乙肝基因疫苗系列质粒的构建及其在真核细胞中的表达

目的 构建一系列乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白的真核细胞表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法 采用常规PCR法扩增S、前S2－S、前S1－前S2－S片断,利用重叠PCR法扩增出前S1－S片断后,分别插入Rc/CMV及pSG5UTPL/Flag载体质粒中,并在其ATG起始密码前加入KOZAK序列后转染SP2／0细胞,Western-Blot杂交检测所表达蛋白,并用核酸自动分析仪分析所插入片断的核酸序列。结果 插入片断的核苷酸序列与相应的大、中、小蛋白和前S1－S蛋白的编码基因一致,Western-Blot杂交检测出了相应的目的蛋白。结论 获得了8个能高效表达乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白和前S1－S蛋白的真核细胞表达质粒。     

尖锐湿疣Fas、bcl—2、Ki—67的表达与细胞凋亡的关系

OBJECTIVE: This study inquired into the significance and relationship of apoptosis to the regulation and proliferation of condyloma acuminatum(CA). METHODS: Apoptotic cells were detected in situ by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated-dUTP nick end labeling (TUNEL). The detection of Fas, bcl-2 and Ki-67 expression was performed using immunohistochemical staining in 28 specimens of CA. RESULTS: Apoptotic cells were found in 24 cases (85.7%) in keratinocytes. All of the in 28 cases(100%) had Fas and Ki-67 positive expressions, but only 8 cases (28.6%) had bcl-2 mild or moderate expression. The disease severity (serious, moderate and mild) groups did not significantly differ in apoptotic index (AI), Fas, bcl-2 and Ki-67 positive expression (P > 0.05). There was positive correlation between AI and Fas(r = 0.866, P = 0.000). bcl-2 and Ki-67 were negatively correlated with AI (r = -0.416, P = 0.018; r = -0.475, P = 0.006). CONCLUSION: It is suggested that apoptosis in keratinocytes may play an important role in inhibiting the proliferation of virus, that Fas may be an upregulative factor and bcl-2 may be an inhibition factor to apoptosis, and that excessive Ki-67 expression may be associated with the acceleration of cell cycle.     

本刊对统计学方法中结果表达的有关要求

在统计学方法的表达中,当P<0.05(或P<0.01)时,应说对比组之间的差异具有统计学意义,而不应说对比组之间具有显著性(或非显著性)差异;应写明所用统计学方法的具体名称(如:成组设计资料的t检验、两因素析因设计资料的方差分析、多个均数之间两两比较的q检验等);在用不等式表示P值时,一般情况下选用P>0.05、P<0.05和P<0.01三种表达方式即可满足需要,无需再细分为P<0.001或P<0.0001。     

古尔图病毒核蛋白的原核表达纯化及ELISA检测方法的建立

目的获得纯化的GTV-rNP蛋白抗原, 并建立快速准确检测GTV抗体的ELISA法。方法人工合成密码子优化的 GTV-NP 编码基因, 克隆至 pET32a(+)载体, 构建重组表达质粒, 转化至 BL21(DE3)。将优化表达获得的蛋白经Ni柱纯化后用SDS-PAGE和Western blot鉴定。以纯化蛋白为抗原, 建立并优化GTV IgG抗体间接ELISA检测方法, 并对其进行评价和初步应用。结果成功构建原核表达质粒pET32a-NP, 重组蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达, 大小约为44 kD, Western blot结果表明重组蛋白与GTV阳性血清具有良好的抗原性。建立的ELISA法特异性强、敏感性高、批内和批间的变异系数均小于10%具有较好的重复性;检测结果与IFA检测结果符合率达到92.77%。结论建立的GTV NP 抗体检测ELISA方法的敏感性、重复性和特异性均较好。     

