人源性食管鳞癌cDNA文库的构建及鉴定

目的:构建人源性食管鳞癌cDNA噬菌体表达文库。方法:从人食管鳞癌组织中提取总RNA并分离纯化mRNA,用RT-PCR合成cDNA单链,LD-PCR扩增双链cDNA,除去<500bp的小片段,与载体λTriplEx2噬菌体左右臂连接,经体外包装即构成全长cD-NA噬菌体表达文库。转化E.coliXL1-Blue感受态细胞,测定文库的滴度,确定文库的容量大小,用蓝白筛选测定文库的重组率,PCR鉴定cDNA插入片段的大小。结果:构建的人源性食管鳞癌cDNA噬菌体表达文库滴度为1.64×106pfu/mL,重组率为98.6%,cDNA插入片段的大小为0.7～2.5kb,平均长约1.5kb。结论:成功构建1个人源性食管鳞癌cDNA噬菌体表达文库,适合于大批量筛选cDNA克隆的食管鳞癌肿瘤抗原基因。     

膀胱移行细胞癌RASSF1A和Cyclin D1与Bcl-2蛋白的表达及意义

目的:探讨RASSF1A、CyclinD1和Bcl-2蛋白在膀胱移行细胞癌发生发展中的作用,以及RASSF1A和CyclinD1与Bcl-2蛋白之间的关系。方法:免疫组化法(SP法)检测45例膀胱移行细胞癌组织、45例癌旁黏膜及18例正常黏膜组织中RASSF1A、CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达。结果:膀胱移行细胞癌组织中RASSF1A、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达阳性率分别为46.7%(21/45)、88.9%(40/45)和57.8%(26/45);癌旁组织分别为84.4%(38/45)、42.2%(19/45)和24.4%(11/45);正常组织分别为94.4%(17/18)、38.9%(7/18)和16.7%(3/18)。膀胱移行细胞癌组织中RASSF1A蛋白的表达显著低于癌旁及正常膀胱黏膜,P<0.05;而CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达则显著升高,P<0.05。RASSF1A和CyclinD1及Bcl-2蛋白的表达呈负相关性,P<0.05。结论:RASSF1A蛋白的表达降低和CyclinD1、Bcl-2蛋白的过表达可能参与膀胱移行细胞癌的发生发展过程,RASSF1A可能通过某种机制促使CyclinD1和Bcl-2在膀胱移行细胞癌中过表达,从而促进膀胱移行细胞癌的发生发展。     

张家港地区新生儿遗传性耳聋基因筛查情况分析及意义

目的 了解张家港地区新生儿遗传性耳聋基因筛查情况以及流行特点,实现早筛查、早发现、早诊断、早治疗.方法 收集张家港地区2017年8月15日-2019年7月31日出生的新生儿,采集其足跟血进行4个常见耳聋基因15个突变位点检测,统计分析基因检测结果.结果 2017年8月-2019年7月张家港地区活产数为21 847例,共...     

新生大鼠缺血缺氧性脑损伤与bcl-2基因表达的关系

目的通过研究新生大鼠脑缺血时bcl-2基因在海马区的表达特点,探讨bcl-2基因表达与缺血缺氧性脑损伤的关系。方法54只7日龄新生SD大鼠随机分为1个对照组和8个实验组。给动物吸入含有92％氮气和8％氧气混合气体建立新生大鼠HIBD动物模型,分别在脑损伤后不同时间点（0．5、1、3、6、12、24、48、72h等）断头处死动物,取海马组织,用免疫组织化学方法检测海马脑神经细胞凋亡及bcl-2基因表达情况。结果海马区bcl-2蛋白阳性细胞在HIBD后立即出现,6h达到高峰,之后渐下降。结论bcl-2基因强表达于海马缺血区和缺血周边区的神经元,与神经元的存活或死亡有一定联系。     

RNA Interference-Mediated Knockdown of Bombyx mori Haemocyte-Specific Cathepsin L (Cat L)-Like Cysteine Protease Gene Increases Bacillus thuringiensis kurstaki Toxicity and Reproduction in Insect Cadavers

The silkworm’s Cat L-like gene, which encodes a lysosomal cathepsin L-like cysteine protease, is thought to be part of the insect’s innate immunity via an as-yet-undetermined mechanism. Assuming that the primary function of Cat L-like is microbial degradation in mature phagosomes, we hypothesise that the suppression of the Cat L-like gene expression would increase Bacillus thuringiensis (Bt) bacteraemia and toxicity in knockdown insects. Here, we performed a functional analysis of Cat L-like in larvae that were fed mulberry leaves contaminated with a commercial biopesticide formulation based on Bt kurstaki (Btk) (i.e., Dipel) to investigate its role in insect defence against a known entomopathogen. Exposure to sublethal doses of Dipel resulted in overexpression of the Cat L-like gene in insect haemolymph 24 and 48 h after exposure. RNA interference (RNAi)-mediated suppression of Cat L-like expression significantly increased the toxicity of Dipel to exposed larvae. Moreover, Btk replication was higher in RNAi insects, suggesting that Cat L-like cathepsin may be involved in a bacterial killing mechanism of haemocytes. Finally, our results confirm that Cat L-like protease is part of the antimicrobial defence of insects and suggest that it could be used as a target to increase the insecticidal efficacy of Bt-based biopesticides.     

