EFFECTS OF p53 GENE THERAPY COMBINED WITH CYCLOOXYGENASE-2 INHIBITOR ON CYCLOOXYGENASE-2 GENE EXPRESSION AND GROWTH INHIBITION OF HUMAN LUNG CANCER CELLS

1 INTRODUCTIONCOXis the key enzyme involved in the synthesis of prostanoids,a collective termfor the PGs andthromboxanes.Of the two major isoforms of the COXenzyme,COX-1 is ubiquitous and constitutively ex-pressedin virtually all normal tissues.In contras…     

环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用。方法构建胰腺癌荷瘤裸鼠模型,将成瘤裸鼠随机分为4组,分别给予纯水（对照组）和含有不同浓度（0．05％、0．1％、0．15％）的塞来昔布饮水,观测裸鼠肿瘤生长情况并测量不同时间的体积变化,于治疗28d后处死裸鼠,测瘤体重量,应用caspase-3试剂盒检测caspase-3活性,免疫组织化学法检测肿瘤增殖指数（PI）和微血管密度（MVD）。结果治疗组裸鼠肿瘤体积的变化呈浓度依赖性和时效性;治疗28d后,治疗组瘤重量均明显低于对照组[（0．96±0．09）g、（0．78±0．06）g、（0．64±0．07）gvs（1．16±0．12）g,P〈0．01）];治疗组caspase-3相对活性明显高于对照组（0．021±0．002、0．026±0．003、0．031±0．002VS0．006±0．001,P〈0．01）。0．1％组、0．15％组的PI和MVD均明显低于对照组（P〈0．05）;0．05％组的PI和MVD虽均低于对照组。但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论COX-2抑制剂塞来昔布可显著抑制荷胰腺癌裸鼠的肿瘤生长,其作用机制可能是通过提高caspase-3活性来诱导细胞凋亡,通过抑制肿瘤细胞的增殖和新生血管的形成来发挥抗肿瘤效应,在临床上具有潜在的应用价值。     

环氧合酶-2在实验性酒精性肝炎中的表达及作用机制

目的观察环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在大鼠酒精性肝炎(alcoholic hepatitis,AH)中的表达,探讨COX-2与AH的关系.方法随机将24只雄性SD大鼠分为正常组,乙醇组和两组实验组(每组各6只).测定血浆内毒素(Lipopolysaccharide,LPS),肝组织丙二醛(Malondialdehyde,MDA),及血清ALT和AST水平,在光镜下观察肝脏的形态学改变,并应用免疫组织化学技术检测COX-2在酒精性肝炎中的表达.结果乙醇组大鼠LPS和MDA水平均较正常组大鼠明显增高(P＜0.05),而实验组大鼠血清ALT和AST浓度均明显低于乙醇组(P＜0.05).HE染色光镜下见乙醇组大鼠肝细胞脂肪变性,炎性细胞浸润及细胞坏死.免疫组织化学研究表明,在正常组大鼠肝组织中COX-2无表达,其余各组表达阳性,但实验组COX-2表达较乙醇组显著降低(P＜0.05).结论在AH时LPS和MDA诱导COX-2的表达,高表达的COX-2将进一步加重肝损害,应用特异性COX-2抑制剂有可能减轻这种损害.     

塞来昔布对人膀胱肿瘤细胞株T24体外增殖和凋亡的影响

目的：研究选择性环氧化酶2（Cox-2）抑制剂塞来昔布对人膀胱肿瘤细胞株T24体外增殖和凋亡的影响。方法：常规培养的贴壁生长的T24细胞,分别与不同浓度塞来昔布、POE2等共培养,MTT法测定塞来昔布及PGE。对T24细胞增殖活性的影响,流式细胞仪测定塞来昔布及PGEz处理后T24细胞的凋亡率;建立细胞悬浮培养体系,将悬浮生长的T24细胞,分别与塞来昔布、PGE。等共培养,流式细胞仪测定塞来昔布及PGE2处理后T24细胞的凋亡率（失巢凋亡率）。结果：塞来昔布呈剂量依赖性地显著抑制贴壁生长的T24细胞的增殖、增加其凋亡,而PGE2和对贴壁生长的T24细胞增殖和凋亡无明显影响;塞来昔布显著增加而PGE2显著抑制T24的失巢凋亡。结论：选择性Cox-2抑制剂塞来昔布可显著抑制T24细胞的生长,诱导贴壁及悬浮生长状态的T24细胞产生凋亡,其可能机制之一是逆转了Cox-2产物PGE2对T24细胞的抗凋亡保护作用,包括对抗肿瘤药物及脱壁诱导的细胞凋亡的抑制作用。     

