雷公藤甲素与双氢青蒿素配伍对大鼠佐剂性关节炎的免疫学研究

目的：从病理及免疫学的角度观察小剂量的雷公藤甲素与双氢青蒿素配伍对大鼠佐剂性关节炎的影响,探讨能否通过减少雷公藤甲素的用量而降低药物的毒性。方法：将70只雄性SD大鼠随机分为7组（即正常组,模型组,雷公藤甲素高、低剂量组,雷公藤甲素双氢青蒿素高、中、低剂量组）。动物模型用弗氏完全佐剂于SD大鼠右后足跖皮内诱导关节炎发生。给药组治疗1个月后取血并处死动物,取关节进行病理学分析,并运用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群、免疫组化染色法检测踝关节软骨上的IL-6、TNF-α的表达。结果：与模型组相比,雷公藤甲素双氢青蒿素配伍可明显抑制AA大鼠的关节病理损伤,能显著降低外周血CD4^＋、CD4^＋/CD8^＋水平及降低踝关节软骨上的IL-6、TNF-α的表达（P〈0.01）,且与雷公藤甲素高剂量组比较则无差异（P〉0.05）,优于雷公藤甲素低剂量组（P〈0.05）。结论：通过与双氢青蒿素配伍可以减少雷公藤甲素的用量。     

雷公藤内酯醇洗脱支架抑制小型猪冠脉再狭窄研究

目的评价雷公藤内酯醇洗脱支架对预防小型猪冠状动脉模型再狭窄的疗效，研究其量效关系与安全性。方法将30只西藏小型猪分为不锈钢裸金属支架组、雷帕霉素支架组、雷公藤内酯醇60灿g支架组、雷公藤内酯醇100μg支架组和雷公藤内酯醇200μg支架组等5组，设立7d组和28d组两个观察终点。每只猪选择左前降支和右冠脉分别置入同一类型支架各1枚。共置入支架60枚。28d组于术后28d行冠状动脉造影，术后处死动物，取出支架血管，行病理组织学分析。7d组于术后7d处死动物，取支架血管行核因子NF-κB免疫组化检测。所有小型猪术前术后行血常规和血肝肾功能检查。结果支架植入后28d组、雷公藤内酯醇100I-Lg支架组和雷帕霉素支架组最小内径相似（P〉0.05），均大于不锈钢裸金属支架组（P〈0.05）。雷公藤内酯醇100μg支架组与雷帕霉素支架组相比新生内膜厚度相似（P〉0.05），均明显小于不锈钢裸金属支架组、雷公藤内酯醇60μg支架组和雷公藤内酯醇200μg支架组（P〈0.05）。雷公藤内酯醇100μg支架组与雷帕霉素支架组相比狭窄程度相似（P〉0.05），均明显小于不锈钢裸金属支架组、雷公藤内酯醇60μg支架组和雷公藤内酯醇200μg支架组（P〈0.05）。支架植入后雷公藤内酯醇100μg支架组NF-κB阳性细胞数比不锈钢裸金属支架组、雷帕霉素支架组、雷公藤内酯醇60μg支架组和雷公藤内酯醇200μg支架组减少（P〈0.05），其它4组无统计学意义（P〉0.05）。结论雷公藤内酯醇支架能抑制冠脉内膜增生，在支架植入4周内能预防再狭窄，无毒副作用，且其效应呈剂量依赖性。     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖及胞浆内cAMP浓度的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide, Tri)抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine lens epithelial cell, BLECs)增殖及其机制.方法:取第4代BLECs,用MTT比色法检测增殖抑制率来测定Tri 20 μg/L对细胞增殖的影响,用放射免疫法测定BLECs内cAMP浓度.结果:Tri 20 μg/L,时间6,12,24,48,72 h作用在处于增殖状态BLECs,出现明显的增殖抑制作用, 其增殖抑制率升高呈现明显的时间依赖性.而增殖抑制组细胞内cAMP含量明显增加.结论:Tri对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用,而该作用可能通过影响细胞内cAMP等第二信使物质浓度来完成.     

雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖的抑制及其胞浆内cGMP浓度的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(Triptolide, Tri)抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine lens epithelial cell, BLECs)增殖及其细胞内cGMP浓度变化的机制.方法:取第4代BLECs,分3组培养.空白对照组:以DMEM培养;增殖对照组:以DMEM 50 μg/L rhEGF培养;雷公藤内酯醇组:增殖对照组 20 μg/L雷公藤内酯醇.用MTT比色法检测增殖抑制率来测定Tri 20 μg/L对细胞增殖的影响,用放射免疫法测定BLECs内cGMP浓度.结果:浓度为20 μg/L的Tri、作用在处于增殖状态的BLECs时间分别为6,12,24,48,72 h,均出现明显的增殖抑制作用, 其增殖抑制率升高呈现明显的时间依赖性.而雷公藤内酯醇组细胞内cGMP含量比增殖对照组明显降低.结论:Tri对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用,而该作用可能通过降低细胞内cGMP浓度来完成.     

