Zileuton对胃癌SGC-7901细胞侵袭转移的影响

目的观察5-脂氧合酶(5-1ipoxygenase,5-LOX)抑制剂Zileuton对胃癌SGC-7901细胞异质黏附、侵袭、迁移、诱导新生血管形成能力的影响,并初步探讨其可能机制。方法用Zileuton处理SGC-7901细胞,MTT法检测其黏附能力的变化;Transwell Chamber观察其侵袭及迁移能力的改变;观察SGC-7901细胞条件培养基诱导内皮细胞形成血管管腔能力;RT-PCR和Western blot检测SGC-7901细胞中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和尿激酶纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)的表达变化。结果经6.30×10-5mol.L-1的Zileuton处理后,SGC-7901细胞游走与侵袭穿膜细胞数、诱导内皮细胞形成血管管腔数与管腔长度均低于对照组(P<0.01);黏贴率、OPN和uPA表达均较对照组明显降低(P<0.05)。结论 5-LOX抑制剂Zileuton能有效抑制SGC-7901细胞的侵袭转移,其作用机制可能与抑制OPN和uPA的表达有关。     

丹参酮Ⅰ对人胃腺癌细胞SGC-7901 EIF2a和EIF3a基因表达的调控作用

目的分析丹参酮Ⅰ对人胃腺癌细胞SGC-7901真核翻译起始因子2a(EIF2a)、真核翻译起始因子3a(EIF3a)基因表达的调控作用。方法体外培养SGC-7901人胃腺癌细胞株,经丹参酮Ⅰ干预后,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法测定EIF2a和EIF3a mRNA水平;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定丹参酮Ⅰ对SGC-7901细胞株增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率。结果不同质量浓度丹参酮Ⅰ干预后SGC-7901细胞株EIF2a mRNA和EIF3a mRNA降低,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);EIF2a mRNA与EIF3a mRNA比较,丹参酮Ⅰ1μg/mL>5μg/mL>10μg/mL(P<0.05)。丹参酮Ⅰ1,5,10μg/mL组细胞培养不同时间A值低于空白对照组(P<0.05),抑制率高于空白对照组(P<0.05);不同时间A值比较,丹参酮Ⅰ1μg/mL>5μg/mL>10μg/mL;不同时间抑制率比较,丹参酮Ⅰ1μg/mL<5μg/mL<10μg/mL(P<0.05)。丹参酮Ⅰ不同质量浓度组G1期细胞比例高于空白对照组(P<0.05),S期细胞比例低于空白对照组(P<0.05);G1期细胞比例丹参酮Ⅰ不同质量浓度组对比,丹参酮Ⅰ1μg/mL<5μg/mL<10μg/mL;S期细胞比例丹参酮Ⅰ不同质量浓度组对比,丹参酮Ⅰ1μg/mL>5μg/mL>10μg/mL(P<0.05),丹参酮Ⅰ1,5,10μg/mL组细胞凋亡率均高于空白对照组(P<0.05),不同质量浓度组丹参酮Ⅰ细胞凋亡率比较,丹参酮Ⅰ1μg/mL<5μg/mL<10μg/mL(P<0.05)。结论丹参酮Ⅰ可通过下调人胃腺癌细胞SGC-7901 EIF2a和EIF3a基因表达,抑制癌细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。     

赖氨酰氧化酶对胃癌细胞迁徙能力的影响

目的 研究赖氨酰氧化酶(LOX)对胃癌细胞迁徙能力的影响.方法 培养两株胃癌细胞,用Real-Time PCR法检测其LOX的表达量;通过体外Transwell小室迁徙实验比较两株胃癌细胞在不同浓度β-氨基丙腈(BAPN)作用下迁徙能力的变化.结果 两株胃癌细胞中均有LOX的表达,当BAPN浓度是0.2和0.3 mmol/L时,胃癌细胞的体外迁徙能力受到抑制.结论 LOX可能通过增强肿瘤细胞的迁徙能力而促进肿瘤的转移.     

