手术患者FP、FS、EFS衰弱的检出率分别为22.3%、16.8%、22.2%, 3种评估工具的衰弱检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。FP预测老年腹部手术患者术后并发症发生的ROC面积为0.798,高于FS、EFS的0.681和0.670(P<0.05)。结论：3种衰弱评估工具对老年腹部手术患者的衰弱检出率具有一致...     

LHR真核表达载体构建及表达

目的构建黄体生成素受体（LHR）真核表达质粒载体和建立稳定高表达LHR的乳腺癌细胞株。方法KpnI／Hpa工双酶切LHR-cDNA质粒载体获得目的基因,定向克隆构建pcDNA3．1（4-）真核表达载体,酶切图谱和序列分析鉴定;重组质粒载体经脂质体转染MCF-7乳腺癌细胞,G418筛选,RT-PCR、细胞内cAMP测定,筛选鉴定高表达LHRMCF-7细胞。结果重组质粒pcDNA3．1（4-）-LHR酶切图谱分析结果、序列分析证明pcDNA3．1（4-）-LHR载体中LHR序列与GenBank的LHR基因序列完全相符。RT-PCR检测MCF-7细胞LHRmRNA,MCF-7细胞内cAMP浓度测定,证实MCF-7细胞高表达LHR。结论构建并转染pcDNA3．1（4-）-LHR真核表达载体,在MCF-7细胞中稳定表达,为探讨hCG对乳腺癌细胞的作用提供实验基础。     

分子遗传标记在鱼类遗传多样性研究中的应用

本文简要介绍了分子遗传标记在鱼类种及种群遗传结构分析与个体识别、系统发育研究、基因组作图、辅助育种与种质资源管理上应用的现状，并探讨了分子标记在鱼类遗传多样性研究应用前景。     

KLOTHO基因C-1818T多态性与中国苏皖地区汉族人群急性冠脉综合征的相关性分析

目的:探讨KLOTHO基因第4外显子C-1818T多态性与中国苏皖地区汉族人群急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)的可能关系?方法:应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)及基因芯片(gene microarray)技术对375例ACS患者(ACS组)和235例经相关检查排除冠心病(CAD)者(对照组)进行KLOTHO基因C-1818T多态性的检测?结果:与对照组相比:①ACS患者CC?CT和TT基因型以及T等位基因型频率分布无显著差异;②老年人(≥60岁)?男性和老年男性ACS患者的CT基因型频率均明显升高(P值分别为0.031?0.035和0.041)?在调整相关危险因素并经多元Logistic回归分析后,CT基因型与老年人和老年男性ACS均存在相关关系(P值分别为0.010和0.047),与男性ACS无明显相关关系(P=0.103)?结论:在中国苏皖地区汉族人群中,KLOTHO基因C-1818T多态性CT基因型与老年和老年男性ACS的发病均存在相关性?     

The Construction fo Hybrid Plasmid pBR322:RSF1010

The plasmids pBR322 and RSF1010,extracted from E.coli HB802 and E.coliC600 respectively,were treated with restrictive endonuclease EcoRI andligated with T4 DNA Iigase.C600 strains were then transformed with thehybrid plasmid(pSMMl),and thus253transformants were obtained.Thefigures of gel electrophoresis and electromicrograph proved that pSMMlwas a pBR322:RSF1010 composite hybrid.In E.coli C600 pSMMl obtainedresistance against ampieilline(Ap),tetracycline(Tc)and streptomycin(Sm).The orientation of pBR322 and RSF1010 in hybrid pSMMl and the failureof introduction of this hybrid into P.putida AC10 were discussed.     

