腔内注射雷公藤甲素纳米材料治疗抗原诱导的兔关节炎的实验研究

目的探讨关节腔内注射雷公藤甲素纳米材料(TPNA)对抗原诱导的兔关节炎的治疗效果。方法新西兰大白兔27只,采用完全随机区组设计法分配为4组,建立抗原诱导的关节炎模型后,TPNA组、雷公藤甲素组(TP组)和倍他米松组(BS组)分别于超声引导下向关节腔内注射TPNA、单纯TP、倍他米松,每组7只;对照组(6只)仅穿刺但不注射任何药物。观察关节肿胀度,滑膜炎及骨破坏等病理变化。统计学方法采用t检验、重复测量的方差分析、Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis检验。结果①末次免疫1周后即治疗前TPNA组、TP组、BS组和对照组兔膝关节直径大小分别为(2.02±0.08)cm,(2.08±0.06)cm,(2.10±0.06)cm和(2.18±0.07)cm,在给药1周后上述各组膝关节直径分别为(1.85±0.06)cm、(1.89±0.07)cm、(1.93±0.08)cm和(2.15±0.08)cm,各个给药组关节肿胀均见明显改善。随着治疗的进行,TP组、TPNA组和BS组兔膝关节直径逐渐减小(F=58.83,P<0.01;F=53.78,P<0.01;F=68.24,P<0.01),而且TP组、TPNA组和BS组兔膝关节直径明显小于对照组,差异有统计学意义(F=63.83,P<0.01;F=71.94,P<0.01;F=140.79,P<0.01)。②TP组滑膜炎病理评分较对照组低(Z=-2.082,P<0.05),以轻度滑膜炎为主,而TPNA组和BS组滑膜病理评分比TP组低(Z=-2.082,P<0.05;Z=-2.687,P<0.05),大多无滑膜炎表现,BS组与TPNA组间差异无统计学意义(Z=-1.000,P>0.05)。③TPNA组、TP组以及BS组骨质破坏的病理评分均比对照组减轻(Z=-2.505,P<0.05;Z=-2.216,P<0.05;Z=-2.505,P<0.05),TPNA组、TP组以及BS组间差异无统计学意义(χ2=0.588,P>0.05)。结论关节腔内注射TPNA可以缓解关节肿胀,减轻滑膜炎,延缓骨破坏的形成。其效果与糖皮质激素相当,好于单纯TP。关节腔内注射TPNA有望成为治疗关节炎的有效手段。     

Triptolide T10 enhances AAV-mediated gene transfer in mice striatum

Adeno-associated virus (AAV) mediated gene transfer has been demonstrated to be an effective approach for treating Parkinson's disease (PD). Triptolide T10 is a monomeric compound isolated from tripterygium wilfordii Hook.f. (Thunder God vine), a traditional Chinese herb for anti-inflammatory medications. In the present study, we co-administered T10 with recombinant AAV2 in SH-SY5Y human neuroblastoma cells and in the striatum of C57BL/6 mice, and then evaluated the AAV-mediated gene expression levels. The results have shown that T10 significantly augmented the expression of AAV-mediated gene in a dose-dependent fashion without detectable cytotoxicity. As growing evidence indicated that inflammation contributed to the progression of PD, and the anti-inflammatory effect of T10 was shown in our previous studies, our data of T10 to enhance AAV transduction suggest that T10 might be potentially used as a facilitating reagent for the AAV gene therapy applications in neurodegenerative diseases.     

雷公藤内酯醇对大鼠肾缺血再灌注损伤时Toll样受体4表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇(TRI)对大鼠肾缺血再灌注损伤时肾组织中Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 随机将51只Wistar大鼠分为3组.(1)阴性对照组(n=15):游离双侧肾脏,切除右肾,缝合腹壁.(2)缺血再灌注组(n=18):实验过程与阴性对照组相同,但在切除右肾和游离左肾之后,将左肾动、静脉夹闭45 min,然后开通.(3)TRI处理组(n=18):肾缺血再灌注前3 d经大鼠腹腔注射TRI 0.4 mg/kg,每天1次,连续3 d,其他实验过程与缺血再灌注组相同.肾缺血再灌注1、3、5 d后,分别采用全自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肾组织中TLR4 mRNA的表达水平;免疫印记法(Western blot)检测肾组织中TLR4表达水平.结果 肾缺血再灌注1、3、5 d后,缺血再灌注组和TRI处理组血清BUN及Cr均明显高于阴性对照组(P＜0.01),肾组织中TLR4 mRNA和TLR4的表达也明显高于阴性对照组(P＜0.05);但与缺血再灌注组比较,TRI处理组血清BUN和Cr明显降低(P＜0.01),肾组织中TLR4 mRNA和TLR4的表达也显著降低(P＜0.05).结论 雷公藤内酯醇可以减轻肾缺血再灌注损伤,其机制可能是通过抑制TLR4的表达而发挥作用的.     

雷公藤内酯醇调节5-脂氧合酶对胰腺癌细胞增殖的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,TL)在胰腺癌细胞中5-脂氧合酶(5-LOX)蛋白的表达及对癌细胞生长的影响.方法:应用免疫细胞化学法检测胰腺癌细胞株SW1990和Capan2中5-LOX蛋白的表达,同时检测TL对胰腺癌细胞株SW1990 5-LOX蛋白表达的影响,采用MTT法和流式细胞术分别检测胰腺癌细胞SW1990的增殖和凋亡.结果:胰腺癌细胞株SW1990和Capan2中均表达5-LOX,并与细胞分化程度有关;TL抑制SW1990中5-LOX蛋白的表达,并抑制胰腺癌细胞SW1990增殖和促进细胞的凋亡,作用随浓度的增加而增强(P＜0.01);细胞的增殖和凋亡与5-LOX蛋白的表达相关(P＜0.01).结论:TL抑制胰腺癌细胞SW1990中5-LOX的表达,并抑制胰腺癌细胞增殖和诱导凋亡,5-LOX代谢途径在胰腺癌细胞的生长中发挥重要作用.     

