常见呼吸道病毒分子鉴别诊断技术的建立

目的 建立一种常见呼吸道感染病毒的快速检测方法,为尽早诊断、减少疾病的传播以及为临床提供良好的治疗依据.方法 采用液体芯片检测技术结合靶向多重RT-PCR技术建立可以同时检测13种呼吸道病原的检测技术.结果 该方法特异性方面检测13种常见呼吸道病毒没有交叉,标本的检出率为100%;灵敏度方面达到10e2-10e1（pfu/ml）.结论 该分子鉴别诊断可应用常见呼吸道病毒的检测,协助诊断病毒引起的病毒性呼吸道感染.     

用逆转录PCR-核酸探针杂交法对柯萨奇B组病毒分型诊断

目的 建立一种逆转录PCR-核酸探针杂交法对柯萨奇B组病毒(CVB1～6)进行分型诊断。方法 一对通用PCR引物，它能有效扩增所有CVB1-6型的特异性DNA片段；另选取6条各型特异性寡核苷酸探针，将它们分别共价结合在不同的微孔板上。经过一次PCR扩增，扩增后的产物分别与包被有不同探针的微孔板进行杂交检测，从而有效鉴别CVB各型。结果 本法与ELISA法的分型比较显示它们具有很好的一致性，无错误分型。对152例IgM抗体阳性标本的检测，该方法阳性率为71．7％。结论 本法可准确对CVB进行分型，为CVB的临床诊断及流行病学调查提供了一种有效的方法。     

LCD心电监视器两例

为了给我们研制的便携式急救心电监护仪配上监视器,实现心电波形的连续、实时显示,我们试用了两种LCD显示模块.本文介绍了显示器的软、硬件设计.     

Polydipsia in the monkey generated by visual display schedules.

Discussions of adjunctive behavior still largely refer to polydipsia induced by food delivery schedules to food deprived animals. In the present experiment polydipsia was induced when socially isolated monkeys housed in barren home cages were exposed to scheduled deliveries of film and scheduled viewing of other monkeys. These data suggest the greater generality and complexity of adjunctive behaviors and show that schedule-induced polydipsia cannot be regarded as an artifact of food associated drinking.     

Isoenzymes of γ-glutamyl transpeptidase in liver diseases

Summary A new method for the separation of isoenzymes of-glutamyl-transpeptidase is described, using electrophoresis on acetate cellulose gel and a developing solution composed by-glutamyl-naphthylamide, and a colored diazonium compound.The method permits the separation of up to four different isoenzymes, which we called-GT₁,-GT₂,-GT₃,-GT₄, the first two showing an electrophoretic migration similar to that of ₁- and ₂-globulins and the other two to that of-globulins.The present technique has proved its usefulness in detecting isoenzymes in serum with values of total-glutamyl-transpeptidase higher than 80 U/L.The application of this method in 52 patients with different types of biliary obstruction and hepatocellular damage has shown that it provides new possibilities in differential diagnosis.     

用噬菌体肽库筛选重组日本血吸虫线粒体相关蛋白的表位

目的：筛选和鉴定重组的日本血吸虫（中国大陆株）线粒体相关蛋白rSj38的表位。方法：用纯化的rSj338/26GST免疫家兔获得抗rSj338/26GST的多克隆抗体IgG，将抗体进一步纯化，获得抗rSj338单特异多克隆抗体IgG。用纯化抗rSj338抗体对噬菌体12肽库进行5轮免疫学筛选，挑取克隆。采用Western blot免疫识别，核苷酸序列测定分析其获得的表位并与rSj338/26GST进行同源性比较。将获得的不同表位的阳性克隆分别免疫小鼠，并采用Western blot及dot-ELISA方法筛选能刺激小鼠产生较高滴度抗rSj338抗体的阳性克隆，并将阳性噬菌体免疫的小鼠血清对纯化的rSj338/26GST,26GST，日本血吸虫成虫及虫卵抗原进行Western blot识别。结果：经5轮免疫学筛选后挑取的32个克隆，用Western blot方法30个克隆能被抗rSj338抗体识别，核苷酸序列分析发现共有11种表位，与rSj338无一级结构的同源性。经动物免疫初步实验筛选。共获得4个免疫原性较强的阳性克隆，其免疫鼠血清均可识别rSj338/26GST，日本血吸虫成虫及虫卵抗原。结论：获得了4种日本血吸虫中国大陆株线粒体相关蛋白rSj338的表位，均为模拟表位，这将为日本血吸虫病的疫苗研究开辟新的途径。     

涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系基因表达谱及基质金属蛋白酶表达差异

目的筛选与涎腺腺样囊性癌转移相关的候选基因，并对其中的候选基因进行初步的验证。方法用限制片段差异显示PCR技术（restriction fragments differential display PCR, RFDD-PCR）建立涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞株（ACC-M、ACC-2）的表达谱。对两个表达谱的片段进行比较，通过生物信息学的分析，初步筛选出候选基因。用半定量逆转录PCR技术对筛选出的基因进行初步验证。结果RFDD-PCR方法共获得5420个基因片段，其中包含12个基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）基因。半定量逆转录PCR方法发现MMP2、MMP7、MMP9、MMP14、MMP15、MMP24在ACC-M和ACC-2中的表达存在明显差异。结论构建了ACC-M和ACC-2细胞株的表达谱，为寻找目的基因奠定了基础。发现MMP2、MMP7、MMP9和MMP15与涎腺腺样囊性癌的发生、发展、转移有关，不同肿瘤细胞的转移能力可能与不同的MMPs家族基因相关。     

