低温等离子体促进人牙龈上皮细胞在钛表面的黏附

目的研究低温等离子体（NTAP）处理人牙龈上皮细胞（HGECs）后的生物学行为。方法将HGECs传代培养，待生长活性最佳的第3~5代细胞，消化重悬后经NTAP处理适当时间（0，10，20， 30，60 s）后，接种在钛盘表面，加入口腔角质细胞培养基（OKM），1%双抗、5%CO₂和37 °C孵箱条件下培养不同时间（4，12，24，48 h）贴壁生长，每组中各培养时间设置5个复孔。使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）评估各组黏附细胞的数量；扫描电子显微镜（SEM）观察各组细胞在钛片表面的形态；实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测各组细胞层粘连蛋白α3（Laminin α3）、整合素蛋白β4（Integrin β4）和网蛋白（Plectin）黏附相关基因的表达情况以及Western blot观察各组细胞黏附相关蛋白表达的变化情况。结果在0~20 s内，随着NTAP作用时间的增加，细胞的黏附数量增加；但在20~60 s内，随着作用时间的增加，细胞的黏附数量逐渐减少：证明NTAP处理时间为20 s时最有利于HGECs在钛表面的黏附。CCK-8显示：在设定的培养时间下（20 s），随着培养时间延长，对照组和NTAP组细胞在钛表面的黏附数量增加。与对照组相比，在各培养时间点NTAP组细胞在钛表面的黏附数量更多（P<0.05）。SEM显示：NTAP组细胞在钛表面更明显地表现出不规则的多边形、突起与伪足较多及更大的细胞扩散面积。qRT-PCR显示：NTAP组细胞在钛表面的Lamininα3、Integrin β4和 Plectin黏附相关基因表达都高于对照组（P<0.05）。Western blot也证实：NTAP组细胞在钛表面上Laminin α3、Integrin β4和Plectin黏附相关蛋白的表达均高于对照组。结论HGECs受NTAP处理后，结果表明20 s的作用时间能最大程度增加细胞在钛表面的黏附数量和改变黏附形态，同时能够显著上调Laminin α3、Integrin β4和Plectin黏附相关基因和蛋白的表达，进而能促进HGECs对钛表面的生物封闭作用。     

术前外周血炎症指标对舌鳞状细胞癌预后预测价值的分析

目的探讨术前外周血炎症指标对舌鳞状细胞癌（TSCC）患者预后的预测价值。方法回顾性分析2010年1月至2017年12月于郑州大学第一附属医院因TSCC行根治性切除术的210例患者的临床病理资料，应用临床诊断性能曲线确定血小板/淋巴细胞比值（PLR）、中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）的最佳截断值。生存单因素分析应用Kaplan-Meier法和Log-rank检验，多因素分析应用Cox比例风险回归模型，基于Cox回归模型筛选的独立危险因素构建Nomogram模型。结果单因素分析显示，PLR、NLR、肿瘤分化程度、T分期、N分期和TNM分期为影响TSCC预后的危险因素（P<0.05）；多因素分析显示，PLR、N分期和TNM分期为独立危险因素（P<0.05）。Nomogram模型的C指数为0.701（95%CI：0.651~0.752），校准曲线表明Nomogram模型预测无进展生存率与实际无进展生存率具有较好的一致性。结论术前外周血炎症指标对TSCC术后患者的预后可能有一定的预测作用。     

一种序列3D打印导板引导的瓷贴面分区粘接技术

获得足够的釉质粘接是保证瓷贴面固位、边缘封闭及临床使用效果的共识性建议，牙体预备后，基牙的粘接面就确定下来。由于唇面釉质厚薄不均，常常存在或多或少的牙本质暴露，而分区识别粘接面上的釉质或牙本质（简称釉本）并采用“选择性酸蚀”使其获得最大粘接力的处理方式，将有助于提高瓷贴面的整体粘接强度。不同于以往“选择性酸蚀”裸眼识别釉本分区的不确定性和经验依赖，本技术方案通过第一个目标修复体空间定深导板控制预备深度，获得准确的釉本分区；并将其映射到第二个分区粘接导板里，依靠第二个导板分别对粘接面上的釉本进行不同处理，实现了精准的、可预期的瓷贴面的分区粘接，获得了更好的粘接效果。     