多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2蛋白高效表达和纯化

目的在前期的研究中，DAZAP2基因在多发性骨髓瘤（Multiple myeloma，MM）患者中表达明显下调，可能为MM的负性基因．须进一步获得DAZAP2蛋白，制备抗体，从而在蛋白水平上研究DAZAP2的表达、结构和功能．方法将原核重组质粒pQE30－DAZAP2转化大肠杆菌，阳性菌株经1 mmol／LIPTG诱导表达目的蛋白，再经过纯化和透析结果IPTG诱导4hr时，得到大量重组目的蛋白，占可溶蛋白的20％左右，经过Ni—NTA层析柱纯化。获得分子量为17kD的DAZAP2蛋白浓度为0．97mg／m1．结论DAZAP2蛋白获得高效表达，并且建立快速简便的纯化方法，目的蛋白可以用于下一步的实验．     

免疫组织化学图像光密度分析的标准化方法

免疫组织化学图像阳性物质着色的深浅和面积大小与绝对蛋白水平相关[1],即使阳性表达很弱的免疫组化图片,计算机图像分析也能准确地定量检测,并提供可重复的定量数据和客观的分析标准[2].但是对于阳性结果的定量分析方法和指标却没有统一的标准.因此,现介绍免疫组织化学图像光密度分析的标准化方法.     

4型腺病毒载体的构建和β－半乳糖苷酶基因的表达

以４型腺病毒疫苗株感染Ａ５４９细胞，提取病毒ＤＮＡ，将ＥｃｏＲＩ消化的Ｄ片段（７０．５－８３．０基因图谱单位）克隆入ｐＵＣ１８质粒，得ｐＡｄ４（７０．５－８３）质粒，质粒ｐＡｄ４（７０．５－８３）和ｐＡｄ４Ｃ１－２５经酶切、系列亚克隆、加接头等方法得到大部分和部分缺失Ｅ３区的重组质粒。聚合酶链反应（ＰＣＲ）法获得ｐｏｌｙ（Ａ），构建约８００ｂＰ腺病毒晚期表达盒，在所构建的腺病毒重组质粒Ｅ３缺失区或Ｅ４与ＩＴＲ间插入表达盒，得到可同时表达２个或２个以上外源基因和保留了Ｅ３区编码分子量为１９３００糖蛋白基因的３种Ａｄ４载体。将ｌａｃＺ基因插入载体表达区，与Ｂｅｌｌ消化的Ａｄ４ＤＮＡＡ片段共转染Ａ５４９细胞，ＯＮＰＧ法检测证实所构建的载体和表达盒功能良好。本项工作对于在国内研究口服活疫苗及开展基因治疗均具有重要意义。     

美利用超声微泡破碎技术导入胰岛素表达基因

据Graybum P（2006年5月15日《美国科学院报》）报道，超声微泡破碎技术的方法将胰岛素表达基因成功导入了小鼠的胰腺细胞。     

单链抗体基因在大肠杆菌高效表达研究进展

利用基因工程，将单链抗体（ScFv）基因导入大肠杆菌，如何使其获得高效表达，仍然是目前面临的主要问题。本文就ScFv基因在大肠杆菌中的表达形式、影响表达的主要因素、表达条件的优化选择及其应用前景方面作一综述。     

新生隐球菌荚膜基因CAP60与荧光蛋白融合表达系统的构建

荚膜是新生隐球菌的主要毒性因子 ,目前Ｃｈａｎｇ等已克隆了 4种荚膜基因 :ＣＡＰ5 9、ＣＡＰ6 4、ＣＡＰ6 0及ＣＡＰ10。已知这 4种基因对新生隐球菌的荚膜形成都是必须的 ,缺失任何一个基因都会使新生隐球菌变成无荚膜表型。搞清荚膜形成的任何一个生理、生化机制都将在新生隐球菌的临床诊断和治疗上带来突破性的进展。我们建立荧光蛋白作为标记与荚膜基因ＣＡＰ6 0融合表达 ,为进一步的研究创造条件。根据已知的ＣＡＰ6 0基因序列设计ＰＣＲ引物 ,上游为 5′ ＡＴＴＧＣＴＡＧＣＴＴＣＧＡ ＣＡＧＡＣＡＴＴＧＡＧＣＣＣＴ 3′ ,下游引…