正常肝组织与肝硬化组织差异表达基因的削减cDNA文库的构建及差异基因的初步筛选

目的构建人正常肝组织与肝硬化组织差异表达基因的削减cDNA文库.方法采用抑制削减杂交技术,以正常肝组织及有肝癌背景的肝硬化组织作为对比材料.分离出mRNA,经反转录后,通过两轮杂交、两次PCR和T/A克隆构建了两种组织间差异表达基因的cDNA削减文库.结果挑取70个克隆进行酶切和PCR鉴定,显示65个克隆有250～2000 bp插入片段.结论用SSH和T/A克隆技术成功构建了正常肝组织与肝硬化组织差异表达基因的削减cDNA文库.该文库的建立为进一步筛选、鉴定出肝癌发生过程中的相关调控基因奠定了基础,也有助于阐明肝硬化在肝癌发生过程中所起的作用.     

人脑胶质瘤恶性进展相关基因表达谱中葡萄糖代谢相关基因的分析

目的　研究胶质瘤糖代谢增强时哪些基因从中发生显著变化。方法　根据已经建立的胶质瘤恶性进展相关基因表达谱 ,用生物信息学分析方法和 Gene Bank检索的资料分析其中葡萄糖代谢相关基因的变化。结果　在胶质瘤恶性进展中 ,与葡萄糖代谢相关的差异表达基因有 HK1、PFK、Py K、Tra、citratc synthase、isocitrate dehy-drogenase、L DH-A、L DH-B、Glut5、L-xylulose reductase共 10条。结论　上述的 10条基因涉及到多个代谢途径 ,可为进一步研究胶质瘤细胞葡萄糖代谢的分子机制提供线索 ,其中在磷酸戊糖途径中起关键作用的 Tra基因可以作为治疗靶点作深入研究     

分子细胞遗传学技术进展及其在肿瘤临床中的应用

本文综述了分子细胞遗传学研究枝术的新进展,分析其在检查肿瘤细胞染色体异常、定位肿瘤相关基因、辅助临床诊断和判断预后等方面的应用     

输血传播病毒在不同人群中的感染状况及致病性分析

目的探讨TTV在不同人群中的感染状况及其致病性。方法对454例人员,采用微板核酸杂交ELISA法检测TTV;血清酶测定ALT、AST和TBILI。结果454例标本中TTV阳性检出率为5.95%(27/454)。其中在肝病组检出率为3.92%(6/153),分别为肝硬化7.69%(1/13),肝癌0%(0/16),重症慢性乙肝0%(0/22),急性黄疸型乙肝11.11%(1/9),未分型急性黄疸型肝炎0%(0/2),乙肝病毒携带者4.40%(4/91)。在非肝病组检出率为6.89%(21/301),分别为新生儿高胆红素血症0%(0/25),恶性肿瘤9.76%(4/41),献血员11.0%(11/100),体检人员4.44%(6/135)。献血员和体检人员与各种疾病患者的感染率无明显差异(P>0.05);TTV感染者与未感染者的肝功能状况无明显差异(P>0.05);在肝炎患者中,感染TTV者和未感染TTV者的肝功能状况无明显差异(P>0.05)。结论在一般人群和献血员中TTV感染呈“无症状”的“携带状态”,在多种疾病患者中TTV感染无明显加重病情的作用。     

抑制性消减杂交技术检测反式二羟环氧苯并芘转化细胞与正常细胞基因表达差异

目的　筛选 7,8 二羟 9,10 环氧苯并芘 (BPDE)转化细胞与正常细胞的基因表达差异。方法　以BPDE转化支气管上皮细胞 (16HBE)细胞为检测子 (tester) ,正常 16HBE细胞为驱动子 (driver) ,应用抑制性消减杂交方法构建cDNA消减文库 ,经 2次消减杂交和 2次PCR后 ,将巢式PCR产物插入TA载体克隆 ,随机挑选克隆进行鉴定和测序 ,并用斑点杂交法验证其同源性 ,将所得序列进行GenBank的BLAST分析。结果　发现了 7个在BPDE转化细胞中高表达的基因 ,为翻译延长因子 1α1、线粒体基因、溶解物载体家族 2 5、EphA2、酪氨酸 3 加单氧酶 色氨酸 - 5 -加单氧酶活化蛋白、乳酸脱氢酶A、TRIM2 8等 ,尚有一条在GenBank的已知基因中找不到对应序列 ,在EST序列中找到全长对应序列。结论　发现的高表达基因可能在BPDE的致癌机制中起作用 ,另外 ,可能有未知基因与BPDE的恶性转化作用有关。     

