祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的调控作用

目的观察祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法将GSK-3β选择性小分子抑制剂作用于正常人滑膜细胞,以激活Wnt/β-catenin信号通路。提取并检测胞核蛋白β-catenin的表达,从而确定最佳激活时间点。将对数生长期的滑膜细胞分为正常组、SB-216763激活组、祛痰化瘀利湿方组,分别采取相应的干预措施。Western blot方法检测滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测滑膜细胞培养上清液中Cyclin D1和MMP-7的表达。结果成功激活正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,SB-216763干预后激活组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达较正常组显著升高(P0.05);经中药含药血清干预后,祛痰化瘀利湿方组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达与激活组相比显著下调(P0.01)。结论印证了GSK-3β作为选择性小分子抑制剂能够激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;通路激活后,其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达显著升高;祛痰化瘀利湿方能够明显下调β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的表达;提示从单一信号通路方面可阐释祛痰化瘀利湿方治疗骨性关节炎的分子作用机制。     

Wnt通路中Wif-1和β-catenin在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达

目的研究Wnt通路中Wnt通路抑制因子1(Wif-1)和β连环蛋白(β-catenin)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的表达及可能的作用。方法收集初发并且诱导缓解治疗第33天完全缓解的35例ALL患儿的临床资料,以治疗前作为初发组,第33天达完全缓解时作为缓解组,对照组为15例非恶性血液病患儿。RT-PCR方法检测Wif-1和β-cateninm RNA的表达,ELISA法测Wif-1蛋白的表达。结果初发组Wif-1m RNA及蛋白的表达明显低于对照组和缓解组,β-cateninm RNA的表达高于对照组和缓解组(P0.05)。在初发组和缓解组,高危患儿的β-cateninm RNA表达均高于中危和低危患儿,Wif-1m RNA、蛋白表达低于中危和低危患儿(P0.05)。在初发组和缓解组,T-ALL患儿β-cateninm RNA的表达高于B-ALL患儿,Wif-1m RNA、蛋白表达低于B-ALL患儿(P0.05)。各组Wif-1和β-cateninm RNA表达呈负相关(P0.05)。结论 Wif-1表达下降、β-catenin表达增高是儿童急淋发病机制之一,Wif-1下降和/或β-catenin增高的程度可能与预后相关。     

miR-142-3p靶向Wnt/β-链蛋白通路对结直肠癌细胞增殖的影响

目的探究miR-142-3p靶向Wnt/β-链蛋白(β-catenin)通路对结直肠癌(CRC)细胞增殖的影响。方法选取2018年1月—2020年10月收治的66例CRC的肿瘤组织及其相邻正常组织。同时培养正常人结肠上皮细胞NCM460和CRC细胞系(HT29、LoVo、HCT116、Caco2、SW480细胞)。通过qRT-PCR检测CRC肿瘤组织、正常组织、正常人结肠上皮细胞与CRC细胞系中miR-142-3p表达水平;经免疫蛋白印迹法检测CRC细胞系中β-catenin表达水平;采用CCK-8法和流式细胞术检测miR-142-3p过表达后对CRC细胞增殖的影响;经免疫蛋白印迹检测过表达miR-142-3p对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响;采用双荧光素酶报告基因检验miR-142-3p与β-catenin编码基因CTNNB1的靶向关系。结果miR-142-3p在CRC肿瘤组织和CRC细胞系中的表达显著下降(P<0.05);β-catenin在CRC细胞系中的表达显著升高(P<0.05);过表达miR-142-3p可靶向结合CTNNB1,显著抑制Caco2、LoVo和HT29细胞的增殖和Ki67+细胞比例,抑制β-catenin、c-myc和Cyclin D1的表达(P<0.05)。结论miR-142-3p可通过靶向调节β-catenin的表达,干扰Wnt/β-catenin通路,抑制CRC细胞的增殖。     

信号通路对胃癌干细胞及胃癌发生的影响

背景：Hedgehog与Wnt／β-catenin信号通路对胃癌干细胞的影响及在胃癌发生发展中的作用机制少见报道。目的：探讨Hedgehog与Wnt/β-catenin信号通路在胃癌发生发展中的作用机制。方法：采用肿瘤球悬浮分选法从胃癌组织标本中分选胃癌干细胞。采用免疫组化SP法检测Hedgehog及Wnt／β-catnin信号通路主要分子SHH、GLI1、Wnt2及β-catenin在胃癌干细胞中的表达。Spearman相关分析各细胞因子间的相关性分析。结果与结论：SHH、GLI1、Wnt2及β-catenin在胃癌干细胞中的阳性表达率分别为74．7％,78．3％,85．5％和83．3％,均显著高于癌旁组织的阳性表达率（P〈0．05）。各细胞因子间在胃癌干细胞中的表达均呈正相关（P〈0．05）。说明在胃癌干细胞中Hedgehog及Wnt/β-catenin信号通路均被激活,二者互相作用可能参与了胃癌的发生发展,为胃癌的干细胞治疗提供了新的研究方向。     

