FHIT、WWOX和MDR1基因在鼻咽癌中的表达

目的探讨FHIT、WWOX基因组在鼻咽癌患者中的表达、失活机制及MDR1基因在鼻咽癌中的表达。方法采用荧光相对定量RT-PCR法检测89例鼻咽癌患者(试验组)和61例慢性鼻黏膜炎患者(对照组)鼻咽部组织WWOX、FHIT和MDR1基因mRNA表达水平,甲基化特异性(MSP)方法及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析FHIT和WWOX基因mRNA表达下调原因。结果 (1)实验组鼻咽组织中FHIT、WWOX和MDR1基因的mRNA表达量与对照组间的差异有统计学意义(P0.05);按临床分期和分化程度分层后,试验组中病情较严重者较病情轻者,分化程度低的较分化程度高者间的FHIT和WWOX基因表达量差异有统计学意义(P0.05),且FHIT和WWOX基因表达量与临床分期、分化程度呈负相关(r=-0.731,P=0.000;r=-0.816,P=0.000;r=-0.626,P=0.000;r=-0.536,P=0.001);试验组低分化者MDR1基因mRNA与高分化者间差异有统计学意义(P=0.021),且组织学类型与MDR1基因mRNA相对表达量呈负相关(r=-0.697,P=0.000);试验组的FHIT与WWOX基因的mRNA相对表达量呈正相关(r=0.540,P=0.000)。(2)试验组的FHIT和WWOX基因启动子甲基化程度明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);且FHIT和WWOX的mRNA与该基因启动子甲基化程度呈正相关(r=-0.689,P=0.000;r=-0.594,P=0.000)。(3)试验组中有39例(43.8%)在FHIT基因中至少有1个位点存在杂合性缺失(LOH),在WWOX基因中42例(47.2%)至少一个位点存在LOH,明显高于对照组的3例和2例(4.9%,3.3%),差异有统计学意义(P0.05)。且FHIT和WWOX基因mRNA与该基因基因杂合性缺失呈负相关(r=-0.239,P=0.049;r=-0.364,P=0.013)。结论启动子甲基化是鼻咽癌患者WWOX和FHIT基因表达下调的主要原因,可能也是鼻咽癌的发生、发展的主要原因。MDR1基因过度表达与鼻咽癌的分化程度密切相关。     

5-杂氮-2'-脱氧胞苷对卵巢癌HO8910细胞WWOX基因甲基化状态及其生物学行为的影响

目的:检测卵巢癌HO8910细胞株中WWOX基因甲基化状态,探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对WWOX基因甲基化状态及其对HO8910细胞株生物学行为的影响。方法:将HO8910细胞分为对照组与5-Aza-CdR处理组,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测两组细胞WWOX基因甲基化状态;蛋白印迹法检测两组细胞WWOX蛋白的表达。体外实验:分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、体外侵袭实验及流式细胞仪等分析5-Aza-CdR对HO8910细胞生物学活性的影响。体内实验:用处理前后的HO8910细胞株分别接种于BALB/c裸鼠腹腔,观察两组裸鼠的生存时间及肿瘤生长情况,并采用Western blot分别检测两组裸鼠肿瘤组织中WWOX蛋白的表达。结果:(1)WWOX基因在HO8910细胞株中呈甲基化状态,经5-Aza-CdR处理后呈去甲基化状态。(2)Western blot检测结果显示,5-Aza-CdR处理组WWOX蛋白表达水平高于对照组(0.71±0.023 vs 0.13±0.012,P<0.05)。(3)5-Aza-CdR处理组各时间点的细胞增殖能力较对照组下降(P<0.05)。(4)体外侵袭实验显示,5-Aza-CdR处理组穿膜细胞数较对照组少(92.2±4.7 vs 172.1±5.2,P<0.05)。(5)流式细胞检测显示5-Aza-CdR处理组中67.13%的细胞阻滞于G0/G1期,较对照组高(21.52%,P<0.05)。(6)裸鼠体内实验表明,5-Aza-CdR处理组裸鼠体内的致瘤能力明显低于对照组,且5-Aza-CdR处理组WWOX蛋白表达水平明显高于对照组(0.65±0.031 vs 0.25±0.047,P<0.05)。结论:5-Aza-CdR能逆转HO8910细胞WWOX基因甲基化状态,并抑制细胞增殖。     