聚合酶链反应结合地高辛标记探针诊断儿童单纯疱疹病毒感染

目的　评价聚合酶链反应 (PCR )结合地高辛分子杂交技术在单纯疱疹病毒 (HSV) DNA检测中的临床意义。方法　应用该方法检测 3 6例HSV感染患儿血白细胞和 3例重症病毒性脑炎患儿脑脊液中HSV DNA。结果　HSV DNA检测阳性率 61.54% (2 4/ 3 9) ,其中HSV Ⅰ型阳性率占 75% (18/ 2 4) ,HSV Ⅱ型占16.66% (4/ 2 4) ,Ⅰ Ⅱ型混合型占 8.3 3 % (2 / 2 4)。结论　HSV病原体的PCR检测结合地高辛分子杂交技术对早期诊断儿童HSV感染及提高HSV感染患儿的疗效具有重要意义     

湖南地区β珠蛋白生成障碍性贫血90例基因分析

目的　研究湖南地区 β珠蛋白生成障碍性贫血基因突变频率及类型。 方法　采用反向点杂交法(RDB)对湖南地区 90例 β珠蛋白生成障碍性贫血患儿进行基因检测。 结果　 90例 β珠蛋白生成障碍性贫血患儿中 85例检出基因突变 ,其中 12例 3种β珠蛋白生成障碍性贫血基因纯合子 ;31例 8种 β珠蛋白生成障碍性贫血基因双重突变子 ;4 2例突变杂合子。包括 4种常见类型和 3种罕见类型 ,即IVS Ⅱ 6 5 4 (C→T)、CD4 1 4 2 ( CTTT)、CD17(A→T)、TATAbox 2 8(A→G)、CD14 15 ( G)、TATAbox 2 9(A→G)及CD2 6 (G→A)。结论　湖南地区是 β珠蛋白生成障碍性贫血多发区之一 ,既有常见类型基因突变又有罕见类型基因突变     

反向点杂交快速检测流感嗜血杆菌

目的　研究以分子杂交为基础的流感嗜血杆菌 (Hi)的快速检测方法。方法　将Hi探针固定在尼龙膜上 ;用标记有地高辛的细菌通用引物聚合酶链反应 (PCR)扩增不同细菌DNA ,产物分别与点有探针的膜条杂交。结果　 8种细菌均扩增出 4 6 8bp目的带 ,而人白细胞及轮状病毒DNA扩增均阴性。 6株Hi杂交阳性 ,7株其他临床常见菌杂交结果阴性。结论　反向点杂交法简便、快速、准确 ,是检测Hi的一种理想方法。     

广东中山地区脐血β-地中海贫血3052例基因的初步研究

目的初步了解β-地中海贫血在中山地区的发病率及基因突变类型。方法本文采用聚合酶链反应-反向点杂交(PCR-RDB)方法，对2002年11月～2003年10月间的3062例婴儿脐血进行了β-珠蛋白基因的初步分析。结果中山地区β-地中海贫血的发病率为2．33％，共检出7种基因突变类型，按其发生率高低依次为CIM1／42、IVS—nt654、TATA nt-28、CD26、CD17、TATA nt-29和CD71—72。结论中山地区为β-地中海贫血高发区。     

辽宁法库县、广东横琴岛可疑嗜人按蚊与四川嗜人按蚊杂交及唾腺染色体观察

目的　了解中国嗜人按蚊的分布 ,判定辽宁法库县、广东横琴岛可疑嗜人按蚊和四川嗜人按蚊是否存在生殖隔离 ,有无种间差异 ,是否为同一蚊种。方法　采用遗传学方法进行人工杂交 /自然交配 ,并对杂交后的子代进行多腺染色体制片观察。结果　辽宁法库县、广东横琴岛可疑嗜人按蚊与四川嗜人按蚊亲代杂交、回交、子代自交均能产生正常子代 ,并能大量繁殖。子代唾腺染色体制片观察未发现不联会现象。结论　辽宁法库县、广东横琴岛可疑嗜人按蚊与四川嗜人按蚊不存在生殖隔离 ,也无种间差异 ,系不同地域分布的同一种嗜人按蚊。