塞来昔布对人胃癌SGC-7901细胞迁移、MMP-9和VEGF表达的影响

目的观察塞来昔布对人胃癌SGC-7901细胞迁移能力及其对MMP-9 mRNA和VEGF mRNA表达的影响。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,将细胞分为对照组及塞来昔布低、中、高剂量组（分别加入塞来昔布25、50、100μmol/L）,处理SGC-7901细胞24 h后,应用损伤修复实验观察塞来昔布对SGC-7901细胞迁移能力的影响;RT-PCR法检测塞来昔布对SGC-7901细胞MMP-9 mRNA和VEGF mRNA表达的影响。结果 SGC-7901细胞的迁移距离随塞来昔布浓度的增加而减少,中、高剂量组与对照组比较差异有统计学意义（322.33±0.75、245.51±0.58 vs 713.23±0.44,P＜0.05）。RT-PCR法检测结果显示,随着塞来昔布处理浓度的增高,胃癌细胞MMP-9 mRNA和VEGF mRNA的表达均降低,且与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论塞来昔布可抑制人胃癌SGC-7901细胞的迁移,其抗肿瘤机制可能与抑制COX-2下游的MMP-9和VEGF表达有关。     

塞来昔布上调Cyclin D1基因甲基化水平对食管癌细胞增殖和凋亡的抑制作用

目的探究塞来昔布通过上调Cyclin D1基因甲基化水平对食管癌细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法将细胞分为对照、转染和塞来昔布组,分别转染阴性对照载体、Cyclin D1过表达载体和Cyclin D1转染后给予60μmol/L塞来昔布。采用MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡率的变化,Western blotting法检测细胞周期和细胞凋亡相关蛋白表达水平;甲基化特异性PCR(MS-PCR)、qRT-PCR法用于检测Cyclin D1甲基化特异性扩增片段和Cyclin D1 mRNA表达水平。结果塞来昔布能够抑制Cyclin D1诱导的细胞体外增殖,阻滞细胞周期向S期转化,并促进食管癌细胞凋亡;MS-PCR结果显示塞来昔布能够上调Cyclin D1基因甲基化水平,在转录水平抑制细胞内Cyclin D1 mRNA的表达。结论塞来昔布能够通过上调Cyclin D1基因甲基化水平发挥抑制食管癌细胞增殖、促进其体外凋亡的作用。     

阻断表皮生长因子受体和环氧合酶-2信号途径对肺腺癌细胞的抗增殖作用

目的:探讨表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼(gefitinib)联合新型环氧合酶2（cyclooxygenase2, COX2）抑制剂塞来昔布(celecoxib)对肺腺癌A549细胞株的抑制作用及其可能机制。方法:肺腺癌A549细胞培养于RPMI 1640 培养液中,实验分为正常对照组、吉非替尼5 μmol/L组、塞来昔布25 μmol/L组、吉非替尼5 μmol/L加塞来昔布25 μmol/L组。药物干预细胞48 h后,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,锥虫蓝拒染法检测药物对细胞生长的影响,Annexin V/PI法和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡,流式细胞术检测药物作用周期,免疫荧光和Realtime PCR法检测EGFR、COX2蛋白的表达及EGFR mRNA的表达情况。结果:吉非替尼联合塞来昔布组相比单药组,A549 细胞明显出现大量颗粒和空泡,细胞变圆并开始脱落。吉非替尼与塞来昔布单药对A549细胞抑制作用具有时间和剂量依赖性,加药48 h时吉非替尼（5 μmol/L）联合塞来昔布（25 μmol/L）组抑制率为(58.2±4.6)%,明显高于单药组（P<0.01）。联合用药组A549细胞凋亡率明显高于单独用药组（33.9% vs 6.0%,8.8%）,其S期细胞明显减少、G0/G1期明显增加（P<0.01）;EGFR、COX2蛋白的表达明显减弱（P<005）,EGFR mRNA相对表达量（028±0.05）明显高于单独用药组（P<0.05）。结论:吉非替尼和塞来昔布联合对肺腺癌A549 细胞增殖的抑制具有明显协同作用,其可能机制是诱导凋亡、增强G0/G1期阻滞和进步下调活化的EGFR与COX2的表达。     

