Pin1 overexpression in colorectal cancer and its correlation with aberrant β-catenin expression

AIM: To investigate clinical significance of Pin1 and beta-catenin expression in colorectal cancers and to demonstrate the relationship of their expression. METHODS: The role of Pin1 and beta-catenin protein in colorectal tumorigenesis and their clinicopathologic significance were analyzed by immunohistochemistry, and the correlation between Pin1 and beta-catenin protein expressions was also studied in 124 patients with colorectal cancer who were surgically treated. RESULTS: Normal colonic epithelium either failed to express or showed focal and weak expression of Pin1 and beta-catenin. Overexpression of Pin1 and beta-catenin protein was found in 23 (18.54%) and 50 (40.3%) of 124 colorectal cancers, respectively. Overexpression of both proteins was not related to the lymph node metastasis, tumor stage and survival period after excision. Survival analysis results indicated that tumor stage was a valuable predictor of survival. Interestingly, a significant correlation was found between Pin1 and beta-catenin protein expression. CONCLUSION: Overexpression of Pin1 and beta-catenin may be closely related with the development and/or progression of colorectal carcinoma and further supports that Pin1 overexpression might contribute to the upregulation of beta-catenin.     

血小板活化因子受体拮抗剂对内毒素血症幼年大鼠肠黏膜上皮细胞间连接蛋白的影响

目的观察血小板活化因子（PAF）对内毒素血症大鼠肠黏膜上皮细胞间连接蛋白β-连环蛋白（β-catenin）的影响，探讨PAF受体拮抗剂对肠上皮屏障完整性的保护作用机制。方法采用腹腔注射脂多糖（LPS）制备内毒素血症大鼠模型。于注射LPS前和注射后30min腹腔注射PAF受体拮抗剂BN52021 5mg／kg作为预防组和治疗组；腹腔注射等量生理盐水作为对照组。分别于注射LPS后1．5、3、6、24、48和72h取各组大鼠回肠，用免疫组化及逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测肠上皮细胞β-catenin蛋白及mRNA表达。结果对照组β-catenin均匀分布于上皮细胞间细胞膜的表面；内毒素组细胞膜表面β-catenin蛋白明显减少，分布不均。免疫组化和RT—PCR检测均可见内毒素组β-catenin蛋白及mRNA水平明显低于对照组，3～24h内降低非常明显（P均〈0．01）；预防组及治疗组变化趋势同内毒素组，各时间点β-catenin蛋白及mRNA水平均较内毒素组高，但差异无显著性。结论PAF在内毒素血症肠黏膜的机械屏障功能损伤中发挥一定作用，预防和治疗性应用PAF受体拮抗剂BN52021可减轻肠损伤。     

透骨消痛颗粒对关节软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路的调控

背景:由巴戟天、杭白芍、肿节风和川芎等组成的透骨消痛颗粒能有效延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变.目的:观察透骨消痛颗粒对软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路中Wnt4、糖原合成酶3.及.-连环蛋白的影响.方法:将SD 大鼠关节软骨细胞分离培养成功后,人白细胞介素 1β诱导软骨细胞退变,取第2 代退变软骨细胞,随机分为对照组和透骨消痛颗粒组,后者加入透骨消痛颗粒醇提物,分别培养4,8 d 后,采用RT-PCR 检测2 组Wnt4、糖原合成酶3β、β-连环蛋白mRNA 表达,采用蛋白印迹法检测Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达.结果与结论:采用人白细胞介素1β可诱导软骨细胞退变,软骨细胞退变早期均有Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达,但随着时间推移Wnt4、β-连环蛋白表达下降,而糖原合成酶3β表达增高,采用透骨消痛颗粒醇提物干预后均可逆转上述现象.说明透骨消痛颗粒醇提物能诱导软骨细胞转录合成.-连环蛋白和Wnt4 蛋白,并抑制糖原合成酶3β表达.     

紫外激光辐射区肝组织β连环蛋白及过氧化物酶体增殖物激活受体γ蛋白的表达

背景:研究表明经典的wnt信号途径可通过抑制成脂分化关键因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ 而抑制细胞向脂肪细胞的分化.目的:观察紫外光辐射肝组织致创后自然恢复期不同阶段β连环蛋白及过氧化物酶体增殖物激活受体γ 的表达.方法:将雄性SD大鼠随机分4 组:激光致创组大鼠是以355 nm 紫外激光辐射肝叶形成损伤区,器械致创对照组则以手术剪肝叶致创,假手术组仅做腹部切开及缝合,正常组大鼠仅实施正常喂养.结果与结论:紫外激光可在肝组织形成边缘整齐的消融区并在周围形成可自然修复的有限致损区域.免疫组织化学图像平面测量表明紫外激光辐射后自然恢复1 周大鼠肝组织中β连环蛋白表达低于各对照组(P < 0.01),而自然恢复表达β连环蛋白辐射区周围组织表达高于正常(P < 0.01).蛋白印迹结果显示辐射致创组辐射后自然同时过氧化物酶体增殖物激活受体β蛋白2 周恢复高于1 周恢复(P < 0.01),且恢复期肝组织中可同时表达过氧化物酶体增殖物激活受体γ1 及2.结果证实,辐射区旁组织自然恢复各阶段存在不同的β连环蛋白及过氧化物酶体增殖物激活受体β 表达调控,2 周自然恢复后辐射区旁组织成脂进程得到加强.     

