人β-catenin-EGFP融合表达慢病毒载体构建及在毛囊干细胞中的表达

目的 构建人β-连环蛋白(β-catenin)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的慢病毒载体,感染人毛囊干细胞并予以鉴定.方法 提取人血管内皮细胞总RNA,RT-PCR扩增获得β-catenin基因全部序列,采用TA克隆技术获取基因亚克隆pUCm-T-β-catenin,AgeⅠ酶切连接pGC-FU载体构建β-catenin融合EGFP共表达慢病毒载体质粒pGC-FU-β-catenin-EGFP.质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经RT-PCR及测序鉴定正确后转染FT293细胞,Western blotting分析鉴定.质粒再转染FT293细胞进行慢病毒质粒包装,荧光显微镜观察,Real-time PCR测定病毒滴度.包装后慢病毒质粒感染体外分离和培养经免疫荧光染色鉴定的人毛囊干细胞,RT-PCR鉴定,荧光显微镜观察感染效率.结果 RT-PCR及测序鉴定证实目的 基因正确克隆至慢病毒载体中.在转染pGC-FU-β-catenin-EGFP的FT293细胞,Western blotting证实细胞表达β-catenin;质粒包装后荧光显微镜观察FT293细胞见大量绿色荧光时测得病毒滴度为2.0×108 TU/mL.在感染慢病毒质粒的人毛囊干细胞,当感染复数为10时,感染后48 h的感染效率可达80%以上,感染后3周的感染效率仍维持在80% ～90%.结论 成功构建β-catenin-EGFP融合表达慢病毒载体,可高效感染人毛囊干细胞且表达稳定、持久.     

养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区GSK-3β及β-catenin蛋白表达的影响

目的：观察养血清脑颗粒对血管性痴呆（VD）大鼠海马CA1 区糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）蛋白及β-连环蛋白（β-catenin）表达的影响。方法：72只实验SD大鼠随机分为假手术组、VD模型组（模型组）和养血清脑颗粒治疗组（治疗组）,采用改良的Pulsinelli四血管阻断法制作VD大鼠模型,分别在术后1、2、4和8周采用免疫组化法和Western blotting法检测海马CA1区GSK-3β及β-catenin表达水平。结果：模型组各时间点GSK-3β蛋白表达增多,1周时即有多量表达,2周时大量表达,4周时达高峰,8周时开始下降但仍较高。与假手术组相比,模型组各时间点GSK-3β蛋白表达增多,有统计学意义（P<0.01）。各时间点β-catenin蛋白表达增多,但与假手术组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。治疗组各时间点GSK-3β及β-catenin蛋白表达明显增多,与模型组相比,有统计学意义（P<0.01）。结论：养血清脑颗粒可通过上调GSK-3β及β-catenin蛋白的表达,发挥对VD的治疗作用。     

小鼠毛囊再生与胸腺素β4的促进效应

背景：近年来研究表明,胸腺素β4与毛囊的生长发育和毛发的生长周期有着密切关系,但其作用机制尚不清楚。目的：探讨胸腺素β4通过Wnt信号通路作用于毛囊干细胞对毛囊再生的促进作用。方法：将实验小鼠随机分为低剂量胸腺素β4组、高剂量胸腺素β4组和对照组,使用松香/石蜡混合制剂建立脱毛模型。低剂量胸腺素β4组和高剂量胸腺素β4组给药浓度分别为0.3μg/50μL和3μg/50μL,对照组给予等量PBS,每隔12 h给药1次,均匀涂抹于小鼠脱毛背部。应用大体照相、苏木精-伊红染色、免疫组化及原位杂交技术,观察毛发生长情况,检测不同时间点和不同给药浓度下小鼠毛囊根部细胞β-catenin、LEF-1 mRNA的表达水平。结果与结论：低剂量胸腺素β4组毛发再生速度高于高剂量胸腺素β4组和对照组。苏木精-伊红染色显示在脱毛初期,各组小鼠真皮和皮下脂肪层有一定炎性细胞浸润,9d时,低剂量胸腺素β4组生长期毛囊数量明显多于高剂量胸腺素β4组和对照组。免疫组织化学和原位杂交结果分别显示β-catenin和LEF-1 mRNA主要表达于毛囊隆突部和外根鞘处细胞的胞浆中,经积分吸光度分析发现低剂量胸腺素β4组阳性细胞数量和染色强度高于高剂量胸腺素β4组和对照组（P＜0.05）,高剂量胸腺素β4组与对照组间差异无显著性意义。结果显示低剂量的胸腺素β4可以增加部分毛囊外根鞘处细胞内β-catenin和LEF-1 mRNA的表达。胸腺素β4可以促进毛囊再生的机制可能与影响Wnt信号通路有关。     

