环氧合酶-2、核因子(-K)_B在胃癌、癌前病变中的表达及尼美舒利逆转其表达的实验研究

目的探讨环氧合酶(COX)-2、核因子(NF)-kB 在胃癌及异型增生中的表达,并研究尼美舒利对人胃癌 SGC-7901细胞增殖及 COX-2、NF-kB 表达的影响。方法采用免疫组化 Power vi-sionTM 两步法对84例胃癌和54例胃异型增生组织中 COX-2、NF-kB 的表达进行检测;在体外实验中对人胃癌 SGC-7901细胞采用细胞培养,MTT 法检测不同浓度尼美舒利对人胃癌 SGC-7901细胞增殖的抑制作用,免疫组化、Western blot 方法检测药物对 COX-2、NF-kB 表达的影响。结果 COX-2、NF-kB 在胃癌中的阳性表达率分别为66.67%、59.52%,均高于异型增生(P<0.05),COX-2表达与肿瘤的大小、淋巴转移呈正相关(P<0.05),并与 NF-kB 的表达相关(P<0.05),COX-2与肿瘤浸润深度正相关(P<0.05)。体外实验中结果显示尼美舒利可以抑制人胃癌 SGC-7901细胞生长并具有浓度、时间依赖性;与阴性对照组相比,药物作用48 h 后尼美舒利100、200μmol/L 组 COX-2、NF-kB 蛋白表达明显减弱并具有剂量依赖性(P<0.05),COX-2、NF-kB 之间正相关(P<0.05)。结论 COX-2、NF-kB与胃癌的发生转移相关,并且 NF-kB 蛋白作为上游调控因子调节 COX-2的表达。尼美舒利可以抑制人胃癌 SGC-7901细胞增殖,抑制 COX-2、NF-kB 的表达在其抑制肿瘤机制中可能具有一定作用。     

2-(3羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人胃癌细胞系(SGC-7901)的诱导凋亡作用

目的 观察2-(3-羧基-t-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COADG)体外诱导人胃癌细胞(SGC-7901)凋亡的作用，探讨其可能作用机理。方法 采用MTT法，筛选药物作用最佳浓度。用流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳分析诱导凋亡前后的细胞DNA含量分析诱导凋亡前后的细胞DNA含量，透射电镜观察凋亡细胞的超微结构。结果 2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖能明显抑制胃癌细胞的增长，MTT法显示抑制程度具有时间和剂量效应关系，统计组问比较差异有显著性；流式细胞仪分析可见亚二倍体(Sub-G1)凋亡峰；电镜观察到凋亡小体。结论 2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖有诱导人胃癌细胞(SGC-7901)凋亡的作用。     

2'-O-meRNA对人胃癌细胞的抑制作用及对5-FU和BCNU疗效的影响

目的探讨2'-O-meRNA通过抑制端粒酶来杀伤胃癌细胞系SGC-7901的作用及对化疗药5-FU和BCNU疗效的影响。方法培养人胃癌细胞系SGC-7901,分为5-FU组、BCNU组、2'-O-meR- NA组、反义对照组、化疗药与反义抑制剂合用组,观察用药后该细胞系存活情况及端粒酶活性。结果5- FU、BCNU、2'-O-meRNA可有效抑制SGC-7901细胞的活性(P<0.05),BCNU、2'-O-meRNA可有效抑制细胞端粒酶活性,1μM 2'-O-meRNA可加强6.25 μg/ml BCNU的疗效(P<0.01),但是不能加强12.5μg/ml 5-FU的作用(P>0.05)。结论2'-O-meRNA抑制胃癌细胞系SGC-7901的生长。1 μM 2'-O- meRNA与6.25 μg/ml BCNU合用时有协同作用,2'-O-meRNA与5-FU合用时无协同作用。     