β-catenin与Fascin-1在结肠癌中的表达及与肿瘤病情的相关性

目的探讨结肠癌组织中的β连环蛋白(β-catenin)、Fascin-1蛋白表达变化及临床意义。方法回顾性选取2015年1月至2017年6月遂宁市中心医院收集的术后结肠癌组织标本(癌组织) 60例、30例结肠癌癌旁组织(距离病灶边缘5 cm以内的正常结肠组织,对照组)。采用免疫组化染色检测β-catenin与Fascin-1蛋白的表达,并分析二者的相关性及其临床意义。结果癌组织的Fascin-1蛋白、β-catenin蛋白阳性表达率分别为51. 67%、78. 33%均高于对照组的10. 00%、16. 67%,差异具有统计学意义(P 0. 05);癌组织的Fascin-1蛋白与β-catenin蛋白阳性表达呈正相关关系(r=0. 382,P 0. 05);癌组织的Fascin-1蛋白阳性表达与TNM分期、发生淋巴结转移有关(P 0. 05);癌组织的Fascin-1蛋白阳性表达与TNM分期、肿瘤分化程度、侵及浆膜、发生淋巴结转移有关(P 0. 05)。结论β-catenin与Fascin-1蛋白在结肠癌组织中高表达,二者呈正相关表达,并且与肿瘤TNM分期及发生淋巴结转移有关。     

肝纤维化模型大鼠细胞因子平衡对肝脏β-连环蛋白表达的影响

目的 探讨四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化模型大鼠血清辅助性T细胞1型和2型(Th1/Th2)细胞因子平衡对其肝脏β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响.方法 将75只大鼠分为对照组、己酮可可碱干预实验组和肝纤维化模型组,采用ELISA法检测各组大鼠血清中Th1型细胞因子(IFN-γ,TNF-α)、Th2型细胞因子(IL-4,IL-6)和Ⅳ型胶原的水平;免疫组织化学法检测各组大鼠肝脏β-catenin的表达和分布及Ⅳ型胶原占肝组织面积的百分比;单向方差分析描述细胞因子的变化规律,并借助双变量相关分析研究β-catenin的表达与细胞因子以及肝纤维化的相关关系.结果 模型组大鼠血清Th2型细胞因子水平明显高于实验组,更高于对照组,其积分光密度(ILD)分别为50 043.6,34 256.7,10 101.5(F=71.260,91.732,均P<0.05);而其血清Th1型细胞因子水平明显低于实验组,更低于对照组(F=50.420,10.625,均P<0.05),细胞因子发生了Th2极化;其肝纤维化程度明显高于实验组,更高于对照组;模型组大鼠肝脏β-catenin的表达明显高于实验组,更高于对照组(=92.030,均P<0.05).β-catenin在3组肝组织中的表达强度与其血清Th2细胞因子水平及其肝脏Ⅳ型胶原面积百分比均呈显著正相关关系(r=0.560,P<0.01;r=0.757,P<0.01).结论 大鼠血清细胞因子的Th2极化上调其肝脏β-catenin的表达,促进肝纤维化的发生和发展;β-catenin可作为肝脏纤维化严重程度的反应指标.     

胃泌素对结肠癌细胞中粘着斑激酶通路下游E-钙粘蛋白/β-连环蛋白复合物的影响

目的探讨胃泌素对结肠癌细胞CoLo320WT中粘着斑激酶（FAK）通路下游E-钙粘蛋白／β-连环蛋白（E-cadherin／β-catenin）复合物分布的影响；方法脂质体转染表达胃泌索受体CCK-2R的pCR3．1／OR质粒于结肠癌细胞CoLo320中。G418筛选出稳定表达CCK-2R的阳性克隆，RT-PCR鉴定，转染成功命为CoLo320WT。应用10^-8mmol／L 胃泌素（G17）以时间梯度（0h、1h、6h、12h、24h、48h）干预CoLo320WT细胞，同时应用10^-6mmol／L胃泌素受体拮抗剂L365，260干预CoLo320WT细胞30min，再予10^-8mmol／L胃泌素干预。采用免疫印迹法检测磷酸化的FAK Tyr397和总FAK的表达。采用免疫共沉淀和免疫印迹法检测CoLo320WT中TX-100溶解和未溶部分中的E-钙粘蛋白和β-连环蛋白的表达。用免疫细胞化学法观察E-钙粘蛋白和β-连环蛋白的在胞膜、胞质和胞核的分布。结果随着胃泌素干预时间的延长，细胞中磷酸化的FAK Tyr397的表达量呈增加趋势，12h达最大值。胃泌素受体拮抗剂L365，260阻断后磷酸化的FAK Tyr397表达减少。而胃泌素对总FAK没有明显影响。TX-100可溶性部分中E-钙粘蛋白和酽连环蛋白的量在胃泌素干预后表达减少，拮抗剂L365，260阻断后又增加。而TX-100不溶解部分中表达却相反。免疫细胞化学观察到在胃泌素干预下CoLo320WT细胞中E-钙粘蛋白和β-连环蛋白的分布发生胞质和胞核转移。结论胃泌素与其受体CCK-2受体结合，磷酸化的FAK Tyr397、激活FAK通路进而影响结肠癌细胞中E-钙粘蛋白和β-连环蛋白的分布，促进结肠癌细胞侵袭和转移。     