慢病毒介导RNAi干扰β-catenin对小鼠骨髓间充质干细胞生物学行为的影响

本研究通过构建β-连环蛋白（β-catenin）特异的RNAi慢病毒表达载体,探讨阻断Wnt／β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞（MSC）生物学行为的影响。设计3对针对β-cateninmRNA不同位点的shRNA编码序列,分别连接到慢病毒载体质粒PLB中,构建PLB-β-catenin／shRNAl,PLB-β-catenin／shRNA2和PLB-β-catenin／shR-NA3;将重组质粒与慢病毒包装质粒及包膜蛋白质粒共转染293FT细胞,收获病毒颗粒,浓缩后测定病毒滴度,感染Msc细胞,并应用流式细胞术分选GFP阳性细胞,Westernblot和RT-PCR验证其对细胞内β-catenin基因表达的抑制效果,筛选干扰效率最高质粒;CCK-8法检测细胞增殖,Annexin-V／7-AAD法检测干扰后细胞凋亡情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测MSC迁移能力。结果表明：构建的特异性慢病毒siRNA干扰组（PLB-β-catenin／shRNA2）能有效抑制β-catenin的mRNA和蛋白表达,并抑制细胞的增殖;而空载体对照组（PLBgroup）和正常对照组（controlgroup）细胞增殖无明显变化,两组之间无显著的统计学差异（P〉0．05）;流式细胞术检测结果显示,采用血清饥饿法处理后,干扰组细胞的凋亡率明显增加,但两对照组之间无统计学差异（P〉0．05）;细胞划痕和Tran-swell实验显示,干扰组MSC的迁移能力明显降低,对照组细胞迁移能力无明显变化。结论：构建的特异RNAi慢病毒能够有效抑制β-catenin基因的表达,减少细胞内目的基因mRNA和蛋白的水平,从而对MSC细胞的增殖、凋亡和迁移能力产生重要影响。     

Molecular biology of calcific aortic valve disease: towards new pharmacological therapies

Calcific aortic valve disease (CAVD) is a chronic process leading to fibrosis and mineralization of the aortic valve. Investigations in the last several years have emphasized that key underlying molecular processes are involved in the pathogenesis of CAVD. In this regard, the processing of lipids and their retention has been underlined as an important mechanism that triggers inflammation. In turn, inflammation promotes/enhances the mineralization of valve interstitial cells, the main cellular component of the aortic valve. On the other hand, transformation of valve interstitial cells into myofibroblasts and osteoblast-like cells is determined by several signaling pathways having reciprocal cross-talks. In addition, the mineralization of the aortic valve has been shown to rely on ectonucleotidase and purinergic signaling. In this review, the authors have highlighted key molecular underpinnings of CAVD that may have significant relevance for the development of novel pharmaceutical therapies.     

Notch和Wnt通路对脑缺血后神经干细胞作用的研究进展

神经干细胞(NSCs)在脑缺血后神经功能障碍的修复过程中起着关键作用。Notch通路广泛存在于动物细胞中,是调控NSCs增殖、分化的经典信号通路。Wnt通路参与细胞的增殖、分化和凋亡等过程,在损伤后脑组织NSCs增殖过程中发挥重要作用。近年来研究发现,两条通路形成一个信号网络,共同调控NSCs增殖和分化。     

Roles of Wnt/β-catenin signaling pathway related microRNAs in esophageal cancer

MicroRNAs (miRNAs) are endogenous, noncoding, single-stranded small RNAs that regulate expression of tumor suppressor genes and oncogenes and are involved in almost all tumor-related processes. MiRNA dysregulation plays an important role in the occurrence and development of esophageal cancer through specific signal pathways, including the Wnt/β-catenin signaling pathway, and is closely related to the malignant characteristics of esophageal cancer. The interaction between miRNAs and the Wnt/β-catenin signaling pathway, which is specifically expressed in esophageal cancer tissues, shows potential as a new biomarker and therapeutic target. This article reviews the role of miRNAs related to the Wnt pathway in the carcinogenesis of esophageal carcinoma and its role in Wnt signal transduction. The content of this review can be used as the basis for formulating or improving the treatment strategy of esophageal cancer.     

沉默IL-37表达对骨肉瘤细胞的影响及其作用机制研究

目的 探讨IL-37对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 定量逆转录PCR（RT-qPCR）检测人正常成骨细胞（hFOB1.19）和骨肉瘤细胞（U2OS、MG63、Saos-2）中IL-37 mRNA的表达情况;设计沉默IL-37的小干扰RNA（siRNA）序列转染骨肉瘤细胞系,将转染干扰序列si...     

Wnt2在植入胎盘组织中的表达及其对滋养细胞迁移和侵袭功能的影响

目的检测Wnt2在植入胎盘组织中的表达,分析Wnt2对滋养细胞凋亡、迁移和侵袭功能的影响。方法收集2020年7月至2021年1月于武汉大学中南医院妇产科行剖宫产的胎盘植入孕产妇胎盘组织15例(植入组)和正常孕产妇胎盘组织15例(对照组)。RT-PCR法和Western blot法检测胎盘组织中Wnt2表达水平,采用siRNA敲低HTR-8/Svneo细胞中Wnt2表达水平,流式细胞学法检测细胞凋亡,Transwell侵袭和迁移实验评估细胞的迁移和侵袭能力,RT-PCR法和Western blot法检测β-catenin、Bcl-2、Caspase-3、MMP-2和MMP-9表达水平。结果与对照组相比,植入组胎盘组织中Wnt2、MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达量均显著升高(均P<0.05)。转染敲低HTR-8/Svneo细胞Wnt2水平后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),细胞迁移和侵袭能力显著抑制(P<0.01),β-catenin、Bcl-2、MMP-2和MMP-9表达显著下降(均P<0.05),而Caspase-3表达显著升高(P<0.05)。结论植入胎盘组织中Wnt2蛋白表达显著升高,且Wnt2可能通过wnt/β-catenin信号通路参与了胎盘滋养细胞的凋亡、迁移和侵袭。