SSH技术及其在肿瘤研究中的应用

随着人类基因组计划的完成，人们已经把越来越多的目光投向不同细胞或者不同生理和病理状态下基因的差异性表达（differential display）。这些基因的选择性表达决定了机体的整个生命过程，基因表达的改变正是处于控制生物学调节机制的中心位置。对于肿瘤来说，其发生发展涉及多种基因的相互作用，这些基因的差异性表达也决定了肿瘤的多样性表型。目前分离并且克隆差异性表达基因成为了功能性基因研究的热点。对肿瘤差异基因的分离克隆不但有助于我们理解肿瘤发生发展的分子机制，而且对肿瘤的早期诊断、靶向治疗和有效预防都具有重要的生物学和临床意义。分离差异表达基因的方法有很多，我们比较熟悉的经典方法有：差异显示技术（DD-PCR）、在此基础上发展起来的代表性差异显示技术（RDA—PCR），     

B组轮状病毒WH-2株vp7基因的原核表达与抗体的制备

目的：在大肠杆菌中表达人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白并制备其兔抗血清。方法：根据B组轮状病毒（GBRV）WH-2株vp7基因的全序列设计引物,用PCR的方法扩增得到vp7基因的编码区。将其克隆到原核GST融合表达载体pGEX-KG内,转化大肠杆菌E.coliDH5α,IPTG诱导表达人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白,经SDS-PAGE分离纯化表达的蛋白免疫新西兰兔,制备人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白抗血清。结果：经鉴定确认,vp7基因以正确的方式插入到载体中,此重组表达载体经IPTG诱导后,可表达相对分子量为53.4 kDa的GST-VP7融合蛋白。制备的抗血清经同样诱导表达的表达载体pGEX-KG表达产物吸收后1：500倍稀释后用Western Blot分析,与53.4 kDa的GST-VP7融合蛋白获得特异性显色信号。结论：人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白成功在大肠杆菌中GST融合表达,所表达的蛋白和制备的抗体不但为研究结构与功能提供了物质基础,也为GBRV所引起的疾病预防、诊断和治疗等流行病学研究和临床诊断奠定了基础,具有重要实际应用价值。     

四种可溶性载体对骨形态发生蛋白在小鼠体内诱导成骨活性的影响

以四种可溶性物质作为牛骨形态发生蛋白（ｂＢＭＰ）的载体，通过实验观察哪种物质是ｂＢＭＰ的有效缓释载体。将聚乙烯吡咯烷酮（ＰＶＰ）、葡聚糖、羟乙基淀粉（ＨＥＳ）、甘露醇分别与等量ｂＢＭＰ复合后，注射入小鼠股部肌肉，观察组织学成骨及测定标本内钙含量。结果，ｂＢＭＰ／ＰＶＰ有良好成骨，吸收较快，未见炎症及排斥反应，其混悬液较稳定，具有良好的适针性及可注射性，ｂＢＭＰ／甘露醇只有很低成骨率。其余各组未见成骨。ＰＶＰ对ｂＢＭＰ具有满意助溶、助悬及缓释载体作用，对ｂＢＭＰ活性无损害，生物相容性好。     

修复骨缺损的局部基因释放载体技术

骨骼缺损是临床上常见的问题，骨结构异常严重地影响患者的外貌、功能和心理社会行为。局部基因释放载体技术是新近开展的一种修复组织缺损的新技术。本文对该技术的发展现状及其应用于修复骨骼缺损的前景简要作一综述。     

噬菌体表面展示技术及其在靶向载体构建中的应用

目的 介绍噬菌体表面展示技术及其在靶向载体构建中的应用.方法 主要综述了近年来国内外的相关文献.结果 采用噬茵体表面展示技术可以高通量筛选单链抗体等靶向分子,将其连接至携载药物或基因的非病毒及病毒载体可提高其靶向性及产生更好的治疗效果.结论 噬茵体表面展示技术的发展和成熟将为构建具有高效、特异性的靶向载体提供条件.     

Kringle 5的真核植物细胞穿梭表达载体的构建

目的：构建含有目的基因kring5的真核植物细胞穿酸表达载体。方法：应用RT－PCR方法，从正常人肝脏组织中获得kringle5基因，测序后，再通过DNA重组技术，将kringle5基因片段克隆到真核植物细胞表达载体pBI121和pCAMBIA3301上。结果：得到的kringle5基因序列测定结果与文献相符，重组载体pB1k5和pC33k5经酶切鉴定正确，含有植物高效表达CaMV35S启动子。结论：重组载体pB1k5和pC33k5不仅可以在大肠杆菌中稳定复制，而且可以在植物细胞中表达。     

人白细胞介素12双亚基共表达真核载体的构建

目的：为满足基因治疗的需要构建人白细胞介素12(hIL－12)双亚基共表达质粒。方法：先从人胚肾组织的逆转录产物中用PCR方法扩增出它的两个亚基P40和P35的cDNA全长，分别克隆入真核表达载体pcDNA3．1( ／-)中构建单亚基质粒——P( )／P40和P(-)／P35，然后再将二者串联克隆入真核表达载体poDNA3．1( )中得到P( )／IL-12质粒。脂质体转染HepG2后24，48h ELISA检测细胞培养上清内hIL-12蛋白质表达。结果：P( )／IL-12质粒经酶切和测序证明两亚基连接方向正确，序列无突变；ELISA检测细胞上清结果证实可表达hIL-12蛋白质。结论：成功构建P40和P35双亚基真核共表达质粒——P( )／IL-12，为模拟hIL-12生理表达方式，简化hIL-12基因治疗操作奠定了基础。