凋亡抑制蛋白2在胰腺癌中的表达及其与化疗耐药的关系

目的 观察细胞凋亡抑制蛋白2(c-IAP2)在胰腺癌组织中的表达,探讨c-IAP2表达与胰腺癌细胞对化疗药物耐药性的关系.方法 收集胰腺癌标本32例,应用免疫组织化学染色法观察c-IAP2在胰腺癌及癌旁正常胰腺组织中的表达;体外培养胰腺癌细胞PANC-1,间歇浓度递增法诱导胰腺癌细胞株PANC-1对吉西他滨(Gem)的耐药,噻唑蓝(MTT)检测处理前后细胞对Gem的药物敏感性,免疫荧光和免疫印迹检测c-IAP2蛋白表达水平.结果 c-IAP2在胰腺癌组织均有表达(32/32,100.0%)、癌旁正常胰腺组织(8/18,44.4%)中有表达,胰腺癌表达水平显著强于癌旁正常胰腺组织.c-IAP2的表达强度在不同分化程度的肿瘤组织中的差异有统计学意义(P<0.05).药物培养3个月后,PANC-1对Gem的半数有效浓度(IC50)由(6.03±0.27)mg/L升高至(41.60±1.14)mg/L(P<0.05),免疫荧光和免疫印迹结果显示耐药亚株c-LAP2蛋白表达水平较亲本株升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 C-IAP2在胰腺癌分化程度和对吉西他滨耐药过程中有一定作用.     

红色荧光蛋白标记的裸鼠胰腺癌转移模型的建立

目的 建立稳定、高表达红色荧光蛋白标记的裸鼠胰腺痛转移模型.方法 将RFP基闪转入人胰腺癌细胞株SW1990.评价转染前后细胞生物学行为有无改变,并采用SW1990-RFP建立实验性肺转移模型和实验性肝转移模型.应用整体荧光成像系统评价各组转移模型肿瘤转移的发生.结果 获得稳定,高表达RFP的单克隆细胞系SW1990-RFP,转染前后细胞生物学行为无明显改变.成功建立了裸鼠胰腺癌实验性肺转移模型和肝转移模型,并应用整体荧光成像系统检测到各脏器微小转移的发生.建模成功率均为66.7%(4/6).结论 RFP基因不改变SW1990的细胞生物学行为,本实验所建立的裸鼠胰腺癌转移模型稳定、可靠,具有较强的灵敏性及特异性.     

错配修复基因MLH1突变与散发结肠癌易感性的研究

目的 观察MLH1基因415位点G→C突变在我国汉族结肠癌患者及人群中的分布,探讨此突变与散发结肠癌相关性.方法 收集97例结肠癌患者,138名普通人群,采用聚合酶链反应(Pea)-限制性长度片段多态性分析法检测外周血MLH1415位点基因多念性.采用逆转录(RT)-PCR检测各基因型结肠癌患者正常结肠黏膜的MLH1mRNA表达.结果 结肠癌患者MLH1基因415位点C/C基因型频率明显高于普通人群,P＜0.05;OR=5.29,95% CI:1.07～26.04.各基因型结肠癌患者正常结肠黏膜的MLH1 mRNA表达差异无统计学意义(F=1.31,P＞0.42).结论 错配修复基因MLH1 415位点G→C突变是我国散发结肠癌的遗传易感因素,但未发现此突变影响MLH1 mRNA的表达.     

表达端粒酶逆转录酶siRNA的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用

目的 观察表达针对端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(hTERT siRNA)的溶瘤腺病毒(ZD55-hTERT)抑制肾癌移植瘤生长作用.方法 荷肾癌裸鼠随机分4组,每组8只.瘤体内分别注射ZD55-hTERT、增殖缺陷型腺病毒(Ad-hTERT)、溶瘤腺病毒ZD55-EGFP及磷酸盐缓冲液(PBS),每次注射病毒7×108pfu/只,连续注射3 d.注射后第7天,每组处死3只取肿瘤组织,免疫组织化学检测肿瘤hTERT、E1A表达及凋亡.第50天时处死动物测量肿瘤体积.结果 ZD55-hTERT、Ad-hTERT、ZD55-EGFP及PBS处理组肿瘤体积(mm3)分别为:124.1±27.5、609.0±102.5、499.8±77.1、1552.1±206.4,ZD55-hTERT处理组与各组之间差异有统计学意义(P<0.01).Ad-hTERT处理组肿瘤无E1A表达,ZD55-hTERT处理组E1A大量表达,表明病毒复制.ZD55-hTERT处理组肿瘤hTERT表达显著低于Ad-hTERT处理组,凋亡细胞阳性率均显著高于Ad-hTERT处理组.结论 表达hTERT siRNA的溶瘤腺病毒ZD55-hTERT具有更强的抑制肾癌生长作用.     

