前列腺癌骨转移血清蛋白质组学研究

目的:应用蛋白质组学双向凝胶电泳和质谱技术筛选前列腺癌骨转移血清标志物。方法:收集前列腺癌伴骨转移、不伴骨转移各5例血清样本。血清样品用除白蛋白试剂盒除去血清中的白蛋白后进行双向凝胶电泳,ImageMaster 2D Platinum软件分析,有意义的差异蛋白质点行基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。结果:双向凝胶电泳显示,前列腺癌骨转移组血清蛋白中有15个斑点与前列腺癌无骨转移组有显著差异,前列腺癌骨转移患者血清中10个蛋白质表达水平显著增加,5个蛋白质表达水平显著下降。5个差异蛋白点进行胶内原位酶解,肽质量指纹图谱分析成功得到了3个蛋白质肽质量指纹图谱,并查询数据库初步鉴定了该3个蛋白质分别为锌α2糖蛋白、结合珠蛋白和载脂蛋白CⅢ。结论:双向凝胶电泳结合质谱鉴定是血清差异蛋白质组学研究的可靠平台和有力工具。所鉴定出的蛋白质与前列腺癌骨转移的发生、发展有关,可能是前列腺癌骨转移潜在的血清标志物。     

两种不同溶液体系提取大鼠脊髓蛋白双向电泳图谱比较

目的：比较尿素／CHAPS和尿素／硫脲／CHAPS／SB3－10两种不同溶液体系提取大鼠脊髓蛋白双电泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE)图谱的差异。方法：大鼠脊髓经三氯醋酸／丙酮沉淀粉蛋白后,分别用尿素／CHAPS和尿素／硫脲／CHAPS／SB3－10两种不同的溶液体系提取蛋白。以固相PH梯度（IPG）等电聚焦为第一向,SDS－PAGE水平电泳为第二向进行蛋白质2－DE。图像分析软件ImageMaster 2D Elite3.01分析蛋白质2－DE图谱。结果：两种蛋白提取溶液分别获得1059和1023个蛋白（亚基）斑点,其中790个蛋白在两张图谱中重叠,其余269和233个蛋白点为两种体系各自所特有。两种提取方法共获得1292个蛋白斑点。结论：综合使用不同蛋白提取方法有助于提高组织蛋白2－DE图谱的完整性。     

大鼠膈肌水溶性蛋白组的研究

本研究应用蛋白组的核心技术——高分辨率二维电泳对同属骨骼肌的膈肌和趾长伸肌水溶性蛋白组的二维电泳图谱进行了比较,并对两者在老化过程与年龄相关的水溶性蛋白进行了比较。我们发现膈肌和趾长伸肌水溶性蛋白的二维图谱极为相似,大部分蛋白都能较好地重叠。我们未能找到持续而稳定且特异于膈肌的水溶性蛋白。同时我们发现了三个与年龄相关蛋白（S1,S2和S3）,随增龄,蛋白S1只在24月龄趾长伸肌存在,而在8月龄和24月龄的膈肌中却不能被检测到。S2在8月龄的膈肌和趾长伸肌存在,而在24月龄的膈肌和趾长伸肌中不能被检测到。S3在8月龄的膈肌和趾长伸肌中不能被检测,而在24月龄的膈肌和趾长伸肌中能被检测到。本研究提示膈肌和趾长伸肌水溶性蛋白在其成年时表达基本一致。老化而造成水溶性蛋白表达的变化在膈肌和趾长伸肌也较为相似。     

死精子症精子相关蛋白的蛋白质组学研究

目的:运用双向电泳(2-DE)和质谱技术比较1例死精子症患者和正常人精子的蛋白质组成差异。方法:用2-DE分离了10例正常生育者30份精子标本和1例死精子症3份精子标本的蛋白质,分别获得其参考图谱并进行比较,用质谱技术鉴定其中部分差异蛋白点。结果:在正常精子图谱和死精子症患者精子图谱分别分离出(905±57)和(792±28)个蛋白质点,死精子症患者精子图谱上有178个点未能匹配。对其中6个在患者图谱中缺失的蛋白质点进行了鉴定。结论:死精子症患者图谱上缺失的6个蛋白,可能与死精子症的形成有关。     

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱在鼠伤寒沙门菌同源性分析中的应用价值

目的:研究基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在鼠伤寒沙门菌同源性分析中的应用价值.方法:利用MALDI-TOF MS对分离于广州市的44株鼠伤寒沙门菌进行分型,与脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)进行比较,并分析主要质谱型的质谱图.结果:对PFGE结果聚类分析可以将44株鼠伤寒沙门菌分为15型.在聚类相似度为80%时,44株鼠伤寒沙门菌被分为8个MALDI-TOF MS型,与PFGE分型较一致.其中MS1型(52.3%)为主要的质谱型,MS1型包含多个PFGE型.结论:MALDI-TOF MS方法分型结果显示了广州市鼠伤寒沙门菌相对集中的亲缘关系,是一种简便、快速、高通量的方法.     

