非小细胞肺癌survivin表达与紫杉醇耐药的关系及苦参碱逆转耐药的研究

 【摘要】　目的　探讨凋亡抑制蛋白survivin在晚期非小细胞肺癌（NSCLC）中表达及与紫杉醇（PTX）化疗疗效的关系，并初步研究苦参碱对PTX化疗耐药的逆转作用。方法　应用免疫组化方法，对120例接受PTX化疗的NSCLC患者survivin 表达水平进行检测，按表达情况分组，比较不同组间的疗效和生存时间。结果　survivin蛋白在NSCLC患者阳性表达率为58.8 %。在survivin蛋白阳性表达组中，加用苦参碱组有效率提高，生存时间延长，差异有统计学意义（P＜0.05），而survivin蛋白阴性表达组中，加用苦参碱组有效率未明显提高，生存时间无明显延长。组间比较，加用苦参碱后，survivin蛋白表达不影响患者有效率和生存时间（P＞0.05）。结论　survivin蛋白表达情况同PTX化疗的疗效相关，有可能成为预测肿瘤细胞对PTX耐药的分子指标。通过前瞻性研究发现苦参碱可能通过作用于survivin蛋白，促进PTX引起的细胞凋亡，从而逆转部分肿瘤细胞由于survivin蛋白阳性表达产成的耐药性。     

MDM2基因多态性与食管鳞癌、贲门腺癌易感性的关系

目的：研究MDM2启动子区SNP309和Dell 518基因多态性与中国河北省高发区人群食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）和贲门腺癌（gastric cardiac adenocarcinoma，GCA）易感性的关系。方法：应用引物引入限制性内切酶分析-聚合酶链反应（primer-introduced restriction analysis-polymerase chain reaction，PIRA-PCR）方法，分别检测了351例ESCC患者、212例GCA患者和642例健康对照组人群的MDM2启动子区SNP309和Dell518的基因型。应用EH和2LD软件分析两个多态性位点的相互关系。结果：MDM2基因型分布在总体ESCC患者组和健康对照组间无显著性差异（P〉0．05），而在总体GCA患者组与健康对照组间存在的差异有统计学意义（P〈0．05）。单体型分析显示，MDM2单体型分布在ESCC患者组与健康对照组间差异无统计学意义（P=0．198），而在GCA患者组与健康对照组间有显著性差异（P=0．000）。与SNP309G／Dell518＋单体型相比，检出SNP309T／Dell518-单体型组可显著降低GCA的发病风险（OR=0．51，95％CI=0．38～0．70）。结论：MDM2的SNP309和Dell518多态性与ESCC的发病风险可能无关；携带MDM2SNP309T等位基因的基因型（G／T与T／T）和携带Dell518-等位基因的基因型（＋／-与-／-）可分别降低GCA的发病风险：MDM2SNP309T／Dell518-单体型组可以降低GCA的发病风险。     

肺癌NP方案化疗后Hb下降相关因素的探讨

目的：探讨以顺铂联合盖诺的方案化疗后引起Hb下降的临床相关因素。方法：收集157例肺癌患者资料，均采用以顺铂联合盖诺的化疗方案，分别从年龄、病种、病理分型、分期、化疗周期累积量、有无化疗引起消化道反应等方面对Hb下降的影响进行统计学分析。结果：157例病例中有64．33％发生Hb下降，有消化道反应者Hb下降率为74．00％，平均Hb下降6．29g／L，无消化道反应者分别为59．81％和2．69g/L，有消化道反应者平均Hb下降值明显大于无消化道反应者（P〈0．05），而Hb的下降与病理分型、分期、化疗周期累积量、年龄等均无明显相关性（P〉0．05）。结论：NP方案一个周期化疗后对Hb下降的影响在肺癌中发生率很高，尤其是有消化道反应的患者，提示对肺癌患者化疗的同时积极防治Hb下降，可能对提高患者的疗效、改善生活质量、延长生存期具有重要的临床价值。     

激光显微切割结合蛋白质组学技术分析DDAH-1在肝细胞癌表达的变化

目的:应用激光显微切割(laser capture microdissection,LCM)结合蛋白组学技术筛查肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及其癌旁组织的差异表达蛋白,分析二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(dimethylarginine dimethylaminohydrolase1,DDAH-1)在肝细胞癌表达的变化。方法:选取2003-2006年间东方肝胆外科医院原发性肝细胞癌患者的手术切除标本40例。利用LCM技术分离捕获肝癌组织及癌旁组织的肝实质细胞,应用二维凝胶电泳技术(two dimensional gel electrophoresis,2-DE)筛选全部标本共同差异表达频率>80%、差异强度>3倍的蛋白质点;应用电喷雾串联质谱(electrospray ionisation tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对差异蛋白点进行质谱鉴定分析;采用Western blotting及免疫组化对差异蛋白DDAH-1进行检测。结果:2-DE筛查获得在肝癌及癌旁组织差异表达的蛋白质点共20个,通过质谱鉴定获得12个蛋白质,其中5个在肝癌组织表达上调,7个下调;这12个蛋白质与细胞代谢、增殖、分化及信号调控相关,其中的DDAH-1是参与调控一氧化氮相关通路的重要酶。Western blotting检测显示,20例标本中16例DDAH-1表达明显升高;免疫组化检测证实,10例标本DDAH-1全部呈强阳性表达。结论:肝细胞癌组织细胞中筛查到12个差异表达蛋白质,其中的DDAH-1在肝癌组织中表达上调,其有可能在肝癌发生、发展过程中起重要作用。     