腺病毒介导的野生型p53基因逆转乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A耐药性的研究

目的 探讨野生型p53基因对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A耐药性的逆转作用及其机制.方法 选用含野生型p53基因的重组腺病毒载体,转染乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A,绘制细胞生长曲线,利用流式细胞计数仪检测细胞周期分布及凋亡分析、TUNEL法检测细胞凋亡的发生,并采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot印迹转移检测p53基因的表达情况.结果 野生型p53基因转染MCF-7/A后的24、48 h均检测到p53基因的表达,并显著抑制MCF-7/A细胞的增殖;细胞周期发生改变,转染后的MCF-7/A的G0%G1期DNA百分含量(76.22%)明显高于对照组(43.64%,P<0.05),凋亡率(10.76%)与对照组(1.48%)之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 重组腺病毒介导的野生型p53基因对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A的耐药性有明显的逆转作用,其机制可能是引起明显的G1期阻滞并诱导细胞凋亡.     

生物钟基因hPer2在人结直肠癌中的表达及其临床意义

目的 检测hPer2蛋白在人结直肠癌中的表达,探讨其临床意义.方法 取人结直肠癌及癌旁组织各38例,以免疫组织化学方法检测其中hPer2蛋白的表达,并分析其表达与l临床及病理常用指标的关系.结果 在结直肠癌及癌旁正常黏膜细胞中hPer2均有表达,阳性表达率分别为81.6%(31/38)及97.4%(37/38),两者间差异有统计学意义(P<0.05).以癌旁组织为参照,hPer2在癌组织中表达下调者占63.1%(24/38),表达上调者占5.3%(2/38),无明显区别者占31.6%(12/38),其差异有统计学意义(P<0.01).hPer2表达失调与结直肠癌患者年龄≤50岁、肿瘤组织学分级高、浸润深度深、有淋巴结转移、TNM分期晚相关(P<0.05).结论 hPer2在人结直肠癌中表达下调.hPer2表达的失调甚至缺失可能与结直肠癌的生长、浸润、转移相关.     

高效抑制核因子κ—B的茎环RNA基因序列的获得

目的获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中核因子kappa—B表达的shRNA序列。方法根据核因子kappa—B基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3三条针对核因子kappa-B基因cds区的siRNA序列及无意义的对照序列,组建与之对应的4对互补的单链DNA序列,包括siRNA的正义链和反义链：正义链序列按5’向3’顺序依次为：酶切位点（BamH Ⅰ）、干扰序列（19bp）、loop环（TFCAAGAGA）、干扰序列的反向互补序列（19bp）、中止信号（TTTTT）、酶切位点（EcoR Ⅰ）。将合成的序列插入空载体pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector中,转染前列腺癌细胞后,通过real—timePCR检测不同序列片断对核因子kappa—B的mRNA抑制效果。结果设计的3条针对核因子kappa—B的序列中第3条的抑制效果最好,目的序列位于核因子KAPPA—B（NM_021975）的1096到1113,茎环序列为5＇-GATCC GCCCTATCCCTITACGTCA TTCAAGAGA TGACGTAAAGGGATAGGGC TTITT G-3’。其对前列腺癌细胞株中核因子kappa—B的mRNA的干扰效率为59％,对其蛋白表达的抑制率为81％。转染细胞后,细胞可以稳定低表达核因子kappa—B。结论成功获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中核因子kappa—B表达的shRNA序列,为后期研究核因子kappa-B在前列腺癌发病中的作用机理等研究提供了基础。     

经皮经肝穿刺注射碘油化疗药物治疗原发性肝癌门静脉癌栓的临床研究

目的观察彩色多普勒超声定位引导下经皮注射碘油化疗药物乳剂治疗原发性肝癌并发门静脉癌栓的临床疗效。方法对21例患者,以21G注射针经皮经肝穿刺进入门静脉癌栓内,在超声监视下缓慢注射吡柔比星与超液化碘化油乳剂。结果21例患者前后共接受56次序贯治疗。治疗2～3次后15例患者癌栓缩小,其内可见条状静脉血流通过,有效率为71.43%。结论经皮经肝穿刺门静脉癌栓序贯注射碘油化疗药物乳剂是原发性肝癌并发门静脉癌栓的有效治疗手段。     