一次性皮肤拉拢装置治疗难闭性皮肤软组织缺损的疗效分析

目的观察一次性皮肤拉拢装置治疗难闭性皮肤软组织缺损的疗效。方法回顾分析2021年7月—2022年2月符合选择标准的13例采用一次性皮肤拉拢装置治疗的难闭性皮肤软组织缺损患者临床资料。其中男9例，女4例；年龄15～71岁，平均39.8岁。致伤原因：摔伤5例，交通事故伤5例，高处坠落伤3例。皮肤软组织缺损原因：开放骨折4例，伤口感染4例，骨髓炎3例，脱套伤1例，植皮坏死1例。损伤部位：小腿8例，跟骨3例，骨盆1例，足底1例。皮肤软组织缺损范围为5.0 cm×2.0 cm～10.5 cm×6.5 cm。记录伤口情况（包括伤口闭合和伤口愈合）及有无并发症等情况。结果13例患者均获随访，随访时间32～225 d，中位时间164 d。伤口闭合时间5～14 d，平均8.8 d；伤口闭合速度0.7～13.7 cm²/d，平均3.6 cm²/d。所有伤口均甲级愈合，均未发生皮缘损伤、伤口坏死、感染、裂开、水肿等并发症，患者均未诉疼痛不适等，随访时未发现明显瘢痕形成等情况。伤口愈合时间17～28 d，平均21.7 d。其中1例使用该装置后因肺癌病情变化转科，术后17 d随访时伤口未经缝合已直接愈合。 结论一次性皮肤拉拢装置治疗难闭性皮肤软组织缺损疗效确切，伤口闭合时间短，并发症少，操作简便。     

基于二代测序技术分析骨髓纤维化患者基因突变对芦可替尼疗效的影响

目的评估基因突变对芦可替尼治疗骨髓纤维化（MF）疗效的影响。方法回顾性分析2017年7月至2020年12月服用芦可替尼治疗并应用二代测序技术检测127个血液肿瘤相关基因突变的56例MF患者的临床资料，分析突变基因与芦可替尼疗效的关系。结果①56例患者中，原发性骨髓纤维化（PMF）36例、真性红细胞增多症（PV）后骨髓纤维化（PPV-MF）9例，原发性血小板增多症（ET）后骨髓纤维化（PET-MF）11例。②50例（89.29％）携带驱动基因突变，22例（39.29％）携带基因突变≥3个，29例（51.79％）检出高危基因突变（HMR）。③对于基因突变≥3个的MF患者，芦可替尼仍有较好的改善体质性症状及缩小脾脏的效果（P＝0.001，P<0.001）。与基因突变<3个组比较，基因突变≥3个组停药前持续用药时间（TTF）及无进展生存期（PFS）明显缩短［356（55～1061）d对471.5（50～1270）d，z＝−2.701，P＝0.007；444（91～4109）d对1248.5（91～7061）d，z＝−2.030，P＝0.042］。④与未检出HMR的患者比较，≥2个HMR患者的芦可替尼缩脾效果较差（t＝10.471，P＝0.034），TTF及PFS明显缩短（P<0.001，P＝0.001）。⑤在携带ASXL1、EZH2、SRSF2等附加基因突变患者中，芦可替尼缩脾、症状改善及稳定骨髓纤维化作用较差，携带ASXL1、EZH2突变患者TTF［ASXL1：360（55～1270）d对440（55～1268）d，z＝−3.115，P＝0.002；EZH2：327（55～975）d对404（50～1270）d，z＝−3.219，P＝0.001］及PFS较未携带者明显缩短（ASXL1：457（50～1331）d对574（55～1437）d，z＝−3.219，P＝0.001；EZH2：428（55～1331）d对505（55～1437）d，z＝−2.576，P＝0.008］。结论MF患者携带的基因突变类型、数量以及HMR对芦可替尼疗效有一定影响。     

