子宫内膜癌细胞中孕激素受体的多因素调节

目的　通过体外实验研究雌激素、孕激素、胰岛素 /胰岛素样生长因子Ⅰ (Insulin -likegrowthfactorⅠ ,IGF -Ⅰ )对内膜癌细胞中孕激素受体 (Progesteronereceptor,PR )亚型表达的调节 ,探讨内膜癌细胞中PR亚型表达的意义。方法　体外培养高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa ,按实验目的分别加入雌激素、孕激素、雌激素孕激素联合、胰岛素及IGF -Ⅰ刺激 2 4h、 4 8h后 ,采用Westernblot方法测定各个条件下内膜癌细胞中两种孕激素受体亚型的表达。结果　内膜癌细胞Ishikawa在自然状态下 ,PR -A和PR -B均阳性表达 ;细胞经血清限制后 ,总PR及两种亚型都明显下调。雌激素可以上调细胞中PR -A和PR -B表达水平 ,但在高血清时明显。孕激素单独或雌、孕激素联合应用在 4 8h时都可以降低Ishikawa细胞中PR表达。胰岛素 /IGF -Ⅰ在 2 4h时可以上调PR -B水平 ,4 8h时此上调作用消失。结论　①雌激素对PR的上调作用与血清浓度有关 ,血清中可能含有雌激素作用所需要的某些因子 ;②孕激素对内膜癌细胞Ishikawa中PR有下调作用 ;③胰岛素 /IGF -Ⅰ可以上调内膜癌细胞中PR表达 ,主要是PR -B表达 ,但此作用持续时间短     

MRP在非小细胞肺癌和正常肺组织中表达及其预后意义的研究

背景与目的　肿瘤多药耐药是导致肿瘤化疗失败的主要原因。多药耐药相关蛋白(MRP)在非 小细胞肺癌中的表达意义和导致耐药的机制倍受关注,其研究结果对逆转多药耐药、提高化疗疗效意义重大。 本研究旨在探讨正常肺组织和非小细胞肺癌中MRP的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法 　采用SP免疫组织化学法检测62例具有完整随访资料的非小细胞肺癌组织标本中MRP的表达,并联合应 用Westernblot对30例新鲜非小细胞肺癌和相应正常肺组织中MRP的表达进行了研究。结果　正常肺组 织MRP表达水平明显低于肺癌组织(P<0.05)。MRP表达与患者性别、组织分型、细胞分化程度、淋巴结转 移均无明显关系(P>0.05)。MRP阴性表达的非小细胞肺癌患者术后生存期为69.81月±17.41月,阳性者 为25.38月±4.46月(P=0.0156)。MRP阴性的鳞癌患者术后生存期为79.86月±20.35月,阳性者为 23.41月±4.48月(P=0.015);腺癌中MRP表达与生存期无相关性。COX模型分析表明,术后生存期与淋 巴结转移(P=0.038)、MRP表达(P=0.035)呈显著负相关。结论　非小细胞肺癌的MRP表达明显高于正 常肺组织,MRP阴性的患者术后生存期明显长于阳性者,MRP表达可能是影响非小细胞肺癌预后的独立因 素。     

Expression of various multidrug resistance-associated protein (MRP) homologues in brain microvessel endothelial cells

Multidrug resistance-associated protein (MRP) actively transports a broad range of anionic compounds out of the cell. To date, six different homologues of MRP (i.e. MRP1-MRP6) have been identified. The current study examines the expression of the various MRP homologues in both primary cultured bovine brain microvessel endothelial cells (BBMEC) and the capillary-enriched fraction from bovine brain homogenates. RT-PCR analysis demonstrated the presence of MRP1, MRP4, MRP5 and MRP6 in both BBMEC and the capillary-enriched fractions of brain homogenates. While low levels of MRP3 were detected in the BBMEC, it was not observed in the capillary-enriched fraction. In addition, RT-PCR and Western blot studies indicated an absence of MRP2 expression in both blood-brain barrier preparations. The presence of several different MRP homologues in the brain microvessel endothelial cells may be important in controlling the permeability of the blood-brain barrier to organic anions.     

人谷胱甘肽硫转移酶A1原核表达系统的构建及高效表达

目的　对人谷胱甘肽硫转移酶A1(GSTA1)原核表达系统的构建及高效表达。方法　采用RT -PCR方法将肝组织中提取总RNA扩增人GSTA1基因的cDNA序列 ,将其插入到原核表达载体pET30a多克隆位点中 ,构建重组表达质粒 ,并用PCR扩增、酶切分析及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定 ,并进行了高效表达。结果　人GSTA1克隆到原核表达载体pET30a多克隆位点中 ,测序结果同GenbankGSTA1(GI:2 2 0 914 5 3)cDNA序列相比较 ,在 5 12位点T→C ,氨基酸由Met→Thr,同源性为 99% ,基因登陆号为AY5 32 92 8。通过IPTG诱导表达 ,在 34.4KDa处 1、2、3、4小时的表达量分别为 4 1.8%、6 8%、6 8.3%、83%。结论　经Westernblot分析 ,证实GSTA1基因在原核表达系统中有蛋白质表达     