Comparison of Surgically Resected Polypoid Lesions of the Gallbladder to their Pre-operative Ultrasound Characteristics

Background  Polypoid lesions of the gallbladder (PLG) have been a common finding on ultrasound examinations of the abdomen and are more prevalent since our use of equipment incorporating pulse shaping increased bandwidth, and enhanced phase use for image reconstruction began in 1996. Our study correlates the pre-operative ultrasonographic findings of these lesions to the surgically resected specimen with specific regard to identifying neoplastic polyps. Methods  A retrospective review was performed of 130 patients who had a pre-operative ultrasound of the gallbladder and subsequently underwent cholecystectomy between August 1996 and July 2007 at the Mayo Clinic Rochester. Results  Seventy-nine pseudopolyps (cholesterol polyps, inflammatory polyps, and adenomyomas) and 15 neoplastic polyps were identified on histopathologic analysis. However, 36 patients (27%) did not have a PLG upon histopathologic analysis. Thirty-one polyps had suspicious ultrasonographic characteristics for neoplastic changes. Twenty-nine were ≥10 mm, 12 had vascularity, and one demonstrated invasion. Of these, there were 23 pseudopolyps and six true polyps with neoplastic changes on final pathology (four dysplastic adenomas and two adenocarcinomas). Three asymptomatic polyps ≤10 mm (4%) in maximum diameter based on pre-operative ultrasound imaging (US) had neoplastic changes at pathology (two dysplastic adenomas and one adenocarcinoma). Several statistically significant risk factors were identified that increased the likelihood for malignancy in a PLG: history of primary sclerosing cholangitis (PSC), local invasion, vascularity, and ≥6 mm maximum diameter based on pre-operative US. Of PLGs ≤10 mm, 7.4% were neoplastic. Twenty-five patients were followed up with at least two serial ultrasound examinations. Of these, seven demonstrated polyp growth. None of these specimens demonstrated neoplastic changes. The positive predictive value (PPV) and negative predictive value (NPV) for ultrasound diagnosing neoplastic changes based on current criteria was 28.5% and 93.1%, respectively, with a false negative rate of 5.0%. Expanding the criteria to include cholecystectomy for PLGs ≥ 6 mm changes the positive predictive value and negative predictive value to 18.5% and 100%, respectively, with a false negative rate of 0%. Conclusion  Histopathologic analysis of polypoid lesions of the gallbladder continues to be the gold standard to identify malignancy. Ultrasound has been used extensively in the pre-operative management of these lesions, but modern ultrasound techniques are unable to differentiate between benign and malignant PLGs with any certainty. We recommend that strong consideration be given to surgical resection of PLGs ≥ 6 mm based on pre-operative US due to the significant risk of neoplasm. Additionally, PLGs in all patients with PSC, any patient in whom diligent long-term follow-up cannot be completed, and lesions that demonstrate growth, vascularity, invasion, or are symptomatic require cholecystectomy. Presented at SSAT at the DDW     

细胞周期蛋白D1在三氧化二砷抑制人胆囊癌细胞生长中的作用

目的 探讨细胞周期蛋白(Cyclin)D1在三氧化二砷(As2O3)抑制人胆囊癌细胞体外生长中的作用.方法 不同浓度的As2O3作用于胆囊癌细胞GBC-SD,MTT法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期分布.Western印迹和RT-PCR检测Cyclin D1、D2、D3和CDK4、K6的蛋白和mRNA表达.构建Cyclin D1的表达质粒并转染GBC细胞,观察Cyclin D1过表达时细胞周期的变化.结果 As2O3能抑制胆囊癌细胞生长,作用呈时间、剂量一效应关系;流式细胞仪检测发现As2O3可将增殖过程中的胆囊癌细胞阻滞于G1期;Western印迹及RT-PCR检测显示Cyclin D1表达下降;过表达Cyelin D1逆转了As2O3对细胞周期的改变.结论 Cyclin D1在As2O3抑制人胆囊癌细胞的生长中起重要作用.