雷公藤内酯醇抑制Raji细胞增殖和迁移的体外实验研究

 目的： 研究雷公藤内酯醇在体外是否具有抗淋巴瘤细胞增殖和迁移的效应。方法： 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测雷公藤内酯醇对Raji细胞增殖的作用；采用Annexin V/PI双标流式细胞术检测雷公藤内酯醇对Raji细胞凋亡的影响；采用流式细胞仪检测雷公藤内酯醇对Raji细胞表面CXCR4受体表达的影响；并采用Transwell微孔隔离室迁移实验观察雷公藤内酯醇对Raji细胞体外迁移作用的影响。结果： ①雷公藤内酯醇能以时间和剂量依赖方式抑制Raji细胞的增殖，24 h和36 h的 IC50值分别为43.06 nmol/L和25.08 nmol/L。② 随雷公藤内酯醇药物浓度的增加和作用时间的延长，Raji细胞凋亡率逐渐增高，且呈时效和量效关系。③ Raji细胞经不同浓度雷公藤内酯醇（12.5、25、50 nmol/L）处理后，CXCR4表达率（34.66%±4.34%、23.74%±1.87%、18.10%±1.18%）明显低于对照组（72.47%±7.28%，P＜0.01），此抑制效应呈剂量依赖性；④ Transwell趋化活性分析显示雷公藤内酯醇能抑制rhSDF-1α对Raji细胞的趋化作用，此抑制效应也呈量效关系。结论： 雷公藤内酯醇具有抗淋巴瘤细胞增殖和诱导凋亡的效应，并能阻断Raji细胞的体外迁移，其机制与其对SDF-1/CXCR4生物学轴的抑制效应有关。     

雷公藤内酯醇抑制胰腺癌细胞生长及血管生成的实验研究

目的 探讨雷公藤内酯醇(TL)对胰腺癌细胞生长及肿瘤新生血管生成的抑制作用.方法 采用CCK-8试剂盒检测TL对胰腺癌SW1990细胞的生长抑制作用;采用TUNEL法检测TL对细胞凋亡的诱导作用;观察尾静脉注射TL对裸鼠移植瘤生长抑制作用和对瘤组织VEGF表达、微血管密度(MVD)的影响.结果 TL呈浓度和时间依赖性抑制SW1990细胞增殖,160 mg/ml的TL干预SW1990细胞24 h,细胞抑制率达50.6%,细胞凋亡率从对照组的9.6%升高到45.1%(P<0.01);TL0.5 mg/kg体重瘤内注射对移植瘤的抑瘤率达89.9%,瘤组织VEGF表达减少,MVD从36.25±8.64减少到9.87±3.34(P<0.01).结论 TL可显著抑制胰腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡;通过抑制肿瘤新生血管生成可抑制裸鼠SW1990细胞移植瘤的生长.     

雷公藤内酯醇抑制外周血单个核细胞分泌IL-10与IL-10基因-592A/C多态性相关

目的探讨雷公藤内酯醇对体外培养的外周血单个核细胞(peripheralbloodmononucle-arcells,PBMC)分泌白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的抑制作用与IL-10基因592位点A/C多态性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对32名健康志愿者IL-10基因启动子区592位点A/C多态性进行基因型检测,同时进行PBMC培养,用脂多糖(lipopolysaccharidc,LPS)刺激培养细胞,并予以雷公藤内酯醇处理PBMC,收集培养上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清液中IL-10的含量。结果AA基因型15名,非AA基因型17名。两组不同基因型PBMC经LPS刺激后培养上清液中IL-10水平差异无统计学意义,但有非AA基因型高于AA基因型的趋势。雷公藤内酯醇能显著抑制LPS诱导的PBMC分泌IL-10(P<0.01),并且其对携带IL-10基因-592位点非AA基因型PBMC分泌IL-10的抑制率显著高于携带AA基因型者(P<0.05)。结论雷公藤内酯醇对携带IL-10基因592位点A/C不同基因型的PBMC分泌IL-10的抑制作用差异有统计学意义,对携带非AA纯合子基因型者抑制作用较强,这可能是导致雷公藤药理作用出现个体差异的原因之一。     

