Reduced WWOX protein expression in human astrocytoma

The WW domain‐containing oxidoreductase (WWOX) functions as a tumor suppressor by interacting with various proteins in numerous important signaling pathways. WWOX silencing via homozygous deletion of its locus and/or promoter hypermethylation has been observed in various human cancers. However, the relationship between WWOX and tumors in the central nervous system has not been fully explored. In this study, the expression levels of WWOX protein in astrocytomas from 38 patients with different tumor grades were retrospectively analyzed by immunohistochemical staining. The results showed that 19 (50.0%) samples had highly reduced WWOX protein expression when compared with normal controls, while 14 (36.8%) and five (13.2%) cases exhibited moderate and mild decreases in WWOX expression, respectively. Reduction of the expression of WWOX protein correlated with patient age, supra‐tentorial localization of the tumor and severity of the symptoms. Furthermore, loss of WWOX expression inversely correlated with survival time. No significant correlation was observed between the loss of WWOX expression and the gender of patients or the difference in pre‐operative and post‐operative karnofsky performance status scores. Surprisingly, there was no significant correlation between the loss of WWOX protein expression and overall tumor grades. Nevertheless, it was found that 63.6% (7/11) of the grade II astrocytomas had highly reduced WWOX expression and 36.4% (4/11) showed moderately reduced WWOX expression, while none of the samples exhibited mild reductions. Similar results were also found in grade III astrocytomas. The results from this small‐size sample pilot study suggest that the loss of WWOX expression may be an early event in the pathogenesis of human astrocytoma.     

抑癌基因WWOX在肺腺癌细胞株A549中表达的研究

目的:检测WWOX(WWdomaincontainingoxidoreductase)基因在肺腺癌细胞株A549中的变化及其意义。方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术、聚合酶链反应结合二核苷酸重复序列多态性方法、免疫印迹分析(Westernblot)方法分别对WWOX基因6~8外显子在A549细胞转录本丢失、杂和性丢失(LOH)和WWOX蛋白表达异常进行检测。结果:A549细胞样本为WWOX基因6~8外显子转录本的丢失,而在对照的原代培养人气道上皮细胞样本(简称原代培养)未发现WWOX基因的6~8外显子的丢失(P<0.05);A549细胞样本中存在D16S3029及D16S3096两个微卫星位点的LOH而对照的原代培养中无WWOX基因的杂合性丢失(P<0.05);Westernblot结果显示WWOX基因在A549细胞的蛋白表达(A值为817464.90±64916.64)明显低于在原代培养中的蛋白表达(A值为2150142.00±64916.64)(P<0.01)。结论:WWOX基因可能在肺腺癌的发生发展中起重要作用;转录本丢失、LOH及蛋白低表达均可能是WWOX基因在肺腺癌中的失活方式。     

WWOX基因转染抑瘤效应的实验研究

目的建立肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体，观察其瞬时转染对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法，从正常人胚肾细胞HEK-293中钓取WWOX基因，将其克隆至pMD18-T载体上，测序正确后克隆到真核表达载体pcDNA4／myc-His中；采用脂质体介导法体外瞬时转染人肺腺癌A549细胞；RT—PCR法和Western印迹法分别检测WWOX基因mRNA和蛋白表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡率；克隆形成试验观察肿瘤细胞克隆形成能力的变化。结果成功构建了WWOX的真核表达载体，体外转染的A549细胞凋亡率明显高于未转染和空载体转染细胞，且细胞克隆形成能力下降，形成率为35．43％，明显低于未转染细胞和空载体转染细胞。结论所构建的pcDNA4／myc-WWOX真核表达载体转染肿瘤细胞能够抑制肿瘤生长并诱导细胞凋亡。     