应用PCR-反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌耐链霉素基因型

目的 应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌对链霉素(SM)的耐药性。方法 设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐SM基因rpsL和ms的寡核苷酸探针，点于硝酸纤维素膜上，与结核分枝杆菌分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进行反向斑点杂交，并与PCR-单链构象多态性(PCR—SSCP)和PCR-直接测序(PCR-DS)结果比较。结果 53株结核分枝杆菌临床分离株中，三种检测方法符合率为100％。9株敏感株rpsL和ms基因的SSCP图谱、膜杂交结果与标准株完全相同；44株耐SM菌株中，33株存在rpsL基因43位密码子AAG→AGG突变，6株有ms基因513位A→C突变，1株有ms基因513住A→T突变，突变检出率为90．9％，40株耐SM菌株和9株敏感株可用膜杂交方法检测出来，与传统药敏试验方法检测符合率为49／53。结论 应用膜反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐SM基因型灵敏度高、特异性好、简便、快速，可用于临床耐药性检测。     

反向点杂交快速检测流感嗜血杆菌

目的　研究以分子杂交为基础的流感嗜血杆菌 (Hi)的快速检测方法。方法　将Hi探针固定在尼龙膜上 ;用标记有地高辛的细菌通用引物聚合酶链反应 (PCR)扩增不同细菌DNA ,产物分别与点有探针的膜条杂交。结果　 8种细菌均扩增出 4 6 8bp目的带 ,而人白细胞及轮状病毒DNA扩增均阴性。 6株Hi杂交阳性 ,7株其他临床常见菌杂交结果阴性。结论　反向点杂交法简便、快速、准确 ,是检测Hi的一种理想方法。     

肺癌细胞系内皮蛋白C受体的表达及其意义

目的 从细胞、蛋白和基因三个水平分析内皮蛋白C受体（endothelial protein C receptor，EPCR）在肺癌细胞系的表达。方法 以EA．hy926内皮细胞作阳性对照，人胚肺W138细胞作阴性对照，通过流式细胞术、West-ern．blot及半定量逆转录-聚合酶链反应分析EPCR在6种肺癌细胞系的表达水平。结果 6株肺癌细胞系均有EPCR的表达。高转移肺癌95D细胞表达最高。结论 EPCR的表达是肺癌细胞的重要特征，可能与肺癌增殖及转移有关。     

阿奇霉素治疗早期梅毒患者血清学变化的分析

目的观察阿奇霉素在早期梅毒治疗中的疗效并探讨免疫印迹法(WB)在梅毒血清学诊断中的意义。方法对确诊为早期梅毒的26例患者采用阿奇霉素500 mg/d,1次/d,连续10 d空腹口服治疗。治疗后3个月、6个月、1年、2年随访并做快速血浆反应素(RPR)、梅毒颗粒凝集实验(TPPA)、WB血清学检查。结果治疗3个月后26例临床症状明显消失或消退,RPR 17例(65.4%)阴转,WB 3例(11.5%)阴转;6个月后RPR 25例(96.2%)阴转,WB 3例(11.5%)阴转;1年后RPR 26例(100%)阴转,WB 4例(15.4%)阴转;2年后RPR 26例(100%)阴转,WB 10例(38.6%)阴转。结论RPR在短时间内转阴率高,阿奇霉素治疗早期梅毒疗效肯定。免疫印迹法在梅毒的早期诊断中具有高度特异性和敏感性,可以作为早期梅毒的确诊方法。     

Brn-4在偏侧帕金森病大鼠模型纹状体中的表达变化

目的:探讨Brn-4在偏侧帕金森病大鼠模型纹状体中的表达变化。方法:用6-OHDA注入80只SD大鼠右侧前脑内侧束(medialforebrainbundle,MFB),行为学检测得成功PD模型48只,随机分成7d、14d、21d、28d4组,每组各12只。每组中的6只动物和6只正常对照大鼠的纹状体进行Brn-4Westernblot检测;另6只动物的纹状体进行Brn-4免疫组化染色。结果:Westernblot检测发现Brn-4的相对表达量(Brn-4/β-actin)正常对照组为0.123±0.02,7d组为0.538±0.04,14d组为0.192±0.05,21d组为0.122±0.02,28d组为0.084±0.02;而模型侧/正常侧纹状体Brn-4阳性细胞的比值7d、14d、21d和28d组分别为1.560±0.14,0.855±0.15,0.638±0.11和0.369±0.10。结论:PD大鼠模型纹状体中Brn-4蛋白于前脑内侧束注射6-OHDA后7d表达量急剧增高,而14d后则急剧下降,到28d时已低于正常水平。