Gastric cancer cell lines induced by trichostatin A

AIM： To explore the effect of trichostatin A （TSA） on apoptosis and acetylated histone H3 levels in gastric cancer cell lines BGC-823 and SGC-7901. METHODS： The effect of TSA on growth inhibition and apoptosis was examined by MTT, fluorescence microscopy and PI single-labeled flow cytometry. The acetylated histone H3 level was detected by Western blot. RESULTS： TSA induced apoptosis in gastric cancer cell lines BGC-823 and SGC-7901 was in a dose and time-dependent manner. Apoptotic cells varied significantly between TSA treated groups （37.5 ng/mL 72 h for BGC-823 cell line and 75 ng/mL 72 h for SGC-7901 cell line） and control group （0.85 ± 0.14 vs 1.14 ± 0.07, P = 0.02; 0.94 ± 0.07 vs 1.15 ± 0.06, P = 0.02）. Morphologic changes of apoptosis, including nuclear chromatin condensation and fluorescence strength, were observed under fluorescence microscopy. TSA treatment in BGC-823 and SGC-7901 cell lines obviously induced cell apoptosis, which was demonstrated by the increased percentage of sub-G1 phase cells, the reduction of Gl-phase cells and the increase of apoptosis rates in flow cytometric analysis. The result of Western blot showed that the expression of acetylated histone H3 increased in BGC-823 and SGC-7901 TSA treatment groups as compared with the control group.CONCLUSION： TSA can induce cell apoptosis in BGC-823 and SGC-7901 cell lines. The expression of acetylated histone H3 might be correlated with apoptosis.     

幽门螺杆菌依赖丝裂原活化蛋白激酶信号通路诱导SGC7901细胞表达分泌白细胞介素-8

背景:已知前炎症细胞因子白细胞介素(IL)鄄8在慢性活动性胃炎、消化性溃疡等幽门螺杆菌(H.pylori)感染相关疾病的发生、发展中起重要作用,但H.pylori诱导胃上皮细胞表达、分泌IL鄄8的分子机制尚不明确。目的:通过体外实验了解H.pylori对人胃癌细胞株SGC7901表达、分泌IL鄄8的影响,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在H.pylori诱导SGC7901细胞IL鄄8mRNA表达和IL鄄8蛋白分泌中的作用。方法:SGC7901细胞经p38MAPK特异性抑制剂SB203580预作用2h,再加入H.pylori标准菌株CCUG17874共培养。采用逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)检测IL鄄8mRNA的表达,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL鄄8蛋白的分泌,观察SB203580对H.pylori诱导SGC7901细胞表达、分泌IL鄄8的影响。结果:H.pylori能诱导SGC7901细胞表达、分泌IL鄄8。SB203580能以剂量依赖的方式抑制H.pylori诱导的SGC7901细胞IL鄄8蛋白分泌,经终浓度为0.3、1、3和10μmol/L的SB203580预作用2h,SGC7901细胞的IL鄄8蛋白分泌与未经SB203580预作用组相比分别减少了26%、51%、64%和73%(P<0.05);SB203580也能使H.pylori诱导的IL鄄8mRNA表达显著减弱。结论:H.pylori能诱导胃上皮细胞表达、分泌IL鄄8,该作用在一定程度上依赖于MAPK信号通路。     

AQP5基因重组慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建人水通道蛋白5（AQP5）基因慢病毒载体。方法体外扩增出AQP5基因全长cDNA,将慢病毒载体pWPTS-GFP与扩增出的AQP5用MluⅠ和SalⅠ进行双酶切,将AQP5全长序列克隆入pWPTS-GFP,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,对长出的克隆用菌落PCR鉴定,再对阳性克隆进行测序和比对分析。重组病毒质粒与另外两种辅助包装原件载体质粒通过CaCl2共转染293T细胞（人胚肾细胞）,培养48 h后收集细胞培养上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度,并检测慢病毒载体在工具细胞SGC7901细胞（胃癌细胞）的转染效率。Western blot检测SGC7901细胞中AQP5蛋白。结果测序结果和Western blot检测均证明AQP5重组慢病毒载体构建正确,并能在细胞中正确表达。与辅助质粒共转包装细胞获得慢病毒颗粒,并成功感染SGC7901细胞。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为1×108 TU/ml。结论成功构建了稳定表达AQP5基因的重组慢病毒载体。     

顺铂与热疗联合对胃癌细胞系体外增殖抑制作用的研究

目的研究顺铂与热疗联合对2株胃癌细胞系SGC-7 901和BGC-823细胞体外增殖的影响。方法使用MTT法测定细胞增殖,确定顺铂的工作浓度,并以该浓度进行化疗或与热疗联合,计算24 h和48 h时的细胞生存率,根据Veleriote法判断热化疗联合24 h或48 h的作用效果;24 h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的凋亡情况。结果以24 h时IC40~IC50的药物浓度作为试验的工作浓度,确定CDDP对SGC-7 901和BGC-823细胞的工作浓度分别为5μg/mL和1μg/mL。单纯的43℃热疗60 min在24 h时对2个细胞系均有抑制作用(P<0.05),在48 h时没有显著抑制作用。CDDP 5μg/mL化疗或与热疗联合在24 h和48 h时对SGC-7 901细胞均有显著的抑制作用(P<0.01),CDDP 5μg/mL与热疗联合作用24 h时呈明显的协同作用,在48 h时呈次加作用。CDDP 1μg/mL化疗或与热疗联合在24 h和48 h时均对BGC-823细胞都有显著的抑制作用(P<0.01),CDDP 1μg/mL与热疗联合作用24 h和48 h均呈明显的协同作用;24 h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的凋亡情况发现,CDDP化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高(P<0.01)。结论CDDP 5μg/mL与43℃热疗60 min联合在24 h时对SGC-7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用,在48 h时呈次加作用;CDDP 1μg/mL与43℃热疗60 min联合对BGC-823细胞的增殖抑制在24 h和48 h时均呈明显的协同作用,这可能与细胞凋亡的增多有关。     

