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101.
探讨反向线性杂交技术(reverse line blot assay,RLB)在结核分枝杆菌利福平(RFP)耐药性快速检测中的应用价值.采用RLB将包含rpoB基因核心区的扩增产物与标记特异性探针的膜进行杂交,共对121株结核分枝杆菌进行RFP耐药性检测,并将结果与常规药敏实验进行比较.结果发现,121株中有71株对RFP耐药,56株为多重耐药株;采用RLB共检测到65株RFP耐药株rpoB基因核心区存在突变,其灵敏度为91.5%(65/71);50株RFP敏感株中均未检测到突变,则特异性为100%(51/51);56株多耐药菌株中,92.9%(52/56)存在rpoB基因核心区突变.因此,用RLB检测结核分枝杆菌RFP耐药株具有快速,高效,特异性和灵敏度高的优点,且可用于多耐药菌株的筛选,具有推广和潜在的临床应用价值. 相似文献
102.
本文用匀浆及超声波破碎杜氏利什曼原虫四川犬分离株前鞭毛体,蔗糖密度梯度离心分离其表膜,电镜观察见所得样品是单位膜和膜下微管组成的表膜,测得微管直径平均为23.3nm,微管间距巨平均为15.7nm,经SDS-PAGE分离显示1条主带,次带约15条,再转移到硝化纤维膜上,用单克隆抗体2H6-E3识别,仅见有一条区带,分子量为63kDa,该单克隆抗体是己经被证实定位于前鞭毛体表膜,并具有免疫保护性的。 相似文献
103.
应用反向斑点杂交技术进行脐血HLA-DRB基因分型方法的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率,但操作过程复杂,仅适于大样本的HLA分型。PCR-SSP基因分型方法分辨率较低,但操作过程简单,适于临床要求。有必要建立一种简便、快速、价廉、高分辨率的基因分型方法。本研究取63份已知HLA-DRB型的脐血标本,经盐酸胍方法提取DNA用于反向斑点杂交(RDB)基因分型,同时采用SSOP和PCR-SSP方法进行比较。结果表明,所有样本用RDB方法基因分型均获得成功,可准确地分辨60个HLA-DRB等位基因,且结果与用SSOP和PCR-SSP方法的结果完全一致。结论提示,RDB方法可准确地分辨HLA-DRB等位基因,分辨率高,操作简单,适用于各种情况的HLA分型。 相似文献
104.
目的探讨体外雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7表达SiSo细胞上的受体结合肿瘤抗原(RCAS1)分子的影响。方法用浓度为10-12~10-8mol/L的雌激素或浓度为10-9~10-5mol/L的孕激素作用乳腺癌细胞MCF-7后,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCF-7细胞RCAS1 mRNA水平的变化,用蛋白免疫印迹试验分析MCF-7细胞表达RCAS1蛋白水平的变化。结果在10-12~10-8mol/L范围内随着雌激素浓度的增加,MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈递增趋势,在10-11、10-10、10-9、10-8mol/L范围内雌激素组与未处理对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。随着10-9~10-5mol/L的孕激素浓度的增加,MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈下降趋势,孕激素各组与未处理对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。用RCAS1单克隆抗体能检出相对分子质量为32 000的条带,其灰度随着雌激素浓度的增加而增强,随孕激素浓度的增加而减弱。结论雌激素可上调MCF-7细胞的RCAS1分子表达,孕激素可下调MCF-7细胞的RCAS1分子表达。 相似文献
105.
目的制备特异性抗人丙氨酸氨基转移酶(ALT)单克隆抗体(McAb)并鉴定其特性。方法用纯化的ALT抗原(20μg/次)免疫BALB/C小鼠5只,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞(按细胞数5∶1比例)融合,采用间接ELISA筛选杂交瘤细胞,阳性孔经3次有限稀释法克隆。用ELISA检测腹水及上清的抗体效价和相对亲和力,用Western blotting检测McAb的特异性,用秋水仙素阻断法进行染色体分析。结果得到1株杂交瘤细胞株(7D1),其染色体数目为95—106,其分泌的抗体为IgG1,轻链为κ型;上清和腹水抗体效价分别为10-4和10-6;SDS-PAGE显示该抗体在55和25 kD附近各有1条带,与预计的分子量大小一致。纯化抗体的亲和常数为2.2×1011。PAGE后Western blot检测显示该McAb可与人血清中的ALT结合。结论所制备的杂交瘤细胞株能分泌抗人ALT的特异性McAb。 相似文献
106.
