SELDI技术在乳腺癌淋巴结转移诊断中的应用研究

目的应用表面增强激光解析/电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术和蛋白芯片从乳腺癌患者血清中筛选出乳腺癌淋巴结转移的特异性蛋白标志物,为预测淋巴结转移提供更早且简单易行的方法。方法用SELDI-TOF-MS技术及IMAC-30蛋白芯片检测了39例发生淋巴结转移和45例未发生转移的乳腺癌患者的血清蛋白指纹图谱,采用Ciphergen Biomaker Wizard软件筛选差异表达蛋白,用SPSS17.0软件对数据进行统计分析。结果乳腺癌发生淋巴结转移组与未转移组相比共有31个差异蛋白峰(P<0.05),判别分析选出质荷比为4781、5329、5895、6012和8918的5个差异蛋白并评价其诊断效能,其中质荷比为4781的蛋白的诊断效能最高,灵敏度为84.62%,特异度为88.89%。结论 SELDI蛋白质谱技术在预测乳腺癌患者的淋巴结转移诊断方面具有一定的价值。     

SELDI-TOF-MS技术筛选鼻咽癌患者血清标志蛋白

目的应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术筛选鼻咽癌（NPC）患者血清中的标志蛋白。方法用CiphergenBiosystem公司生产的PBSⅡ／C型蛋白质指纹图谱仪和GoldChip（金芯片）蛋白芯片检测98例鼻咽癌患者和30例正常人血清的蛋白指纹图谱,采用Biomaker Wizard 3．1软件分析两组的蛋白表达情况筛选差异表达蛋白。结果两组均检出较多蛋白峰,并且有表达明显的蛋白峰（P〈0．01）,在鼻咽癌患者中,低表达的有1个（即m／z为5026Da）,高表达的有4个（即m／z为5934Da,5352Da,6655Da,6675Da）。结论用SELDI—TOF—MS蛋白质芯片技术筛选NPC患者血清中特异性蛋白标志物对鼻咽癌的早期诊断具有较大价值。     

SELDI-TOF-MS技术在非小细胞肺癌中的应用

表面增强激光解析离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术是一种使用特殊的增强表面直接捕获待测样本中的蛋白质分子,然后经激光解析离子化．飞行时间质谱测定被捕获的蛋白质的相对分子量、丰度的新兴技术。目前该项技术已经成功应用于前列腺癌的诊断、子宫良恶性肿瘤的鉴别等方面。SELDI-TOF-MS技术通过寻找肿瘤病人相关的特异性蛋白用于对非小细胞肺癌的早期诊断,指导治疗及预测预后等方面具有很好的应用前景。     

电针对大鼠胃黏膜损伤相关信号分子的影响

目的 探索电针对胃黏膜损伤大鼠胃黏膜细胞损伤修复的作用机制.方法 将大鼠随机分为正常组、模型组、针刺治疗组,每组10只,应用乙醇灌胃法造成胃黏膜损伤大鼠模型,用电针对胃黏膜损伤大鼠治疗10天,采用链霉蛋白酶消化法分离胃黏膜细胞,用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及WCX2蛋白芯片获得各组大鼠胃黏膜细胞的蛋白质指纹图谱,对比分析各组的差异蛋白质质/荷比峰.结果 模型组大鼠胃黏膜细胞蛋白质SELDI-TOF-MS蛋白指纹图谱与正常组比较有4个蛋白质质/荷比峰差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),其中两个蛋白质质/荷比峰明显升高(P<0.05或P<0.01),两个蛋白质质/荷比峰明显降低(P<0.05);针刺治疗组与正常组比较共有4个蛋白质质/荷比峰差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),其中1个蛋白质质/荷比峰明显升高(P<0.05),3个蛋白质质/荷比峰明显降低(P<0.05或P<0.01);针刺治疗组与正常组比较亦有4个蛋白质质/荷比峰差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且4个蛋白质质/荷比均为降低(P<0.05或P<0.01).结论 电针对胃黏膜损伤的修复可能不是单纯针地对某一个或两个蛋白的调节发挥治疗作用的,而可能是多个蛋白质参与的复杂的链环反应.     