塞来昔布联合吉非替尼对HCC827细胞凋亡影响机制探讨

目的探讨Cox-2抑制剂塞来昔布联合吉非替尼对肺癌EGFR 19号外显子E746-A750缺失细胞株HCC827细胞凋亡的影响及其可能机制。方法 RPMI1640培养HCC827细胞,分为正常对照组、塞来昔布组、吉非替尼组、塞来昔布加吉非替尼组。塞来昔布与吉非替尼药物浓度均为5、10、20、40、80μmol/L。药物干预细胞48h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中Cox-2和p-EGFR蛋白表达。结果 MTT结果显示,塞来昔布和吉非替尼单独用药时HCC827细胞的增殖受到明显的抑制,且随着药物浓度的增加,抑制作用逐步增强,药物剂量与细胞增殖抑制率呈正相关;塞来昔布与吉非替尼联合用药时对HCC827细胞呈现出更强的抑制作用,与单独用药相比差异有统计学意义,P<0.001;对照组细胞凋亡率为(0.26±0.09)%,塞来昔布组为(4.86±0.37)%,吉非替尼组为(8.53±0.78)%,塞来昔布+吉非替尼组为(23.28±1.63)%,组间比较差异有统计学意义,F=111.291,P<0.001,且两药联合时具有交互效应,F=90.440,P<0.001;蛋白质印记法结果显示,用药组较对照组Cox-2(F=185.351,P<0.001)和p-EGFR(F=61.328,P<0.001)蛋白水平均有不同程度的下调,其中两药联合组下调最为明显。结论塞来昔布与吉非替尼具有良好的协同作用,其机制可能与诱导凋亡、抑制EGFR的活化和下调Cox-2蛋白的表达有关,在治疗非小细胞肺癌中联合用药可能会具有较大的应用潜力。     

Hepatoprotective effects of melatonin and celecoxib against ethanol-induced hepatotoxicity in rats

Abstract

Objectives: Several studies demonstrated the antioxidant and anti-inflammatory role of melatonin and celecoxib. This study is designed to explore the underlying mechanism of hepatoprotective effects of melatonin and celecoxib against ethanol-induced hepatotoxicity by morphological, and biochemical approaches.

Materials and methods: Adult male rats were divided into five groups: saline, ethanol, melatonin, and celecoxib were administered for 11 consecutive days after ethanol injection. Biochemical analyses were performed for the determination of glutathione (GSH), glutathione S-transferase (GST), and inducible nitric oxide (iNOS). Immunohistochemistry was performed to determine the level of different inflammatory markers.

Results: Histopathological results showed that ethanol-induced marked hepatic injury leads to cloudy swelling, hydropic degeneration, apoptosis, and focal necrosis in all hepatic zones. Biochemical analysis revealed significant increases in serum transaminases and alkaline phosphatase in the ethanol group. Oxidative stress associated with attenuated antioxidant enzymes was also spotted in the ethanol group, as ethanol down-regulated GSH, GST, and upregulated NO. Additionally, ethanol increased the activation and the expression of tumor necrotic factor (TNF-α), p-NF_KB, and COX2. Finally, hepatic cellular apoptosis was clearly obvious in ethanol intoxicated animals using activated JNK staining.

Conclusion: These results provided pieces of evidence that the hepatoprotective effect of melatonin and celecoxib is possibly mediated through the modulation of JNK and TNF-α signaling pathways with subsequent suppression of inflammatory and apoptotic processes.     

塞来考昔对女性卵巢功能的影响

目的 :观察塞来考昔 (celecoxib)对女性卵巢功能的影响。方法 :5 6例痛经病人分为 2组 ,A组给予塞来考昔治疗 1wk ,B组给予山莨菪碱治疗1wk ,采用对照的方法进行临床试验。结果 :塞来考昔对治疗前后病人性激素 (PRL ,E2 ,LH ,FSH)水平无明显影响 (P >0 .0 5 ) ,与山莨菪碱治疗组比较无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,其对滤泡直径的影响与山莨菪碱治疗组比较亦无显著差异 [(2 0 .1±s 1.3)mmvs(19.4± 1.1)mm ,P >0 .0 5 ]。结论 :短期使用塞来考昔对女性卵巢功能可能无明显影响。