目的:探讨快速有效的椎间盘软骨终板组织总蛋白提取方法.方法:采用一般法、外加超声法及液氮研磨法提取兔椎间盘软骨终板组织的总蛋白,并用BCA法测蛋白浓度,再用蛋白印迹检测软骨终板组织中目的蛋白1(65 kDa)、目的蛋白2(30 kDa)及β-actin(42 kDa)的表达.结果:提取107个兔椎间盘软骨终板组织,其中一般法17个,其浓度为(0.911±0.211)mg/mL;外加超声法14个,其浓度为(2.021±0.258)mg/mL;液氮研磨法76个,其浓度为(3.121±0.248) mg/mL,经统计分析,任何两种方法间蛋白浓度差异有统计学意义,液氮研磨法所得蛋白浓度最高;且液氮研磨法所得的总蛋白经蛋白印迹得到目的蛋白-1、目的蛋白-2及β-actin的清晰条带.结论:液氮研磨法可以作为少量软骨组织蛋白提取的一种理想方法,可以在一般实验室中展开,进而可在蛋白质水平上进行相关功能的研究. 相似文献
107.
目的:研究深圳市宝安区女性人乳头瘤病毒(HPV)感染情况,以及不同年龄段 HPV 阳性率和各亚型的分布情况。方法采用聚合酶链式反应-反向斑点杂交法(PCR-RDB)对2011年1月至2012年12月在深圳市宝安区妇幼保健院就诊的患者(2627例)进行23种 HPV 基因分型检测。结果2627例样本中 HPV 阳性率为23.94%(629例)。其中单一低危型感染占15.10%,以 HPV43型为主;单一高危型感染占55.17%,以 HPV52、HPV16、HPV58型为主;混合感染占29.73%。15~<21岁、21~<31岁、31~<41岁、41~50岁与>50岁年龄组 HPV 感染率分别为50.0%、24.7%、20.8%、25.8%、42.1%,差异有统计学意义(P <0.05)。结论深圳市宝安地区 HPV 感染率为23.94%,基因型分布以 HPV 52、16、58、43型为主,15~20岁年龄段感染率高于其他年龄段。 相似文献
108.
目的采用基因工程技术构建风疹病毒复合多表位肽,探讨其对风疹病毒感染的血清学诊断价值。方法根据风疹病毒主要抗原分子E1、E2,设计并构建风疹病毒复合多表位肽的重组表达载体,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在大肠埃希菌Rosetta中进行诱导表达,并用Ni2+螯合柱亲和纯化获得复合多表位肽;经western blot鉴定其对风疹病毒感染后的Ig M阳性血清的免疫反应性;建立基于风疹病毒复合多表位肽的Ig M-ELISA检测方法,用于风疹病毒感染患者中血清Ig M抗体的检测。结果成功构建风疹病毒复合多表位肽,在大肠埃希菌Rosetta中获得了高效表达;纯化后的风疹病毒复合多表位肽经western blot分析显示,复合多表位肽对风疹病毒Ig M阳性血清具有较好的免疫反应性;Ig M-ELISA法检测结果表明,重组的复合多表位肽能够检测出风疹病毒感染后Ig M阳性血清,与Ig M阴性血清不发生反应。结论制备的风疹病毒复合多表位肽具有良好的抗原性,可用于风疹病毒感染患者Ig M抗体的检测,提高风疹病毒感染的诊断效能。 相似文献
109.
原发性肝癌组织HBVDNA存在状态及HBsAg,HBcAg表达的检测 总被引:3,自引:1,他引:3
本文采用Southern印迹杂交技术检测原发性肝癌(PHC)组织HBVDNA存在状态,同时应用免疫组化染色检测PHC组织内HBsAg、HBcAg表达,并比较HBsAg、HBcAg在PHC组织与癌旁肝组织的定位分布。结果显示:整合型HBVDNA在32例PHC组织检出率71.9%(23/32),癌旁组织检出率40.7%(11/27);PHC组织内检出HBSAg阳性细胞12例(37.5%)未检出HBCAg;癌组织检出HBsAg26例(96.3%),HBcA95例(18.5%)。结果提示:HBV感染与PHC发生密切相关,HBV可能通过整合于宿主细胞染色体对PHC发生起一定作用。 相似文献
110.