登革2型病毒E蛋白免疫优势表位的筛选鉴定

目的 用噬菌体展示肽库筛选登革2型病毒(DEN2)E蛋白的抗原表位，并确定该抗原表位性质。方法 以DEN2型特异的E单克隆抗体作为筛选分子，生物淘洗噬菌体随机12肽库，将筛选的噬菌体阳性克隆进行ELISA检测、DNA序列测定及展示肽的氨基酸序列推导，通过噬菌体展示肽序列与DEN2E蛋白的氨基酸一级结构的对比，初步确定E蛋白的抗原表位；用模拟该表位线性序列的合成十肽进行抗体结合试验、噬菌体竞争抑制试验及与DEN感染患者的血清学试验，确定其为免疫优势线性表位。结果 肽库淘洗获得的11个ELISA阳性的噬菌体克隆有相似的结构基序WFKKGSS，其展示肽与DEN2E蛋白390～398 AA序列有3～5个氨基酸相同。对应于DEN2E蛋白390～399AA的合成十肽能与淘洗单抗特异反应，并可抑制噬菌体阳性克隆与该单抗结合。该合成肽与DEN2感染患者血清有较高的免疫反应性。结论 本实验通过噬菌体随机肽库的生物淘洗确定的DEN2E蛋白(E390～398AA)线性序列为免疫优势表位，其对应的合成肽E10可望用于DEN2感染的快速诊断。     

利用噬菌体肽库技术获得与人Fas结合的多肽基序

目的　利用噬菌体随机肽库技术获得与人Fas胞外区结合的多肽及其多肽基序 ,观察多肽基序的生物学功能。方法　以人Fas胞外区与IgGFc段的融合蛋白Fas .Fc为筛选配基 ,筛选噬菌体随机九肽库 ;微量淘洗与ELISA相结合鉴定阳性克隆 ,DNA测序和分析。化学合成多肽进行竞争性ELISA以及细胞增殖抑制实验。结果　经过 4轮亲和筛选 ,微量淘洗鉴定 ,获得 4 2个阳性克隆 ;固定ELISA实验显示筛选到的噬菌体短肽能与Fas .Fc特异性结合 ,并呈剂量依赖关系 ;随机选取 13个阳性克隆进行DNA测序 ,其序列及出现几率分别为 :PRKARVDTS(2 / 13)、YKKKSLQVQ (2 / 13)、YKKKSMLQA(2 / 13)、SRKKYDQYA(4/ 13)、YARKIKPTA(2 / 13)和ARKKTEGAG(1/ 13)。经多重序列分析 ,获得多肽基序 : R/KKK A。在ELISA和竞争性ELISA实验中 ,化学合成多肽EGEFYKKKSM LQADPAK (P3)可抑制Fas与抗人Fas单抗Apo 1的结合 ,且呈剂量效应关系 ;P3不能抑制Fas与FasL的结合。细胞增殖实验表明 ,多肽可抑制Jurkat细胞增殖 ,且随多肽剂量的增加而加强。多肽与单抗Apo 1联合作用对Jurkat细胞增殖的影响与单独使用P3没有明显差别。结论　通过噬菌体随机肽库技术获得与Fas结合的多肽及其多肽基序 ,它们可能模拟了抗Fas抗体Apo 1对Fas的结合位点 ,为基于Fas凋     

糖尿病大鼠视网膜基因表达谱差异的初步分析

目的 建立大鼠正常视网膜和糖尿病8周视网膜基因表达谱，比较两者差异，初步分析糖尿病视网膜病变的相关基因。方法 通过限制片段差异显示 PCR（ restriction fragments differential display-PCR，RFDD-PCR）获得正常大鼠视网膜及8周糖尿病大鼠视网膜组织转录组片段。应用Fraent Analysis等软件，对差异片段进行生物信息学分析，初步确定糖尿病视网膜病变相关基因／表达序列标签（ expression sequence tag, Ksr）。结果 获得有意义的片段共3639个，有差异的片段840个，占表达数的23．08％。其中包括5个视觉传导相关基因，13个兴奋性神经递质受体基因和3个抑制性神经递质受体基因。糖尿病8周大鼠视网膜Rhodopsin kinase,β-arrestin,Phosducin, rod photoreceptor cGMP-gated channel 和 Rpe65的表达下调，离子型谷氨酸受体iGluR1-4下调，代谢性谷氨酸受体及γ-氨基丁酸受体各亚型则普遍上调，而甘氨酸受体表达无变化。结论 糖尿病8周大鼠神经视网膜已受到累及，其基因表达模式的改变，可能与糖尿病早期视功能损害有关。