E-钙粘蛋白和β-连环蛋白在涎腺腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨E-钙粘蛋白和β-连环蛋白在涎腺腺癌中的表达程度。方法:收集20例原发于涎腺腺癌的石蜡标本,采用免疫组化方法(SP法)检测分析E-钙粘蛋白及β-连环蛋白在肿瘤细胞中的表达。结果:E-钙粘蛋白与β-连环蛋白在正常涎腺组织中有正常表达,而在涎腺腺癌中则是弱表达,甚至不表达,高分化腺癌组与中、低分化腺癌组之间有显著性差异(P<0.05)。结论:E-钙粘蛋白与β-连环蛋白在涎腺腺癌中存在异常表达,并与腺癌的病理分级有关,与肿瘤的侵袭、转移和复发有一定的关系。     

骨硬化蛋白对牙骨质形成的影响及其机制

骨硬化蛋白是一种含有胱氨酸结的分泌型糖蛋白,可通过骨细胞突触传递至骨表面并作用于周围的成骨细胞,从而降低骨的发生发育速度。其机制在于骨硬化蛋白与无翅型小鼠乳房肿瘤病毒整合位点家族蛋白竞争性地结合辅助受体低密度脂蛋白受体相关蛋白5/6,促进β-连环蛋白磷酸化并降低β-连环蛋白水平,从而抑制成骨细胞的分化及活性。牙骨质为连接牙体和牙周组织间的桥梁,其功能在于维系牙体的稳固和牙周组织的健康。骨硬化蛋白参与并影响牙骨质的发生发育等各种生理性活动,因此进一步深入探讨骨硬化蛋白这一骨形成负性调控因子与牙骨质间的相互作用和机制,将有助于牙骨质相关再生领域的发展。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人子宫肌瘤细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人子宫肌瘤细胞增殖的影响及其机制.方法 获取人子宫肌瘤组织后提取人子宫肌瘤细胞.将细胞分为对照组、50μmol/L EGCG组、100μmol/L EGCG组、200μmol/L EGCG组,各EGCG剂量组分别加入相应浓度的EGCG,对照组加入等体积的磷酸缓冲盐溶液.干...     

急性肺损伤小鼠长链非编码RNA LL33和β连环蛋白表达及意义

目的 探讨长链非编码RNA LL33(LncRNA LL33)、β连环蛋白(β-catenin)在小鼠急性肺损伤(ALI)发生、发展中的动态表达规律,分析其在ALI中的作用.方法 采用清洁级雄性BALB、c小鼠气管内滴注细菌脂多糖(5 mg/kg)建立小鼠ALI模型(n=70),对照组给予等量生理盐水(n=70).每组...     

Wnt/β-连环蛋白信号通路在部分器官缺血再灌注损伤中的研究进展

缺血再灌注损伤是发生在许多器官和疾病中的病理过程,主要包括两个阶段,一是缺血期缺氧诱导的细胞损伤,二是血流恢复后所引起的一系列级联反应。缺血再灌注损伤可加重细胞和组织损伤。Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路在细胞增殖、分化、凋亡过程中起重要作用,是一个高度保守的信号级联通路。越来越多的研究发现,激活Wnt/β-catenin信号通路可减轻缺血再灌注损伤。本文就Wnt/β-catenin信号通路在部分器官缺血再灌注损伤中的研究进展进行综述。     

钆塞酸二钠增强磁共振成像在肝细胞癌生物学行为评估中的应用进展

肝细胞癌是肝脏最常见的原发性恶性肿瘤,是癌症相关死亡的第三大原因.钆塞酸二钠(gadolinium ethoxybenzyl diethylenetriamine pentaacetic acid,Gd-EOB-DTPA)为目前常用的新型肝脏特异性对比剂,其诊断小肝细胞癌的敏感度和特异度均可高于90％.肝细胞癌的早期诊...     

N- cadherin, E- cadherin and β- catenin expressions in human brainstem gliomas

Objective To explore the expression and significance of N - cadherin, E - cadherin and β - catenin in human brainstem gliomas. Methods N - cadherin, E - cadherin and β - catenin proteins and mRNA were detected in 38 cases of brainstem gliomas using immunohistochemistry and RT - PCR Methods. Results There was no significant difference in the expression of N - cadherin between grades Ⅰ ～ Ⅱ and grade Ⅲ ～ Ⅳ ( P ＞ 0. 05) . The expression of N - cadherin mRNA in human brainstem gliomas of grade Ⅰ ～ Ⅱ was significantly lower than that in grade Ⅲ～ Ⅳ ( t = 2. 711, P ＜ 0. 05 ). There was no significant difference in the expression of E - cadherin and E - cadherin mRNA between grade Ⅰ ～ Ⅱ and grade Ⅲ～ Ⅳ ( P ＞ 0. 05 ). The expression of β - catenin in human brainstem gliomas of grade Ⅰ ～ Ⅱ was significantly lower than that in grade Ⅲ ～ Ⅳ ( P ＜ 0. 05 ). As regard to β -catenin mRNA, there was no significant difference between grade Ⅰ ～ Ⅱ and grade Ⅲ ～ Ⅳ ( P ＞ 0. 05 ). Conclusions The over -expressionof N - cadherin and β - catenin may play an important role in the invasion and malignant progression of human brainstem gliomas.