hVEGF165腺相关病毒通过Bax和Bcl-2途径抑制细胞凋亡

目的:探讨直接心肌注射基因重组hVEGF165腺相关病毒(rAAV-hVEGF165)对急性心肌梗死大鼠心功能、心肌梗死面积、微血管数量、凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响。方法:81只SD大鼠根据注射药物的不同随机分成4组:假手术组15只,心肌梗死组(MI组)25只,生理盐水组(NS组)25只,血管内皮生长因子(VEGF)组16只。于注射4周后测定超声心动图参数、梗死面积、微血管数量、心肌细胞凋亡指数、心肌组织Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。结果:VEGF组心肌梗死面积较MI组和NS组明显减小(P<0.05)。超声心动图提示VEGF组的射血分数要高于MI组和NS组(P<0.01)。血管计数显示VEGF组有更多的新生血管形成(P<0.01)。结论:直接心肌注射rAAV-hVEGF165能明显改善急性心肌梗死大鼠的心功能,缩小梗死面积,促进心肌内新血管的形成,减少心肌细胞凋亡,抑制Bax的表达,促进Bcl-2的表达。     

醛固酮对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响

目的探讨醛固酮(ALD)在体外是否能够促进人近端肾小管上皮细胞株(HK2)结缔组织生长因子(CTGF)的表达.方法采用体外培养的HK2细胞,分别观察不同浓度(10-11、10-10、10-9、10-8、10-7 mol/L)ALD处理48 h,或用10-9 mol/L ALD处理不同时间(24 h、48 h、72 h)对HK2细胞CTGF表达的影响,应用RT-PCR法检测CTGFmRNA水平的表达.结果HK2细胞培养48 h后,空白对照组即有CTGF的基础表达,ALD不同浓度组CTGF mRNA的表达均有增加,与空白对照组相比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);以10-9 mol/L浓度的ALD作用于HK2细胞,随着作用时间的延长,CTGF mRNA的表达量明显增加,与对照组相比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论ALD能够促进HK2细胞CTGF mRNA水平的表达,并具有剂量依赖性和时间依赖性,ALD可能通过促进CTGF的分泌,发挥其促进肾间质纤维化的作用.     

载体蛋白研究进展

现代生物技术的飞速发展,使传统的疫苗生产方式发生了根本的变化.疫苗研究领域变得异常活跃,从而使新型载体蛋白不断被发现,其作用机制得到全面研究.寻找安全、有效的载体蛋白是目前疫苗领域的课题之一.近年来的初步研究结果为载体蛋白的应用展现了广阔的前景.此文阐述了载体蛋白的作用机制和几种常用的载体蛋白.     

子宫内膜样腺癌组织中bax的表达及与病理特征的关系

目的：探讨子宫内膜样腺癌组织中bax的表达及与临床病理特征之间的关系。方法：采用免疫组化法检测不同类型子宫内膜组织中bax的表达。结果：从单纯性增生、复杂性增生到不典型增生，bax的表达逐渐增多。不典型增生与前二者相比差异有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）。在内膜样腺癌中，随着分化程度的降低bax的表达逐渐降低；随着浸润深度的增加，bax的表达逐渐增加，各组间比较差异有统计学意义（均P〈0．01）。结论：bax参与了癌前病变的发生，bax与子宫内膜样腺癌癌细胞的分化程度、肌层浸润深度有关。     

非小细胞肺癌中AKT活化及与抗凋亡蛋白Survivin、Bcl-2表达的关系

目的：探讨AKT的功能活化状态P-AKT及抗凋亡蛋白Survivin、Bcl-2在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及相关性。方法I应用免疫组化的方法，检测80例NSCLC组织及35例非肿瘤性肺组织标本中p-AKT、Survivin、Bcl-2的表达，并与临床病理因素进行相关性分析。结果：p-AKT、Survivin、Bcl-2在NSCLC中高表达，阳性率分别为78．8％、61．3％、50．0％，显著高于在非肿瘤性肺组织中阳性表达0、0、11．4％（P〈0．05）。p-AKT、Bcl-2在不同年龄、性别、TNM分期、组织分化组以及有无淋巴结转移组均高表达，组间对比差异无统计学意义（P〉0．05）。Survivin表达与TNM分期、组织的分化程度有关（P〈0．05）。P-AKT阳性表达与Survivin、Bcl-2呈正相关；Survivin与Bcl-2二者也呈正相关。结论：在NSCLC中存在AKT的活化，Survivin、Bcl-2的高表达可能与AKT的活化有关。在NSCLC中可能存在p-AKT对Survivin、Bcl-2的正向调控。     

绿色荧光蛋白标记的人脂联素真核表达载体的构建

目的：构建绿色荧光蛋白（GFP）标记的人脂联素（Adiponectin）真核表达质粒。方法：用本实验室已构建好的人脂联素克隆载体pMD18—T／Adiponeetin为模板，结合已设计好的特异性引物。采用PCR方法克隆出Adiponectin目的片段，将该目的片段再连至真核表达载体pcDNA3．1／CT—GFP—TOPO上，转化入TOP10感受态细胞中，通过筛选得到融合有绿色荧光蛋白的重组质粒pcDNA3．1／CT—GFP—TOPO—Adiponectin。结果：PCR获得长度为736bp的目的片段，经pcDNA3．1／CT—GFP-TOPO真核表达载体连接、筛选及序列分析后，证实所插入的目的片段与genebank检索的人脂联素cDNA序列（Accession NM-004797）100％配。结论：绿色荧光蛋白标记的人脂联素真核表达载体构建成功。