采用IL－6cDNA控针检测人IL－6基因表达

采用缺口平移技术对ＩＬ—６ｃＤＮＡ进行了生物素和同位素标记，证明两种标记的ＩＬ－６ｃＤＮＡ（３０ｎｇ／ｍｌ）均可检出低至５ｐｇ的同源ＤＮＡ，而模拟探针（５００μｇ／ｍｌ）对高达１００ｎｇ的同源序列无此反应。应用ＩＬ－６ｃＤＮＡ对富含ＩＬ－６ｍＲＮＡ的标本进行斑点杂交或Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，证明人参三醇皂甙促进了淋巴细胞ＩＬ—６基因表达（４倍），人胎脾单个核细胞、人胎脑组织匀浆和人胎胰岛细胞内均含有高浓度ＩＬ—６ｍＲＮＡ。     

正常人T淋巴细胞cDNA文库一未知DNA片段的克隆与分析（摘要）

正常人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库一未知ＤＮＡ片段的克隆与分析（摘要）蔡铀庆，朱锡华（第三军医大学分子免疫学研究室重庆６３００３８）本研究设计并合成了一对引物。从正常人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库中，采用聚合酶链式反应，经α－互补颜色筛选和ＰＣＲ方法筛选，获得一...     

人鼻咽癌CNE—2Z细胞的不同转移潜能克隆株在严重联合免疫缺…

将人类鼻咽癌不同克隆株的细胞悬液植在严重联合免疫缺陷（ＳＣＩＤ）小鼠和ＢＡＬＢ／ｃ（ｎｕ／ｎｕ）裸小鼠的颈背侧皮下，５６ｄ后处死全部动物进行观察，结果发现，在ＳＣＩＤ小鼠体内移植后ＣＮＥ２Ｌ２为高转移克隆株，其淋巴结转移率为１００％，肺转移率为７１５；而ＣＮＥ２Ｌ４为低转移克隆株，其肺转移率为１３％，淋巴结未见癌转移。这是从１个细胞母系中新筛选出的１个高转移和１个低转移的癌细胞克隆株。实验结果还显     

人胚胎干细胞原代克隆生长及其传代的研究

目的 评价人胚胎干细胞建系与囊胚质量、原代克隆生长的关系。方法 D3废弃胚胎成组共培养获得不同质量的囊胚，免疫刀去除囊胚滋养外胚层细胞后，将内细胞团(ICM)接种到饲养细胞层上生长、传代。结果 从质量好的囊胚得到的人胚胎干细胞传代的代数更多；原代克隆生长快的人胚胎干细胞传代效率更高。结论 人胚胎干细胞建系与囊胚质量、原代克隆生长情况密切相关。     

从卵巢癌cDNA文库中筛选新的肿瘤标志物

采用SEREX法筛选了自行构建的中国人卵巢癌cDNA表达文库 ,得到 2 7个阳性克隆 ,其中 3个为全长cDNA。序列分析和同源性比对结果表明所获得的 2 7个克隆分属于分化抗原、细胞结构蛋白及功能未知三类。选择其中一个全长cDNAMY OVA 13(该基因编码的蛋白是MAD2 ) ,利用基因工程方法克隆、表达和纯化得到目的蛋白 ,采用点杂交方法检测了MY OVA 13目的蛋白与正常人和肿瘤患者中的血清学反应。MY OVA 13抗体只在肿瘤组中检测到 (5 / 74 ) ,在正常组中均为阴性 ;间接ELISA测定结果显示 ,MY OVA 13抗体的水平在肿瘤组中均高于正常组 ,其中肝癌和前列腺癌组与正常组相比 ,在统计学上有显著差异 ,P值分别 <0 0 1和 <0 0 5。我们的初步结果表明MY OVA 13及其抗体具有一定的肿瘤特异性 ,有可能作为肿瘤诊断的标志物     

华支睾吸虫成虫RPEF基因产物及其抗RPEF多克隆抗体的制备

目的 体外制备华支睾吸虫成虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子(RPEF)基因产物及抗RPEF多克隆抗体.方法 亲和纯化试剂盒纯化表达蛋白pGEX-4T-1-RPEF,凝血酶酶切表达蛋白制备重组蛋白RPEF,将重组蛋白RPEF免疫小鼠,制备多克隆抗血清,检测抗体滴度和抗血清特异性.结果 体外制备的RPEF蛋白经SDS电泳呈单一条带;酶联免疫吸附结果显示,免疫过程抗体滴度呈连续上升趋势;免疫印迹结果显示,小鼠抗血清具有抗RPEF特异性.结论 获得较专一的华支睾吸虫RPEF蛋白和RPEF抗血清.     