包含氧化还原酶的WW结构域基因甲基化与食管鳞状细胞癌的关系

目的：研究食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）包含氧化还原酶的WW结构域（WW domain containing oxidoreductase,WWOX）基因启动子甲基化及mRNA的表达与ESCC发生发展的关系。方法：采用改进的甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）和RT-PCR技术检测69例ESCC组织及48例相应癌旁正常组织中WWOX基因的DNA甲基化和mRNA表达情况。结果：ESCC组织中WWOX基因启动子的甲基化发生率为26.1%（18/69）,显著高于癌旁正常组织4.2%（2/48）（P=0.002）;Ⅲ、Ⅳ期食管癌患者中WWOX基因甲基化发生率（43.3%,13/30）显著高于Ⅰ、Ⅱ期（12.8%,5/39）（P=0.004）;低分化癌组的甲基化发生率（33.3%,4/12）高于高分化（20.0%,3/15）和中分化组（26.2%,11/42）,但其差异均无统计学意义（P〉0.05）。ESCC组织中WWOX基因mRNA的相对表达量比相应癌旁正常组织低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。ESCC组织中WWOXmRNA的相对表达量与临床病理因素无明显相关关系（P〉0.05）。结论：WWOX基因启动子甲基化可能与ESCC的形成和进展有关。     

乳腺癌组织WWOX基因表达及其与ER、绝经状态的相关性

目的：探讨WWOX基因在乳腺癌组织中的表达及其与雌激素受体(estrogen receptor, ER)、绝经状态等临床病理学特征的关系。方法：应用免疫组织化学SP法检测56例正常乳腺组织、12例乳腺导管原位癌和87例侵袭性乳腺癌组织WWOX蛋白的表达,结合临床病理学资料进行分析。结果：62.1%(54/87)的乳腺癌组织和28.6%（16/56）正常乳腺组织中出现WWOX蛋白表达降低或丢失,两组间差异有统计学意义（P＜0.01 ）。50%的乳腺导管原位癌组织中WWOX 蛋白表达降低。82.1% 的ER（-）组和 52.5% ER（+）组病例表现为WWOX蛋白表达降低或缺失,差异有统计学意义(P＜0.05)。51.8%的绝经后患者和22.4%的绝经前患者出现WWOX表达完全缺失,两组间差异有统计学意义(P＜0.05)。此外,晚期乳腺癌患者WWOX表达降低或缺失的比例增高,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者中WWOX表达完全缺失的比例分别为23.1%、28.6%和46.2%,各期间的差异有统计学意义（P＜0.01）。结论:乳腺癌中存在着WWOX基因的表达缺失,其异常表达与ER状态、绝经状态和肿瘤临床分期关系密切,提示WWOX基因可能是通过激素受体信号途径在乳腺癌的发生和发展中发挥作用。     

UV irradiation/cold shock-mediated apoptosis is switched to bubbling cell death at low temperatures

When COS7 fibroblasts and other cells were exposed to UVC irradiation and cold shock at 4°C for 5 min, rapid upregulation and nuclear accumulation of NOS2, p53, WWOX, and TRAF2 occurred in 10–30 min. By time-lapse microscopy, an enlarging gas bubble containing nitric oxide (NO) was formed in the nucleus in each cell that finally popped out to cause “bubbling death”. Bubbling occurred effectively at 4 and 22°C, whereas DNA fragmentation was markedly blocked at 4°C. When temperature was increased to 37°C, bubbling was retarded and DNA fragmentation occurred in 1 hr, suggesting that bubbling death is switched to apoptosis with increasing temperatures. Bubbling occurred prior to nuclear uptake of propidium iodide and DAPI stains. Arginine analog Nω-LAME inhibited NO synthase NOS2 and significantly suppressed the bubbling death. Unlike apoptosis, there were no caspase activation and flip-over of membrane phosphatidylserine (PS) during bubbling death. Bubbling death was significantly retarded in Wwox knockout MEF cells, as well as in cells overexpressing TRAF2 and dominant-negative p53. Together, UV/cold shock induces bubbling death at 4°C and the event is switched to apoptosis at 37°C. Presumably, proapoptotic WWOX and p53 block the protective TRAF2 to execute the bubbling death.     

牙龈鳞癌中WWOX基因的表达及其临床意义

目的:研究WW OX基因在牙龈鳞癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化SP法检测70例牙龈鳞癌组织中WW OX基因的表达,并与临床病理指标结合进行分析。结果:牙龈鳞癌组织中WW OX基因的阳性率为2 7.14%。WW OX基因的表达与牙龈鳞癌的病理分级、淋巴结转移有相关性(P<0.05),与临床分期明显相关(P<0.05)。WW OX基因在牙龈鳞癌中的表达呈负相关性。结论:WW OX基因参与牙龈鳞癌的发生发展过程,可作为评估牙龈鳞癌生物学行为的一项指标,用于识别高危转移和不良预后者及为判断其生物学特性提供可靠的指标。     

FHITmRNA和WWOXmRNA在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的观察乳腺癌组织中FHIT mRNA和WWOX mRNA表达情况，并探讨其与临床病理学指标的关系。方法以逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测51例乳腺癌及癌旁组织标本中染色体脆性位点抑癌基因FHIT mRNA和WWOX mRNA表达，半定量分析电泳结果。以免疫组化法检测乳腺癌石蜡标本中的雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和HER-2基因状态。结果51例配对标本中，WWOX mRNA表达在乳腺癌组织及癌旁非癌乳腺组织中差异有显著性（P〈0．01）；FHIT基因的mRNA表达在乳腺癌组织及癌旁非癌乳腺组织中差异有显著性（P〈0．01）。FHIT mRNA和WWOX mRNA在乳腺癌组织中的低表达呈正相关（rs=0．354，P〈0．05）。FHIT mRNA和WWOX mRNA的表达与临床病理分期有关（P〈0．05），WWOX mRNA的表达与腋淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论FHIT和WWOX基因系重要的候选抑瘤基因，与其他预后指标的联合检测可望对患者的治疗预后作出更准确的预测。     