家族性幼年强直性脊柱炎的临床表现及基因分析

目的分析家族性幼年强直性脊柱炎（JAS）的临床表现特点及基因分析,提高对JAS的认识。方法对一家族性AS中57名幼儿、儿童进行体检、血尿常规、生化检测、血清学HLA—B27测定、X光骨盆平片、X光腰椎片、骶骼关节CT等检查,并进行基因及亚型分析。结果被检家族中＜16岁57名,RF阴性,CRP8．5mL／dL,血清学HIA—B27阳性8人,临床诊断JAS 2人,均为男性,年龄15、16岁;HLA—B27基因阳性6人（血清学HLA—B27均阳性）,检出阳性率明显高于临床诊断JAS者,亚型分析均为HLA—B2704。结论JAS临床症状于年长儿童表现明显,基因分析对早期诊断尤显重要。     

Short-Term Outcomes of the First in Vivo Gene Therapy for RPE65-Mediated Retinitis Pigmentosa

Here, we report early treatment outcomes of gene therapy for early onset retinitis pigmentosa (RP) (Leber congenital amaurosis) associated with biallelic RPE65 mutation in a 30-year-old female patient. Initially, her visual acuity (VA) was 20/200, and her visual field (VF) was severely constricted to the center in the left eye. Her electroretinography showed nearly extinct signals. Full-field stimulus threshold test (FST) revealed diminished dark-adapted light sensitivity. Voretigene neparvovec-rzyl (VN) is the first in vivo viral gene therapy agent to be approved. At 3 months after subretinal injection of VN in the left eye, VA, VF, and FST showed sustained improvement. She did not exhibit any signs of adverse effects from the treatment. Gene therapy for RP proved to be an effective and safe treatment in an advanced case of RPE65-associatied early onset RP.     

重庆地区正常汉族人群雌激素受体基因多态性的分布特征

目的观察雌激素受体（ER）基因多态性在重庆地区正常汉族人群中的分布特征。方法通过PCR-限制性片段长度多态性分析（RFLP）方法,检测448名重庆地区正常人ER基因多态性的分布特点,并与国内外研究比较。结果重庆地区正常人群ER基因型以Pp型,xx型和ppxx型发生率最高,这种分布特点在两性间差异无统计学意义（P〉0．05）。我国不同地域男性间ER基因型的分布差异有统计学意义（P〈0．01-0、05）,女性无差异（P〉0．05）;我国女性ER基因型的分布与日拳和韩国相似（P〉0．05）,与瑞典和美国差异有统计学意义（P〈0．01-0．05）。结论ER基因型的分布在不同地域、不同种族间存在显著差异,这种差异可能与某些疾病在不同地域、不同种族间不同的发病率和临床表现有关。     

常见革兰阳性细菌鉴定与耐药检测基因芯片的临床应用

目的利用基因芯片技术进行常见革兰阳性细菌的细菌鉴定和耐药性检测。方法用生理生化鉴定和药敏纸片法确定445份革兰阳性细菌菌株的细菌种类和耐药性,盲法进行革兰阳性细菌鉴定与耐药检测基因芯片的检测,用SPSS 10.0 for Windows软件统计分析。结果与临床常规方法相比,耐药检测基因芯片鉴定指标的灵敏度均>96%,特异度均>98%;耐药检测指标的灵敏度均>94%,特异度均>90%。χ2检验结果P值均>0.05,基因芯片检测结果与临床常用方法检测结果差异无统计学意义。Kappa值均>0.75,2种方法一致性较好。结论基因芯片技术对细菌鉴定和耐药检测有一定的临床应用价值。     

COX-2基因多态性与子宫内膜异位症及子宫腺肌病关系的研究

目的探讨环氧合酶（COX）-2基因多态性与子宫内膜异位症（内异症）和子宫腺肌病的关系。方法用蛋白酶K消化—饱和酚氯仿法提取外周血白细胞DNA、PCR-限制性片段长度多态分析（PCR-RFLP）分别对70例内异症（EMs组）、50例子宫腺肌病（Ad组）和240例非内异症、腺肌病妇女（对照组）进行基因分型。结果EMs组、Ad组基因型频率COX-2-1195GG、AG和AA与对照组比较,具有显著性差异（P〈0.05）,前两组AA基因型频率及A等位基因频率均显著高于对照组,而EMs组和Ad组之间差异无显著性。携带2个A等位基因者患EMs的风险为对照组的2.67倍,患子宫腺肌病风险为对照组的3.02倍。结论COX-2-1195G〉A单核苷酸多态可能是决定EMs和子宫腺肌病个体遗传易感性的重要因素,两种疾病存在相似的遗传易感性。