β连环蛋白在大鼠酒精性肝纤维化中的表达及意义

目的 研究Wnt信号通路的核心因子β连环蛋白(β-catenin)在大鼠酒精性肝纤维化(AHF)中的表达及意义.方法 采用白酒辅以玉米油、吡唑混合食料灌胃的方法制备大鼠AHF模型,于造模12 w后,采用Masson染色法观察肝组织纤维化程度,采用Elisa法检测大鼠血清层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型胶原前蛋白(PⅢP)水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠肝组织β-catenin mRNA的表达.结果 正常肝组织中有少量β-catenin表达,12 w末模型组大鼠肝组织中β-catenin表达明显升高.β-catenin的表达量与肝组织纤维化程度,以及血清LN、PⅢP水平呈正相关(r =0.926,0.893,0.902,P＜0.01).结论 Wnt信号通路在AHF发生发展过程中可能发挥了重要的作用.     

β-连环蛋白对转化生长因子β 1活化HSC-T6细胞的影响

目的 观察β-连环蛋白对转化生长因子β 1(TGF β1)活化肝星状细胞(HSC)的影响. 方法通过脂质体介导,将β-连环蛋白真核表达质粒[pcDNA3.1(+)-β-catenin]和绿色荧光质粒pEGFP-N1共转染体外培养的HSC-T6细胞株,用逆转录PCR和Western blot法检测经TGF β1刺激后两组细胞smad3、β-连环蛋白mRNA及蛋白质的表达.组间比较采用方差分析.结果 β-连环蛋白转染阳性的HSC-T6细胞株经TGF β 1刺激后表达smad3、β-连环蛋白及其mRNA明显强于未转染β-连环蛋白基因的HSC-T6细胞,更强于正常培养的HSC-T6细胞,smad3mRNA相对表达量分别为;0.642±0.011、0.501±0.021、0.511±0.019、0.356±0.017,F=135.304,P<0.05;β-连环蛋白mRNA相对表达量分别为:0.783±0.021、0.543±0.033、0.538±0.024、0.212±0.019,F=267.340,P值均<0.05.smad3蛋白质相对表达量分别为:0.892±0.012、0.124±0.011、0.130±0.021、0.003±0.001,F=2823.813,P<0.05;β-连环蛋白相对表达量分别为:0.921±0.020、0.210±0.010、0.208±0.008、0.002±0.001,F=3440.982,P<0.05.β-连环蛋白和smad3蛋白质的表达均与α-平滑肌肌动蛋白的表达显著相关(r=0.901,P<0.01;r=0.939,P<0.01).结论 β-连环蛋白基因转染体外培养的HSC-T6细胞株,促使HSC表达smad3、α-平滑肌肌动蛋白增强,提示β-连环蛋白能增强TGF β1的致纤维化作用.     

人脐静脉内皮细胞损伤后迁移能力的变化与血管内皮钙黏蛋白和连环蛋白p120的关系

目的初步探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤之后迁移能力的变化与血管内皮钙黏蛋白(VE-cad)和连环蛋白p120(p120ctn)的关系。方法 DMEM培养基培养HUVEC,将HUVEC分为对照组和损伤组。Transwell实验检测HUVEC迁移能力的变化。Western blot测定p120ctn与VE-cad蛋白表达水平。免疫荧光实验检测VEcad的定位表达变化。免疫共沉淀法检测p120ctn与VE-cad的相互结合。结果 Transwell实验发现HUVEC经损伤刺激6、8 h后迁移能力最强(P0.05)。Western blot结果显示HUVEC损伤6、8 h后p120ctn及VE-cad表达水平明显上调。免疫荧光实验显示HUVEC经损伤刺激后,VE-cad的定位由细胞膜转到细胞浆。免疫共沉淀证实p120ctn可以与VE-cad相互结合。结论 HUVEC损伤刺激后迁移能力增强,其机制可能与升高的p120ctn将VEcad由细胞膜携带入细胞浆导致VE-cad膜表达缺失有关。