应用全自动毛细血管电泳技术对杭州地区地中海贫血的筛查

目的 了解杭州地区地中海贫血的检出情况,探讨产检中筛查地中海贫血的意义,评价平均红细胞体积（MCV）、平均血红蛋白量（MCH）及血红蛋白电泳对地中海贫血进行产前筛查的价值。方法 以2019年2月～2020年3月在我院检查的3968例育龄期妇女为研究对象,进行血常规、血红蛋白电泳及β-地贫基因检测。结果 筛查3968例育龄期妇女,疑似α-地中海贫血或缺铁性贫血共有366例（9.22%）,其中妊娠中晚期孕妇有255例;疑似β-地中海贫血共有19例（0.48%）,其中有4例进行β-地贫基因检测,均被确诊为β-地中海贫血,分别为βIVS-II-654/βN 突变1例,βCD17/βN 突变2例,βCD41/42/βN 1例。结论 MCV、MCH及血红蛋白电泳可以对地中海贫血进行产前筛查,整体操作较为简便。加强地中海贫血筛查及检测,可以降低出生缺陷,对优生优育具有重要意义。     

免疫固定电泳和血轻链比值诊断以肾脏损伤为首发症状的多发性骨髓瘤的价值

目的 探讨血清免疫固定电泳和血清轻链比值测定在以肾脏损伤为首发症状的多发性骨髓瘤（MM）患者中用于实验室诊断与鉴别诊断的价值。 方法 肾脏疾病患者共822例进行血清免疫固定电泳、血清轻链测定及免疫球蛋白定量,同时检测患者肾脏功能,包括尿素(BUN)、肌酐(Crea)、胱抑素C(Cys-C)以及估算肾小球滤过率（eGFR）。分析血清免疫固定电泳和血清轻链比值测定在诊断和鉴别诊断原发性肾脏损伤疾病以及MM继发肾脏损伤疾病中的临床应用价值。 结果 822例患者中9.1%（75/822）患者出现M蛋白。其中IgG型49.3%(37/75),IgA型34.7%(26/75),IgM型5.3%(4/75),单纯轻链Lambda（LAM）10.7%（8/75）。Kappa（KAP）/LAM比值在M蛋白组和非M蛋白组间比较差异有统计学意义,以KAP型轻链表达为主的M蛋白组高于非M蛋白组、以LAM型轻链表达为主的M蛋白组低于非M蛋白组（ P均<0.001）。M蛋白组患者与非M蛋白组患者间比较,Crea、BUN、Cys-C以及eGFR检测结果差异均无统计学意义。单纯LAM轻链组与IgG型组、IgA型组和IgM型组比较,Crea检测值增高,而eGFR值降低（ P均<0.05）。 结论 免疫固定电泳和血清轻链KAP/LAM比值检测在MM合并肾功能不全中具有重要辅助诊断价值,是早期筛查的重要实验室指标之一。     

转Bt基因大米与相应亲本大米差异蛋白质组学研究

目的：利用差异蛋白质组学及生物信息学等技术方法,探讨外源Bt基因的导入对大米表达蛋白质组的影响,深化转基因大米在蛋白质组学方面的研究。方法在转基因大米“华恢1号”和亲本大米“明恢63”样品中提取大米总蛋白,通过二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D-PAGE）实验方法,得到相应的蛋白质组2D-PAGE谱,再选择差异明显的蛋白质点进行质谱鉴定及生物信息学分析。结果对转Bt（cry1Ab/1Ac）基因大米和亲本大米2D-PAGE图谱的蛋白质点进行了对比匹配,识别出明显的差异蛋白质点28个,以亲本大米为参照,转Bt基因大米相对高表达的18个,相对低表达的10个;选择转基因大米凝胶上的差异蛋白质点进行了质谱鉴定和生物信息学检索,发现差异蛋白质主要参与能量代谢,蛋白质合成、氧化还原和应激响应等生物过程。结论转Bt基因“华恢1号”及其亲本大米“明恢63”表达的蛋白质组存在一定差异,但未发现这些差异蛋白质具有抗营养性和致敏性,也未发现新蛋白和毒蛋白的表达。     

PCR-DGGE检测早期儿童龋治疗前后口腔菌群多样性的初步研究

目的:应用PCR-变性梯度凝胶电泳技术(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术检测早期儿童龋治疗前后唾液中微生物多样性的变化。方法:选取北京大学燕东幼儿园22名3～5岁儿童进行口腔检查,在龋齿治疗前和治疗后2周分别取样,采用PCR-DGGE技术检测受试儿童唾液样本,分析治疗前后唾液微生物多样性的变化。结果:治疗前唾液样本DGGE条带数为23±2.9,治疗后唾液样本DGGE条带数为28±4.1,差异有显著性(P<0.01);在同一时期内各唾液样本DGGE图谱的相似性高于不同时期样本之间。结论:PCR-DGGE技术可用于与龋病相关细菌的生物多样性的研究以及监测微生物群落组成的动态变化。     

Distribution of Human Lens Crystallins and Their Sulphydryl Contents of Different Age in Two—dimension Electrophoresis

Purpose: To analyze water-soluble(WS) human lens proteins of fetus, adult and age-related cataract by two-dimensional IEF/SDSPAGE electrophoresis. Methods: DACM [ N- (7-Dimethylamino-4-methyl-3-coumarinyl) maleimide ] was used to determine the lens proteins sulphydryl (SH) content.Result: Protein SH contents in WS lens proteins have no significant difference among fetus, adult and age-related cataract lens. This is different from the relative published results obtained in lens proteins of animal cataract model using similar SH detecting methods.Conclusions: IEF/SDS-PAGE electrophoresis demonstrated that there were much more fragmentation of crystallins during lens development and cataractogenic process. It is suggested that this phenomenon is likely to be due to further conformational changes in the fragmented cyrstallins during aging and cataractogenic process. Eye Science 1999; 15:32-35.