超抗原SEA联合PML-RARα对外周血T细胞TCR Vβ亚家族基因表达的影响

目的探讨超抗原SEA联合PML-RARα多肽对外周血T细胞TCR邯亚家族基因表达的影响。方法分别将SEA、PML-RARα多肽以及SEA联合PML-RARα多肽与正常人外周血单个核细胞共同培养，20d后收集增殖细胞，利用RT-PCR及基因扫描技术分析诱导后增殖T细胞TCR Vβ亚家族的利用和克隆性增殖的特点。结果单纯SEA诱导后，T细胞表达了11个TCR Vβ亚家族，且仍为多克隆增殖。单纯PML-RARα多肽诱导后，T细胞限制性表达8个Vβ亚家族，其中Vβ13、Vβ14表现出寡克隆或寡克隆趋势。PML-RARα多肽联合SEA共同诱导，其T细胞表达TCR Vβ亚家族依然呈明显的限制性，且Vβ13、Vβ 14亚家族呈寡克隆、双克隆及寡克隆趋势。结论SEA能协同PML-RARα多肽诱导的T细胞克隆性活化与增殖。     

γ射线引起HLA—B8表达缺失黑色素瘤细胞株的克隆研究

用７００ｒａｄγ射线照射ＨＬＡ－Ｂ８＋黑色素瘤细胞，于照射后第３天用抗ＨＬＡ－Ｂ８ＩｇＭ型单抗及补体做免疫选择。存活细胞培养１ｗ后，进行第２次免疫选择。存活细胞继续培养１ｗ，然后用有限稀释法在９６孔平底细胞培养板内进行克隆。从５×１０６个受诱变的细胞中共获得６个细胞克隆，其中１个克隆经流式细胞仪表型分析显示ＨＬＡ－Ｂ８无表达，此细胞的ＲＮＡ经ＲＴ－ＰＣＲ电泳分析表明ＨＬＡ－Ｂ各亚型基因的总表达量减弱，提示克隆到ＨＬＡ－Ｂ８表达缺失的突变株。本研究方法的建立及此突变株的获得，为进一步制备广谱型黑色素瘤“瘤苗”以及研究ＨＬＡｃｌａｓｓⅠ各亚型分子在肿瘤免疫中的作用提供了有力工具。     

递减杂交

递减杂交(Subtractive Hybridization)是一种高效率的筛选特异基因的方法。与经典的菌落筛选最主要的区别是,递减杂交的探针DNA序列一般尚不知晓,待筛选的基因DNA序列亦为未知,唯一了解的是该基因所具有的特异功能。递减杂交的原理即利用待分离的基因在两种不同细胞或组织中表达的差异,经过mRNA或单链cDNA的互相杂交,去除两者间共同的基因成份,而使表达有差异的基因得到充分富集(Enrichment),用这种富集的探针筛选     

甲型副伤寒沙门氏菌体抗原抗血清的简易提纯

目的 单克隆抗体以其结合抗原的专一性用于血清学检验是一种必然趋势,而多克隆机体则以其简易的制备方式在目前仍得到广泛的应用,但多克隆抗体的提纯仍有许多繁琐之处,使其优势受到影响。本试验以甲型副伤寒沙门氏菌体抗原多克隆抗体的制备及提纯为例,提出可行的更简易的提纯方法。方法 利用产G蛋白链球菌,以一种较为简易的特异性结合和解离的方法来纯化甲型副伤寒沙门氏菌体抗原免疫血清。结果 得到了特异性IgG抗体。结论 利用这种纯化方法在实验室简易可行。