Gab2通过调节EMT促进胃癌的侵袭转移

目的 探讨Gab2在胃癌组织中的表达情况及其对胃癌细胞侵袭转移能力的影响与机制。方法 采用免疫组织化学SP法检测胃癌组织中Gab2、E-cadherin、N-cadherin及MMP-9的表达并分析其与淋巴结转移的关系。应用小RNA干扰技术,转染SGC7901细胞株,RT-PCR法检测瞬时转染后Gab2基因表达情况,体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化,Western blot法检测各蛋白的表达。结果 胃癌组织中Gab2的表达水平与淋巴结转移显著相关（P=0.002）,与E-cadherin的表达负相关（r=-0.693, P=0.000）,而与N-cadherin和MMP-9的表达水平正相关（r=0.407, P=0.021; r=0.335, P=0.017）。小RNA干扰技术降低Gab2蛋白的表达后SGC7901细胞侵袭转移能力降低,同时E-cadherin表达增多,N-cadherin和MMP-9蛋白表达降低。结论 Gab2可能通过调节EMT在胃癌侵袭转移中发挥重要作用。     

三种不同方法检测β-咔啉类生物碱所致的人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的比较分析目前常用的三种检测细胞凋亡方法在不同β-咔啉类生物碱浓度条件下所致人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的运用。方法将生长状态良好的细胞按不同的给药浓度分为A组40μg／ml,B组20μg／ml,C组10μg／ml,D组51xg／ml,E空白对照组,作用24h、48h。分别用MTT法、Hoechest33258细胞核染色法、流式细胞术检测细胞凋亡。结果MTF法结果显示,A组、B组、C组、D组与E组相比较,生长抑制率差异有统计学意义fP〈O．01）;Hoechest33258细胞核染色法显示,E组细胞核浓染、边集、碎裂较少,其他组细胞核均有不同程度的改变,A组、B组、C组、D组与E组相比较,凋亡核百分比差异有统计学意义伙0．05）;流式细胞仪检测结果显示,A组、B组、C组、D组与E组细胞凋亡率相比有统计学差异（P〈0．01）。结论β-咔啉类生物碱能引起人胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

胃癌SGC7901细胞长春新碱耐药性相关miRNA的初步分析

目的 探讨胃癌SGC7901细胞对长春新碱(VCR)化疗药物耐药相关的微小RNA(miRNA),并预测异常表达miRNA的靶基因.方法 体外培养胃癌SGC7901细胞和胃癌VCR耐药细胞SGC7901/VCR;提取总RNA并质检,采用miRNA 8.0微阵列芯片检测分析miRNA表达谱;荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)验证差异表达的miRNA,生物信息学分析软件预测可能调控的靶基因;采用Western blot方法检测靶基因的蛋白表达水平.结果 芯片检测发现,SGC7901和SGC7901/ VCR细胞中63个异常表达的miRNA;其中miR-1267、miR-221、miR-223、miR-200c、miR-99a表达显著性上调;miR-122、miR-1246、miR-302a、miR-195、miR-124表达显著性下调.在胃癌细胞和胃癌组织中验证结果初步显示,miRNA-122和miR-302a可能分别调控靶基因IGF-IR和WDR62.结论 获得的差异表达miRNA,以及预测的靶基因IGF-IR和WDR62可能在胃癌化疗药物VCR耐药中起关键性作用.     

氧自由基对人胃腺癌细胞株 SGC-7901 IL-8表达的调控

目的:研究氧自由基在体外对胃癌细胞株SGC-7901表达IL-8的影响.方法:用不同浓度的双氧水体外刺激SGC-7901,用酶联免疫吸附试验测定培养液上清中的IL-8分泌情况,用RT-PCR测定IL-8及NF-κB的表达,以不同浓度的抗氧化剂U74006F预处理培养的细胞,再用双氧水刺激SGC-7901,再行测定上述指标.结果:SGC-7901在所用H2O2浓度及U74006F治疗剂量下其生长无明显影响,活性氧能刺激SGC-7901 IL-8 mRNA表达及蛋白分泌并与H2O2浓度相关,U74006F能有效抑制H2O2对SGC-7901的刺激作用.结论:体外研究表明,胃癌细胞株SGC-7901 IL-8表达受到氧自由基的调控,氧自由基可能通过激活NF-κB而起作用,抗氧化剂U74006F对控制IL-8的表达有一定作用,抗氧化治疗有望成为胃癌综合治疗的一部分.     