小分子干扰RNA逆转胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药

目的研究小分子干扰RNA（siRNA）逆转胃癌多药耐药细胞亚系SGC7901／VCR mdr1介导的多药耐药效应。方法根据mdr1cDNA已知序列,设计并体外转录2条含21个核苷酸的siRNA（mdr1si2631和mdr1si3071）,转染SGC7901／VCR细胞,用RT-PCR检测mdr1基因mRNA的表达,免疫组织化学检测P-gp的表达,流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积,MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果siRNA转染SGC7901／VCR细胞48h后,mdr1基因mRNA和P-gp的表达水平下降,细胞内阿霉素积累量增加,对阿霉素敏感性的相对逆转率各达79．59％及59．98％。结论siRNA可逆转SGC7901／VCR细胞mdr1介导的多药耐药。     

顺铂诱导人胃癌细胞SGC7901和人肝癌细胞HepG2凋亡的细胞形态学变化的比较

目的观察顺铂诱导人胃腺癌细胞SGC7901和人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的细胞形态学的异同并探讨其意义。方法用倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞经顺铂处理后的形态学改变。采用流式细胞术研究CDDP对两株肿瘤细胞诱导凋亡中DNA含量的影响。结果经顺铂处理后,两株肿瘤细胞均表现出一些共同的凋亡形态学特征,如细胞及细胞核皱缩,微绒毛消失,细胞膜皱缩但完整,细胞内荧光强度增强。细胞超微结构变化如线粒体肿胀,胞质空泡化。但两者在细胞核形态方面表现出较大的差异;SGC7901表现为核染色质呈团块状或环状,聚集于核膜下;而HepG2主要表现为核碎裂、核膜崩解,核染色质呈梅花状散落在细胞中和一些细胞器通过细胞出芽裂解成由细胞膜包绕的凋亡小体并被周围细胞吞噬。在两者的流式细胞DNA的直方图上均检测到了亚二倍体峰。结论顺铂可诱导SGC7901和HepG2产生不同形态的细胞凋亡,其中SGC7901主要表现为核固缩,HepG2表现为核碎裂。这种差异具有重要的生理意义。     

Apoptosis of human gastric cancer SGC-7901 cells induced by mitomycin combined with sulindac

AIM: To investigate the effects of mitomycin (MMC) combined with sulindac on cell viability, apoptotic induction and expression of apoptosis-related gene Bcl-2 and cyclooxygenase-2 (COX-2) in gastric cancer SGC-7901 cells. METHODS: Human gastric cancer SGC-7901 cells were divided into three treatment groups,namely sulindac treatment group, MMC treatment group and combined sulindac with MMC treatment group. After being treated with drugs, cell viability was examined by MTT assay. Flow cytometry was used to evaluate the cell cycle distribution and apoptotic rates. Morphology of the cells was observed under light microscope and interactive laser microscope. Expression of COX-2 and Bcl-2 was determined by immunocytochemical method. RESULTS: After exposure for 12 h to three kinds of drugs, gastric cancer SGC-7901 cells presented some morphological features of apoptosis, including cell shrinkage, nuclear condensation, DNA fragmentation and formation of apoptotic bodies. Growth inhibition was more obvious in combined sulindac with MMC treatment group and sulindac treatment group than in MMC treatment group. The apoptotic rates in co-treated cells and MMC-treated cells 24 h after treatment were 12.0% and 7.2%, respectively. After exposure for 24 h to MMC, the expression of COX-2 and Bcl-2 protein was up-regulated, COX-2 levels were down-regulated but Bcl-2 gene expression was not changed significantly in combined treatment group. CONCLUSION: MMC-induced apoptosis is reduced by up-regulating the expression of COX-2 and Bcl-2 genes. MMC combined with sulindac can suppress the growth of gastric cancer cells through induction of apoptosis mediated by down-regulation of apoptosis-related Bcl-2 and COX-2 gene.