靶向CD52嵌合抗原受体T细胞的制备及其抗白血病作用研究

目的构建一种靶向CD52的嵌合抗原受体T细胞（CD52 CAR-T），探索其对CD52⁺白血病的治疗效果。方法应用分子克隆技术构建以CD52为抗原结合区的CD52 scFv、4-1BB为共刺激分子的二代CAR-T细胞。慢病毒载体包装后感染T细胞，制备CD52 CAR-T细胞，通过流式细胞术检测CD52 CAR-T细胞CD4、CD8细胞亚群及其分化状态。通过体外杀伤实验、脱颗粒实验及细胞因子的释放等功能实验，观察CD52 CAR-T细胞对CD52⁺白血病细胞的特异性细胞毒作用。结果①成功构建了pCDH-CD52 scFv-CD8α-4-1BB-CD3ζ-GFP表达载体，感染人T细胞，获得靶向CD52的CAR-T细胞。②感染CD52 CAR表达载体的第6天，T细胞中表达CD52的细胞可被清除［CD52 CAR-T组CD52⁺ T细胞为（4.48±4.99）％，Vector-T组为（56.58±19.8）％，P＝0.011］。③CD52 CAR-T的自我杀伤不会影响T细胞的增殖，培养后期CD52 CAR-T组的增殖速度高于Vector-T组。④T细胞表型检测发现CD52 CAR可以促进CAR-T细胞向中心记忆T细胞及效应记忆T细胞分化，减少CAR-T细胞向终末效应细胞分化。⑤CD52 CAR-T细胞与HuT78-19t及MOLT4-19t靶细胞以效靶比1∶1共培养24 h，HuT78-19t细胞可被清除，而对MOLT4-19t细胞无明显杀伤作用［（2.66±1.60）％对（56.66％±5.74）％，P<0.001］。⑥脱颗粒实验显示，HuT78-19t细胞对CD52 CAR-T细胞的激活作用显著高于MOLT4-19t细胞［（57.34±11.25）％对（13.06±4.23）％，P<0.001］。⑦CD52 CAR-T与HuT78-19t细胞共培养48 h上清中细胞因子分泌水平［IFN-γ（3706±226）pg/ml、TNF-α（1732±560）pg/ml］远高于MOLT4-19t细胞组［IFN-γ（1577±846）pg/ml、TNF-α（74±12）pg/ml］（P值均<0.01）。结论该研究成功制备了具有抗白血病作用的CD52 CAR-T细胞，为进一步的靶向CD52的免疫治疗奠定了基础。     

790例初诊急性早幼粒细胞白血病患者临床及遗传学特征的单中心回顾性研究

目的探讨初诊急性早幼粒细胞白血病（APL）患者的临床及遗传学特征。方法纳入2004年2月至2020年6月期间于中国医学科学院血液病医院就诊的15岁及以上初诊APL患者，对其临床及实验室特征进行回顾性分析。结果共收集790例APL患者，男女比例为1.22∶1，中位年龄41（15～76）岁，以20～59岁为主。中低危组患者632例（80％），高危组患者158例（20％）。4.8％的初诊患者合并银屑病。初诊患者的WBC、PLT、HGB水平分别为2.3（0.1～176.1）×10⁹/L、29.5（2.0～1220.8）×10⁹/L、89（15～169）g/L。PML-RARα亚型以 L型最常见，占58％。初诊患者很少出现APTT延长（10.3％）和肌酐>14 mg/L（1％）。对715例患者进行核型分析，155例（21.7％）为t（15;17）伴附加染色体异常，其中以+8（5.5％）最常见。复杂核型见于64例（9.0％）患者。对178例患者进行二代测序检测，共检出113个突变基因，发生率>1％的突变基因有75个，以FLT3（44.9％）最常见；FLT3-ITD见于20.8％的患者。结论本中心APL患者以中青年为主，男女比例未见明显差异。危险分层以中低危患者为主。少部分患者伴附加的染色体异常，以+8最常见。PML-RARα 亚型以L型最常见。APL突变谱以FLT3最常见。     