近交系小鼠核心群和生产群遗传质量监测

目的:对常用的近交系小鼠核心群和生产群进行遗传质量监测,观察2者之间的遗传质量差异,为近交系小鼠保种繁殖方法的改进提供理论依据.方法:采用生化标记法和微量细胞毒实验对3个近交系小鼠BALB/c、C57BL/6、DBA/2的核心群(n=6)和生产群(n=30)进行遗传质量监测.生化标记法检查的位点有Idh-1、Car-2、Gpd-1、Hbb、Es-1、Es-2、Mod-1、Es-3和Akp-1;微量细胞毒实验检查的位点有Thy-1、H-2K和H-2D.结果:在所监测的9个生化标记位点上,核心群和生产群都符合品系标准.在免疫学位点上,3个品系的核心群和DBA/2品系的生产群符合品系标准,C57BL/6和BALB/c的生产群中分别发现2个(Thy-1a/b和H-2Db/d)和4个(H-2Kd/b)变异的个体;H-2Kb抗血清对BALB/c的细胞毒指数明显升高.结论:近交系小鼠核心群和生产群在遗传质量上可能出现差异,生产群的遗传质量问题应引起高度重视.     

人CTGF和TIMP1基因重组腺相关病毒双表达质粒的构建及其活性检测

 目的 构建人结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1, TIMP1)基因腺相关病毒（adeno-associated virus, AAV）表达质粒，并观察其在HEK293细胞中的表达，检测目的蛋白的生物学活性。方法 采用PCR技术，分别设计引物扩增所需序列并进行PCR鉴定。再采用分子克隆的方法，以内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites, IRES)序列连接CTGF和TIMP1并克隆到AAV表达质粒pSNAV2.0构建重组质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TIMP1。把重组质粒转染HEK293细胞，用双重免疫荧光和Western blot的方法对重组质粒的表达进行研究，MTT法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的生物学活性，ELISA法检测细胞培养上清液中TIMP1蛋白的含量。结果 PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的CTGF和TIMP1基因序列的AAV表达质粒。双重免疫荧光和Western blot检测到目的蛋白的表达，转染后的细胞上清具有促使成纤维细胞增殖的生物学活性，ELISA法结果证实重组载体能够高表达TIMP1蛋白。结论 成功构建了双表达质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TIMP1，转染 HEK293细胞后能够表达具有生物学活性的目的蛋白，为基因治疗椎间盘退变的研究工作奠定了基础。     

IL-28B基因突变与慢性丙型肝炎抗病毒治疗的关系

Background  Genetic variations at the interleukin 28B (IL-28B) locus are important in predicting outcome following therapy for chronic hepatitis C virus (HCV) infection. The aim of this research was to evaluate the role of IL-28B single nucleotide polymorphism (SNP) variations in Chinese patients undergoing pegylated interferon-α plus ribavirin (PEG-IFN-α/RBV) treatment.

Methods  To determine the effect of IL-28B variation on the response to HCV therapy, these variants were genotyped in a cohort of 220 patients who were chronically infected with HCV and received combined PEG-IFN-α/RBV therapy.

Results  The proportions of rs12979860 CC, CT, and TT genotypes were 71.4%, 25.0%, and 3.6% respectively, in the sustained virological response (SVR) group; 15.8%, 60.5%, and 23.7% respectively, in the null virological response (NVR) group; and 38.1%, 52.4%, and 9.5% respectively, in the relapse (Rel) group (P <0.05). Logistic regression analysis showed that, compared to those having the CC genotype, CT heterozygotes had an increased risk of NVR and Rel (OR=10.95, 95% CI =4.12-29.11, P=1.5×10^-7 and OR=3.93, 95% CI =1.86-8.32, P=2.1×10^-4 respectively). The RNA quantification assay showed that patients with genotype CC exhibited much higher levels of IL-28 expression than those with genotype CT or TT (P <0.001).

Conclusions  The IL-28B SNP rs12979860 genotype was related to the effectiveness of HCV therapy: patients with the CC rs12979860 genotype had higher rates of SVR than those with the CT or TT genotype, and the CC genotype revealed a significantly higher level of IL-28 mRNA expression.