人碱性成纤维细胞生长因子基因在大肠杆菌中的克隆与表达

应用DNA重组技术将编码人碱性成纤维细胞生长因子（bbFGF）的基因克隆至原核高效表达质粒pBV_(221)的启动子下游。SDS-SAGE、ELISA和NTT活性监测结果表明:该重组质粒pBV-hbFGF在大肠杆菌DH5α中,经42℃诱导后,可表达出有较高生物活性的hbFGF。     

PCNA及P53蛋白在口腔鳞癌组织中的表达及意义

增殖细胞核抗原(PCNA)也称周期蛋白。是反映细胞增殖分数和所处周期的客观指标，可用于判断肿瘤的恶性程度及预后，亦能较好地反映肿瘤细胞的增殖状态。P^53基因是一种重要的肿瘤抑制基因，其突变与肿瘤的发生发展密切相关。2002年1月至2003年12月，我们用免疫组织化学染色技术对49例口腔鳞癌组织的PCNA和P^53基因蛋白进行检测和分析，旨在探讨两项指标与此类肿瘤的诊断、鉴别诊断及病理分级的关系。     

中线非霍奇金恶性淋巴瘤组织中p53蛋白的表达

中线非霍奇金恶性淋巴瘤（Midlinenon－Hodgkln’sMalignantLymphoma，MNHL）是发生在上呼吸道，包括鼻腔、鼻窦、软硬胯、咽及喉等中线部位的一种结外型肿瘤，其发病原因不明。近年来的研究证实，P53基因突变是许多人类恶性肿瘤发展中常见的基因改变之一。人们发现P53基因的改变与头颈肿瘤的发展和预后有一定关系。我们应用ABC免疫组织化学染色检测MNHL组织中P53蛋白的表达情况，并探讨与MNHL的临床表现、细胞类型、临床分期及恶性程度的关系。1材料与方法1．在材料来源材料取自1991～1997年我院收治的MNHL患者的活俭样本20例，…     

真核表达载体Rc／LTR携带的报告基因可在Hela细胞中高效表达

利用基因重组技术构建了荧光酶报告基因ｌｕｃ和真表达载体Ｒｃ／ＬＴＲ的重组子Ｒｃ／ＬＴＲ－ｌｕｃ。将此重组子转染Ｈｅｌａ细胞后，ｌｕｃ基因在Ｈｅｌａ细胞中得到高效表达。蛋白激酶Ｃ激活剂ＴＰＡ可使ｌｕｃ基因的表达成增加。结果表明，ＨＩＶ－ＬＴＲ可用作真核细胞内外源基因表达的有效启动子。     

人FascDNA的克隆及其在大肠杆菌中表达的研究

为获得高质量及充足的Ｆａｓ蛋白，采用ＰＣＲ技术调整Ｆａｓ基因的开放阅读框架，使之与生物素化蛋白基因阅读框架一致；缺失了ＦａｓｃＤＮＡ基因的起始密码子并增加一个大肠杆菌偏性终止密码子，构建ＦａｓｃＤＮＡ和生物素化融合原核表达质粒ＰｉｎＰｏｉｎｔ－Ｆａｓ。将重组质粒转入大肠杆菌ＨＢ１０１，经５００ｍｍｏｌＩＰＴＧ在３７℃条件下诱导４ｈ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测融合蛋白在大肠杆菌得以高效表达，表达量为细菌总蛋白的１３．８％。用亲和层析树脂对生物素化融合蛋白进行亲和层析纯化，得到Ｆａｓ重组的蛋白，且表达的Ｆａｓ融合蛋白具有抗体结合活性。此蛋白的表达成功将解决Ｆａｓ膜蛋白不易提取的难题，为深入研究Ｆａｓ提供了良好材料来源