Alterations of common chromosome fragile sites in hematopoietic malignancies

Conditions of replication stress affect expression of all common fragile regions, including FRA3B (chromosome 3p14.2), FRA16D (16q23), FRA6E (6q26), FRA7G (7q31.2), and FRAXB (Xp22.3), and a number of cancer cell lines exhibit homozygous deletions in 2 or more common fragile regions. In 1996 the fragile histidine triad (FHIT) gene was isolated from the region encompassing the most active fragile FRA3B locus, and recently the WW domain-containing oxidoreductase gene (WWOX) was identified at FRA16D. These 2 fragile genes are altered or deleted in various epithelial tumors and exhibit tumor suppressor function. Aberration or absence of WWOX expression recently was detected in primary hematopoietic malignancies. The aberration resulted not only from genomic deletions but also possibly from epigenetic modifications associated with expression of fragility. Thus chromosomal aberrations at common fragile sites, in addition to the well-defined hallmark leukemia chromosome translocations, are involved in clinicopathological outcomes of hematopoietic malignancies.     

WWOX基因体外对肺癌细胞耐药的影响

目的通过体外实验观察WWOX对肺腺癌细胞耐药性影响,初步探讨WWOX逆转肺腺癌细胞耐药性及其作用机制。方法应用紫杉醇(TAXOL)诱导肺腺癌细胞株构建A549耐药细胞亚株(A549/T-)。采用腺病毒包装系统AdMax重组腺病毒Ad-WWOX-IRES-EGFP。感染Ad-WWOX-IRES-WWOX的A549/T细胞为A549/T+组,感染Ad-IRES-EGFP的A549/T细胞为A549/T-组,和非耐药A549细胞共3组。3组细胞分别经TAXOL、顺铂(DDP)作用12,24,48,72 h,检测3组细胞生长抑制率、药物的IC50值和细胞凋亡相关指标。结果在含3 g/L及30 g/L的TAXOL培养基中,0.25 g/L及2.5 g/L的顺铂(DDP)培养基中,A549/T+组24 h及48 h细胞生长抑制率与A549/T-组比较有显著性差异(P均<0.05);A549/T+组48 h细胞生长抑制率比较有显著性差异(P均<0.05)。A549/T+组24h及48 h细胞生长抑制率与A549组比较无显著性差异(P均>0.05)。A549/T+组细胞IC50较A549/T-组低,和A549组相比无显著性差异(P>0.05)。在3 g/L及30g/L TAXOL和0.25 g/L及2.5 g/L DDP培养基培养48 h后A549/T+细胞Bax相对值、Bax/Bcl-2比值均明显高于A549/T-组(P均<0.05);A549/T+细胞Bcl-2相对值比值均明显低于A549/T-(P<0.05);A549/T+细胞与A549细胞Bax相对值、Bcl-2相对值、Bax/Bcl-2比值比较无显著差异(P均>0.05)。结论WWOX显著诱导了肺腺癌A549/T+TAXOL耐药株的凋亡,提示WWOX有抑制肺癌细胞增殖和逆转肺癌细胞耐药的作用。     

WWOX与p73蛋白在乳腺癌组织中的表达及相关性研究

目的 探讨WWOX与p73蛋白在乳腺癌组织中的表达及其相关性.方法 采用免疫组织化学方法检测60例浸润性乳腺癌、20例乳腺纤维腺瘤及20例乳腺癌旁组织中WWOX和p73的表达情况.结果 WWOX在浸润性乳腺癌组织中的表达（13.3％）明显低于乳腺纤维腺瘤组织（35.0％）（P＜0.05）,乳腺纤维腺瘤组织中的表达明显低于乳腺癌旁组织（75.0％）（P＜0.05）.WWOX的表达与有无淋巴结转移、分化程度、TNM分期、术后复发及ER受体密切相关（P＜0.05）.p73在乳腺癌组织中的表达（80.0％）明显高于乳腺纤维腺瘤组织（55.0％）（P＜0.05）,乳腺纤维腺瘤组织中的表达明显高于乳腺癌旁组织（15.0％）（P＜0.05）.p73的表达与有无淋巴结转移、术后复发、ER受体密切相关（P＜0.05）.WWOX与p73在浸润性乳腺癌组织中的表达呈负相关（r=-0.489,P＜0.05）.结论 WWOX和p73参与调控乳腺癌的发生、发展,联合检测WWOX和p73对预测乳腺癌的发生、发展及评估乳腺癌患者的预后有重要意义.