非小细胞肺癌中WWOX蛋白的表达及意义

目的 研究抑癌基因WWOX在非小细胞肺癌中的蛋白表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学二步法检测40例非小细胞肺癌石蜡标本及21例癌旁正常肺组织中WWOX蛋白的表达.结果 ①癌旁正常肺组织中WWOX蛋白阳性表达率高于非小细胞肺癌组织(85.71％ vs 37.50％,P＜0.05),鳞癌中WWOX蛋白阳性表达率与腺癌差异无统计学意义(34.62％ vs 42.86％,P＞0.05);②男性非小细胞肺癌患者癌组织中WWOX蛋白阳性表达率低于女性非小细胞肺癌患者(25.00％ vs56.25％,P＜0.05),吸烟指数≥400的患者癌组织中WWOX蛋白阳性表达率低于吸烟指数＜400的患 者(19.05％ vs 57.89％,P＜0.05),而WWOX蛋白呈阳性表达的患者年龄与阴性表达者之间差异无统计学意义(P＞0.05);③分化不良的非小细胞肺癌组织中WWOX蛋白阳性表达率与中等分化和分化良好者相近(P＞0.05);④Ⅰ+Ⅱ期非小细胞肺癌患者癌组织中WWOX蛋白阳性表达率与Ⅲ+Ⅳ期患者相比差异无统计学意义(P＞0.05),转移病例的非小细胞肺癌组织中WWOX蛋白阳性表达率与无转移病例相近(P＞0.05).结论 WWOX蛋白在非小细胞肺癌组织中表达较癌旁正常肺组织降低,且与患者性别及吸烟指数密切相关,而与年龄、病理类型、组织分化程度、临床分期以及有无转移无明显关系.     

抑癌基因WWOX在甲状腺癌中的表达及意义

目的探讨WWOX基因在甲状腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测50例甲状腺癌，31例甲状腺腺瘤及20例正常组织中WWOX蛋白的表达，并分析其与病理指标及临床特征之间的相关性。结果WWOX在甲状腺癌、甲状腺腺瘤及正常甲状腺组织中的平均积分光密度分别为：50．86±6．05、70．95±4．23、87．77±8．46。WWOX在甲状腺癌中的表达与后两者之间差异有统计学意义（P〈0．05）。未发现WWOX蛋白表达在不同临床病理指标间存在显著性差异。结论WWOX蛋白在甲状腺癌组织中呈低表达，该蛋白表达的缺失可能在甲状腺癌的发生、发展过程中发挥重要作用。     

WWOX及P53基因在大肠癌中的表达及与肿瘤浸润的关系

目的探讨WWOX（WW domain-containing oxidoreductase）基因及P53在大肠癌组织中的表达情况、相关性及与肿瘤浸润转移的关系。方法用免疫组化染色的方法分别检测WWOX及P53基因在35例大肠癌组织及14例正常大肠粘膜组织中的表达情况。结果 WWOX基因在大肠癌组织中的表达明显降低,与正常组织比较差异有统计学意义（P〈0.05）。P53（突变型）基因在大肠癌组织中的表达明显高于正常组织,二者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。WWOX与肿瘤浸润、淋巴结转移情况密切相关（P〈0.05）。P53表达与癌组织的浸润密切相关（P〈0.05）,与淋巴结转移情况无关（P〉0.05）。WWOX与P53基因的表达情况均与患者的年龄、性别无关（P〉0.05）。WWOX与P53基因的表达呈负相关（r=-0.442,P=0.008）。结论 WWOX、P53（野生型）基因同为抑癌基因,且两者之间在大肠癌的发生、浸润及转移过程中有着较为明显的协同作用,联合评价其功能具有重要的临床意义。     

WWOX基因与消化道肿瘤的研究进展

含有WW结构域的氧化还原酶基因(WWOX)是近年来发现的一种新的侯选抑癌基因,介导多种蛋白-蛋白间的相互作用,参与多条信号转导途径,诱导细胞凋亡,抑制肿瘤发生。其异常基因存在于多种恶性肿瘤中,尤其在与环境致癌物密切相关的消化道肿瘤中基因异常率更高。     