IA和HAD方案诱导治疗成人初诊急性髓系白血病的疗效比较

目的比较IA和HAD方案诱导治疗成人初诊急性髓系白血病（AML）患者的疗效。方法分析2014年5月至2019年11月在中国医学科学院血液病医院接受IA或HAD方案诱导化疗的199例成人初诊AML患者的完全缓解（CR）率、1个疗程微小残留病（MRD）转阴率、总生存（OS）和无复发生存（RFS）情况。评估年龄、初诊WBC、NPM1突变、FLT3-ITD突变、2017ELN危险度分层、第1次完全缓解（CR₁）期造血干细胞移植（HSCT）和巩固化疗时使用大剂量阿糖胞苷（HDAC）对于不同诱导化疗组预后的影响。结果199例患者中，男104例，女95例，中位年龄37（15～61）岁。90例患者接受IA诱导方案，109例接受HAD诱导方案。1个疗程诱导化疗后IA和HAD方案组的CR率分别为71.1％和63.3％（P＝0.245），流式细胞术MRD转阴率分别为53.3％和48.6％（P＝0.509）；3例患者诱导化疗1个疗程后60 d内死亡，IA组1例，HAD组2例；两组2年OS率分别为61.5％和62.1％（P＝0.835），2年RFS率分别为51.6％和57.8％（P＝0.291），差异均无统计学意义。多因素分析显示ELN危险度分层是两种诱导方案组的独立预后因素；CR₁期HSCT是IA组患者OS和RFS的独立预后因素，对于HAD组患者，CR₁期HSCT是RFS的独立预后因素，但不是OS的独立预后因素；年龄、高白细胞、NPM1突变和FLT3-ITD突变均无独立预后意义。结论IA与HAD方案疗效相同，均是AML有效的治疗方案。     

不同方法和标本检测华氏巨球蛋白血症患者MYD88突变的初步探索

目的探索如何提高华氏巨球蛋白血症（WM）患者MYD88突变检测的阳性率和准确率。方法回顾性分析2017年6月至2021年6月上海交通大学医学院附属瑞金医院66例初诊WM患者MYD88突变检测结果，分析不同方法和标本检测MYD88突变的阳性率和准确率。结果66例WM患者中51例MYD88突变阳性，整体阳性率77％。根据检测方法分类：二代测序（NGS）和等位基因特异性PCR（AS-PCR）检测突变阳性率显著高于一代测序Sanger法（84％对71％对46％，P<0.05）。根据标本取材部位分类：淋巴结和骨髓标本检测突变阳性率显著高于外周血标本（79％对84％对52％，P<0.05）。NGS检测淋巴结、骨髓和外周血MYD88突变阳性率分别为86％、90％和67％。AS-PCR检测淋巴结、骨髓和外周血MYD88突变阳性率分别为78％、81％和53％。39例WM患者进行≥2次MYD88突变检测，以每例患者最终突变检测结果作为标准，判断不同方法和标本的准确率。淋巴结（18例）和骨髓（13例）NGS检测准确率显著高于外周血（4例）标本（100％对100％对75％，P<0.05）。淋巴结（15例）、骨髓（11例）和外周血（16例）AS-PCR检测准确率的差异无统计学意义（93％对91％对88％，P>0.05）。结论在检测WM患者MYD88突变情况方面，NGS或AS-PCR法优于Sanger法，淋巴结和骨髓标本优于外周血标本。     

新型冠状病毒肺炎疫情对极低出生体重儿亲母母乳喂养的影响

目的分析新型冠状病毒肺炎疫情防控期间住院的极低出生体重儿（very low birth weight infants，VLBWI）亲母母乳喂养率和喂养量的特征变化。方法回顾性分析2019年1月至2020年12月出生并收治于南京市妇幼保健院新生儿重症监护病房的胎龄<32周VLBWI的临床资料，比较并分析疫情期间VLBWI亲母母乳喂养率和喂养量的变化。结果共纳入301名VLBWI，根据疫情暴发时间分为疫情前组（n=205）和疫情后组（n=96），疫情后组VLBWI在生后0~28 d及住院期间亲母母乳喂养率均低于疫情前组（P<0.05）。疫情后组VLBWI在生后0~7 d、0~14 d、0~28 d内的亲母母乳喂养量均低于疫情前组（P<0.05）；疫情后组VLBWI中-重度支气管肺发育不良和喂养不耐受的发生率高于疫情前组（P<0.05）。结论新型冠状病毒肺炎疫情对VLBWI的亲母母乳喂养有明显的影响，VLBWI生后28 d内的亲母母乳喂养率和喂养量明显下降，在整个住院期间亲母母乳喂养率也有明显下降。