死亡受体Fas在人胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的应用

目的 了解维生素E琥珀酸酯（VES）诱导胃癌细胞凋亡的信号转导途径，方法 以人胃癌SGC－7901细胞作为靶细胞，采用细胞免疫化学法、反义寡核苷酸酸转染法探讨Fas在VES诱导SGC－7901细胞凋亡过程中的作用。结果 经不同剂量VES处理后，细胞中蛋白表达增加；有剂量－效应关系；用Fas反义寡核苷酸转染SGC－7901细胞后，降低了VES抑制细胞生长的能力。结论 在VES诱导SGC－7901细胞凋亡过程中启动了Fas信号途径。     

消痰散结方对胃癌组织中P21ras及P185蛋白表达的影响

目的 :探讨消痰散结方对胃癌组织中P2 1ras及P185蛋白表达的影响。方法 :30只BALB/c无胸腺裸鼠 ,建立人胃腺癌SGC 790 1原位移植模型 ,在模型建立次日随机分为对照组 (生理盐水腹腔注射 )、化疗组 (5 Fu腹腔注射 )、中药组 (消痰散结方腹腔注射 ) ,共给药 3周 ,12周左右脱颈椎处死。应用Envision免疫组织化学方法检测各组胃癌组织中P2 1ras及P185蛋白的表达情况。结果 :P2 1ras在中药组肿瘤组织细胞膜上的阳性表达率为2 6 .7% ,与对照组 (5 2 .0 % )相比具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;化疗组的阳性表达率为 2 7.5 % ,与对照组比较具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;中药组与化疗组相比 ,差异不显著。P185在中药组肿瘤组织细胞膜上的阳性表达率为31.1% ,与对照组 (5 6 .0 % )相比具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;化疗组的阳性表达率为 30 .0 % ,与对照组比较具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;中药组与化疗组相比 ,差异不显著。结论 :消痰散结方对SGC 790 1胃癌组织中P2 1ras及P185蛋白表达有明显的下调作用 ,这可能是消痰散结方抑瘤抗转移作用的一个重要环节     

The effect of Fufangkushen on gastric cancer cell killing by lines SGC-7901 human γδT cell

Objective To explore the effect of Fufangkushen on gastric cancer cell killing by human γδT cells. Methods Isopentenyl pyrophosphate method was used to amplify human peripheral blood γδT cells in vitro. Fufangkushen at various concentrations was used to induce γδT cells and gastric cancer cell lines SGC-7901 for 24 hours, MTr assays was used to detect inhibitory effect of Fufangkushen on these cell lines, LDH assays was used to measure the cytotoxic activity of γδT cells, and flow cytometry was used to detect apoptosis of γδT cells and SGC-7901 before and after the treatment. Results Ten days after cultivation, proliferation ra-tio of γδT cells increased from 4.21% to 70.35% and CD44 was up to 94.0%. Inhibitory rate of Fufangkush-en on SGC-7901 at various concentrations was significantly higher than that on γδT cells (22.3% vs-22.4%, P<0.05). The negative inhibitory ratio on γδT cells showed a dose-dependent manner with Fufangkushen's concentrations ranging from 1/5 to 1/400. γδT cells cytotoxic activity to SGC-7901 induced by Fufangkushen for 24 h was higher than control group, (83.6% vs 71.2%, P<0.05). Apoptotic rate was significantly lower in γδT cells than in SGC-7901 (4.64% vs49.23%, P<0.05). Conclusion Fufangkushen, within routine concentration ranges, can promote γδT cells' proliferation, inhibit tumor cell growth and enhance γδT cells' cytotoxic activity. This may be beneficial to tumor adoptive immunotherapy and provide evidence for the appli-cation of Fufangkushen in the treatment of tumors.