5-杂氮-2'-脱氧胞苷对卵巢癌HO8910细胞WWOX基因甲基化状态及其生物学行为的影响

目的:检测卵巢癌HO8910细胞株中WWOX基因甲基化状态,探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对WWOX基因甲基化状态及其对HO8910细胞株生物学行为的影响。方法:将HO8910细胞分为对照组与5-Aza-CdR处理组,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测两组细胞WWOX基因甲基化状态;蛋白印迹法检测两组细胞WWOX蛋白的表达。体外实验:分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、体外侵袭实验及流式细胞仪等分析5-Aza-CdR对HO8910细胞生物学活性的影响。体内实验:用处理前后的HO8910细胞株分别接种于BALB/c裸鼠腹腔,观察两组裸鼠的生存时间及肿瘤生长情况,并采用Western blot分别检测两组裸鼠肿瘤组织中WWOX蛋白的表达。结果:(1)WWOX基因在HO8910细胞株中呈甲基化状态,经5-Aza-CdR处理后呈去甲基化状态。(2)Western blot检测结果显示,5-Aza-CdR处理组WWOX蛋白表达水平高于对照组(0.71±0.023 vs 0.13±0.012,P<0.05)。(3)5-Aza-CdR处理组各时间点的细胞增殖能力较对照组下降(P<0.05)。(4)体外侵袭实验显示,5-Aza-CdR处理组穿膜细胞数较对照组少(92.2±4.7 vs 172.1±5.2,P<0.05)。(5)流式细胞检测显示5-Aza-CdR处理组中67.13%的细胞阻滞于G0/G1期,较对照组高(21.52%,P<0.05)。(6)裸鼠体内实验表明,5-Aza-CdR处理组裸鼠体内的致瘤能力明显低于对照组,且5-Aza-CdR处理组WWOX蛋白表达水平明显高于对照组(0.65±0.031 vs 0.25±0.047,P<0.05)。结论:5-Aza-CdR能逆转HO8910细胞WWOX基因甲基化状态,并抑制细胞增殖。     

抑癌基因WWOX在胃癌中的表达及其临床意义

目的观察WWOX基因mRNA在胃癌组织中的表达情况,分析WWOX基因的表达与胃癌临床病理学指标的关系,探讨WWOX在胃癌发病中的作用。方法采用半定量逆转录-多聚酶链反应（RT—PCR）方法检测52例胃癌组织和配对癌旁正常胃黏膜组织标本中WWOX mRNA的表达情况。结果WWOX基因的mRNA在胃癌组织中比癌旁正常胃黏膜组织呈现明显的低表达（Z=5．1409,P〈0．01）;WWOX mRNA的表达下调与胃癌分化程度、TNM分期和浸润深度有关（P〈0．05）。结论WWOX mRNA的表达降低可能参与了胃癌的发生、发展,可望作为临床评价胃癌预后的参考指标及基因治疗的新靶点。     

包含氧化还原酶的WW结构域基因甲基化与食管鳞状细胞癌的关系

目的：研究食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）包含氧化还原酶的WW结构域（WW domain containing oxidoreductase,WWOX）基因启动子甲基化及mRNA的表达与ESCC发生发展的关系。方法：采用改进的甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）和RT-PCR技术检测69例ESCC组织及48例相应癌旁正常组织中WWOX基因的DNA甲基化和mRNA表达情况。结果：ESCC组织中WWOX基因启动子的甲基化发生率为26.1%（18/69）,显著高于癌旁正常组织4.2%（2/48）（P=0.002）;Ⅲ、Ⅳ期食管癌患者中WWOX基因甲基化发生率（43.3%,13/30）显著高于Ⅰ、Ⅱ期（12.8%,5/39）（P=0.004）;低分化癌组的甲基化发生率（33.3%,4/12）高于高分化（20.0%,3/15）和中分化组（26.2%,11/42）,但其差异均无统计学意义（P〉0.05）。ESCC组织中WWOX基因mRNA的相对表达量比相应癌旁正常组织低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。ESCC组织中WWOXmRNA的相对表达量与临床病理因素无明显相关关系（P〉0.05）。结论：WWOX基因启动子甲基化可能与ESCC的形成和进展有关。