雷公藤内酯醇对K562细胞增殖周期的影响及对比研究

目的探讨雷公藤内酯醇抑制 K562细胞增殖的机理。方法选用 K562细胞株,运用细胞培养、MTT 法及流式细胞仪研究不同浓度雷公藤内酯醇、足叶乙甙(VP-16)对 K562细胞增殖及细胞周期的影响。结果雷公藤内酯醇能抑制 K562细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,且具有上调 K562细胞 G_1/S 检测点的能力。而 VP-16作用点是 G_2/M 期。结论雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,能干扰 K562细胞 G_1/S 检测点的转换,与 VP-16作用点不同。     

超声引导下腔内注射雷公藤甲素纳米粒治疗兔类风湿关节炎的实验研究

目的应用超声引导下关节腔内注射雷公藤甲素纳米粒(TPN)治疗兔类风湿关节炎,探讨超声评估兔关节炎疗效的应用价值。方法选取27只健康新西兰大白兔,建立诱导类风湿关节炎模型后随机分为4组:对照组(6只)仅穿刺但不注射药物;TPN组、雷公藤甲素(TP)组和倍他米松(BS)组(每组各7只)分别于超声引导下兔膝关节腔内注射TPN、TP、BS,观察兔膝关节肿胀程度,应用超声评估兔膝关节滑膜增生、滑膜血流信号及骨侵蚀情况;分析超声指标与病理结果的相关性。结果与对照组比较,TP组、BS组和TPN组滑膜血流的超声评分均降低,骨侵蚀的超声评分和病理评分也均降低,差异均有统计学意义(均P0.05);与TP组比较,BS组和TPN组滑膜增生的超声评分和病理评分均降低,差异均有统计学意义(均P0.05);TP组、BS组和TPN组滑膜血流的超声评分和骨侵蚀的超声评分比较,差异均无统计学意义。相关性分析显示,滑膜和骨侵蚀的超声评分与其病理评分均呈正相关(r=0.832、0.859,均P0.001)。结论超声引导下关节腔内注射TPN治疗类风湿关节炎疗效好且副作用小,超声在评估治疗兔关节炎疗效中具有重要的价值。     

雷公藤内酯醇对纤维肉瘤HT-1080细胞表达基质金属蛋白酶的影响

目的研究雷公藤内酯醇（TL）对人纤维肉瘤HT-1080细胞表达基质金属蛋白酶（MMP）-2和-9的影响。方法以终浓度分别为6、12和18nM的TL处理HT-1080细胞72h，未加药物处理细胞为对照组，RT—PCR检测MMP-2和-9mRNA表达，明胶酶谱实验检测MMP-2和-9的活性。结果与对照组比较，18nMTL处理HT-1080细胞72h后，MMP-9的mRNA表达及活性明显下调，但MMP-2的表达及活性无明显变化。结论TL抑制纤维肉瘤HT-1080细胞表达MMP-9。     

雷公藤甲素对哮喘小鼠信号转导和转录激活因子6及eotaxin表达的影响

目的研究雷公藤甲素对哮喘小鼠信号转导和转录激活因子6(STAT6)、嗜酸粒细胞趋化因子(eotaxin)表达的影响,探讨其治疗哮喘的机制。方法建立小鼠卵蛋白哮喘模型,随机分为7组,分别为对照组、地塞米松治疗组及不同剂量雷公藤甲素治疗组,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及嗜酸粒细胞(Eos)计数;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学法分别检测肺组织中STAT6、eotaxin mRNA及气道上皮STAT6、eotaxin蛋白表达水平。结果哮喘组STAT6、eotaxin mRNA及蛋白表达明显高于正常对照组(P<0.01),雷公藤甲素治疗组及地塞米松组明显低于哮喘组(P<0.01)。气道上皮STAT6的蛋白表达与BALF中白细胞数、Eos计数及气道上皮eotaxin蛋白表达呈正相关(r分别为0.528,0.612,0.682,P<0.01)。气道上皮eotaxin蛋白表达与白细胞总数、Eos计数呈正相关(r分别为0.79,0.88,P<0.01)。结论雷公藤甲素抑制哮喘气道炎症的机制可能与其抑制STAT6及eotaxin的表达活性有关。     

雷公藤内酯醇诱导淋巴细胞凋亡的作用与细胞活化程度的关系

目的　通过观察雷公藤内酯醇诱导 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠脾细胞凋亡与细胞活化程度的关系,探讨该化合物免疫抑制的作用机理。方法　 以脾淋巴细胞为研究对象, Ｐ Ｈ Ａ Ｐ、 Ｐ Ｍ Ａ 和ｒｈ Ｉ Ｌ２ 为有丝分裂原活化淋巴细胞。结合荧光染色法, Ｄ Ｎ Ａ 凝胶电泳及 Ｄ Ｎ Ａ 片段测定等方法,检测雷公藤内酯醇诱导凋亡的作用。结果　（１） 雷公藤内酯醇能够造成活化的淋巴细胞凋亡,并呈浓度依赖性;（２） 雷公藤内酯醇不能使处于静止状态的脾淋巴细胞凋亡;（３） 雷公藤内酯醇诱导淋巴细胞凋亡的作用,与淋巴细胞的活化程度和增殖反应程度密切。结论　雷公藤内酯醇不能造成静止状态的淋巴细胞发生细胞凋亡,只能够诱导已活化淋巴细胞发生细胞凋亡,并以此影响机体的免疫功能。