雷公藤内酯醇干预高糖诱导足细胞转分化作用机制的研究

目的 观察不同浓度雷公藤内酯醇（TP）体外干预高糖环境下小鼠足细胞上皮细胞向间充质细胞转分化（EMT）及TGF-β/Smad信号通路的调节作用,探讨其保护足细胞损伤的可能机制。方法 将培养成熟的小鼠足细胞随机分为25mmol/L葡萄糖培养液干预组（高糖组）,5mmol/L葡萄糖培养液干预组（对照组）和在25mmol/L葡萄糖培养液中分别加入浓度为8、16、32ng/ml的TP干预组（低、中、高TP组）。体外培养48h后,倒置显微镜下观察足细胞形态变化,采用RT-PCR和Western-blot技术分别检测各组足细胞NEPH1、desmin、TGF-β1和Smad7的mRNA和蛋白表达变化。结果高糖组和高、中、低TP组的小鼠足细胞NEPH1和Smad7mRNA和蛋白的表达水平均较对照组低,desmin和TGF-β1的mRNA和蛋白的表达水平均较对照组高,差异有统计学意义（P＜0.05或0.01）。高、中、低TP组足细胞NEPH1和Smad7的mRNA和蛋白的表达水平均高于高糖组,desmin和TGF-β1的mRNA和蛋白的表达水平均低于高糖组,差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）;中TP组NEPH1和Smad7的mRNA和蛋白的表达水平均高于低TP组和高TP组,desmin和TGF-β1的mRNA和蛋白的表达水平均低于低TP组和高TP组（均P＜0.01）。结论TP可能通过抑制TGF-β/Smad信号通路缓解高糖诱导的足细胞转分化。     

雷公藤甲素对同种异体肌腱移植修复鸡肌腱缺损的作用

目的雷公藤甲素具有抗排斥作用,探讨其在同种异体肌腱移植修复鸡肌腱缺损中的作用。方法 4月龄健康清洁级雄性来亨鸡64只,体重1.9～2.3 kg,取右足第3足趾肌腱制备肌腱缺损模型并行同种异体肌腱修复。根据是否给予雷公藤甲素,随机分为两组(n=32)。实验组术后给予雷公藤甲素100μg/(kg.d),共3周;对照组正常喂养。术后观察动物一般情况,于1、2、3、4周各组取4只动物大体观察移植肌腱情况,其中1、3周取材行组织学观察、2、4周行透射电镜观察。术后3、6周各组另取8只动物采血行流式细胞学检测,取肌腱行生物力学检测。结果术后实验动物均存活至实验完成。标本大体观察显示,随时间延长,两组肌腱周围充血、水肿缓解,实验组见疏松粘连带,对照组为广泛致密纤维组织粘连带。组织学观察示,术后1、3周实验组炎性反应均较对照组轻。透射电镜观察示,术后2、4周,实验组成纤维细胞核大,常染色质丰富,异染色质较少;对照组成纤维细胞细胞质内有少量粗面内质网,腔小,内容物少。术后3、6周,实验组CD4+、CD8+T淋巴细胞均较对照组少,CD4+/CD8+T淋巴细胞比值低于对照组;实验组肌腱最大拉伸断裂强度大于对照组,拉断粘连带功耗小于对照组;以上指标比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论雷公藤甲素可以降低鸡同种异体肌腱移植中的免疫排斥反应,增强肌腱愈合强度,减轻肌腱粘连程度。     

雷公藤内酯醇前药MC002在大鼠体内药代陛别差异研究

目的研究雷公藤内酯醇前药MC002在♀♂大鼠体内代谢是否存在差异。方法两组实验各设♀♂对照。♀♂SD大鼠静脉注射给予MC002 0.75 mg.kg-1,于不同时间点采集全血样品,另♀♂SD大鼠静脉注射给予MC0020.75 mg.kg-1,于5、15、30、90 min后采集各组织样品。样品用乙酸乙酯提取后,LC-MS/MS方法测定,DAS2.0计算药代动力学参数。结果 MC002在♀♂大鼠体内均迅速转化为代谢产物PG490,♀♂大鼠的AUC分别为（8046.2±634.75）和（5604.0±1140.9）μg·min·L-1,CL分别为（0.089±0.01）和（0.128±0.02）L·min-1·kg-1,两组参数统计学上有显著性差异（P〈0.05）,♀♂大鼠组织内浓度变化趋势相同,给药后5 min各组织药物浓度均达到最大值。结论 MC002在大鼠体内迅速转化为活性代谢产物PG490,PG490在大鼠体内代谢呈现出较明显的性别差异,总体表现为♀大鼠血中药物暴露高,代谢慢。♀♂大鼠组织中药物浓度变化趋势无明显差别。