基于人工神经网络的血浆蛋白质谱在卵巢癌诊断中的应用性研究

目的：建立应用蛋白质芯片技术检测血浆蛋白质指纹图谱的方法,探讨基于人工神经网络的血浆蛋白质指纹图谱模型在卵巢癌诊断中的应用价值。方法：应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱仪测定卵巢癌和健康人血浆标本的蛋白质指纹图谱,并结合人工神经网络进行数据分析。将160例标本随机分成训练组120例（卵巢癌40例,健康人80例）和盲法测试组40例（卵巢癌20例,健康人20例）。利用从训练组得出的基于人工神经网络的血浆蛋白质指纹图谱模型,对40例未知血浆标本进行检测,并与CA125检测结果进行比较。结果：应用该方法对卵巢癌进行诊断的敏感性和特异性分别为95%（19/20）,100%（20/20）,明显高于CA125检测结果。结论：基于人工神经网络的血浆蛋白质指纹图谱模型在卵巢癌的诊断中较传统方法具有更高的敏感性和特异性,值得进一步研究与应用。     

表面增强激光解析电离-飞行-质谱（SELDI-TOF-MS）蛋白质芯片技术在大肠癌围手术期中医证候研究中的应用价值

目的：探讨表面增强激光解析电离-飞行-质谱（SELDI-TOF-MS）蛋白质芯片技术在大肠癌围手术期中医证候研究中的应用价值。方法：对大肠癌围手术期的病因病机及证候的发展规律进行研究。结果：通过对大肠癌围手术期中医证候规律的研究深入认识该病特定阶段的病因病机,掌握该病证候的发展规律,为该病中医临床诊断治疗提供依据。利用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术探索该病特定阶段中医证候诊断的客观化和标准化,从而提高中医药诊疗该病的可信度与可重复性,为病证结合的深层次研究提供依据。结论：SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术日益成熟,其正逐渐向其他医药领域延伸,在大肠癌围手术期证候研究方面也将会有广阔的运用前景。     

IgA肾病湿热证的血清蛋白质组学研究

目的：应用表面加强激光解析电离-飞行时间-质谱（SELDI-TOF-MS）技术,对IgA肾病（IgAN）湿热证患者进行血清蛋白质指纹图谱检测,分析探讨该人群中所表达的特异蛋白,试图从蛋白质组层面寻找与IgA肾病湿热证相关的血清标志物。方法：采集IgA肾病患者的血清样本共29例（湿热证14例,非湿热证15例）,同时选择非IgA肾病的湿热证肾病患者血清样本10例和健康人血清样本15例。采用表面增强激光解析离子化蛋白质芯片分析仪实现各组血清蛋白质表达谱的检测,后运用Biomarker WizardTM和Biomarker PatternsTM软件进行数据分析,最终识别IgA肾病湿热证特异表达的蛋白质,并建立证候决策树模型。结果：IgA肾病湿热证组与非湿热证组之间共检出有7个蛋白峰具有显著差异（P〈0.05）;IgA肾病湿热证组与非IgA肾病湿热证组之间共检出有4个蛋白峰具有显著差异（P〈0.05）;IgA肾病湿热证组与健康对照组之间共检出有5个蛋白峰具有显著差异（P〈0.05）;综合以上各组对比结果,并结合统计学分析证实,M/Z（质荷比）为4987.92所代表的“Beta-defensin 33蛋白”可能是IgA肾病湿热证的特异血清蛋白标志物。经筛选以M/Z为1092.71等11个蛋白峰组成的证候决策模型能很好地将IgA肾病湿热证区分出来,该模型的敏感性为92.86%,特异性为87.50%。进一步对此决策模型进行盲法验证,结果其敏感性为90.00%,特异性为86.67%。结论：IgA肾病湿热证的发生发展,可能是以M/Z为4987.92所代表的“Beta-defensin 33蛋白”的差异表达为物质基础的,同时建立了分子生物学证候决策树模型。     

蛋白指纹图谱在原发性肝癌中医辨证分型应用的初步研究

目的应用表面加强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）检测肝细胞性肝癌患者血清蛋白质指纹图谱,筛选特异性候选标志物。方法应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术检测56例肝郁气滞证和55例肝胆湿热证肝癌患者血清,获得弱阳子交换型蛋白质芯片（CM10）蛋白表达图谱,用Marker Wizard软件分析差异蛋白并经数据库搜索初步鉴定。结果应用CM10在肝郁气滞证和肝胆湿热证肝癌血清中检测到在不同质荷比（M/Z）有2个差异蛋白质峰8 576 Da、8 780 Da,其蛋白质含量有显著性差异（P〈0.05）。经蛋白质数据库搜索,与这2种差异蛋白质分子量最接近的蛋白质分别为细胞色素C6和细胞色素C氧化酶合成因子5。结论应用SEIDI-T0F-MS可以筛选不同中医证型肝癌患者血清特异性生物标志物,检测到的2个差异蛋白质可能是鉴别肝郁气滞型与肝胆湿热型的血清生物学指标。     

肝硬化患者血清蛋白组学研究

目的比较肝硬化组与健康对照组以及肝硬化A、B、C级之间的血清蛋白组学,寻找用于肝硬化早期诊断、疗效预测的特异性蛋白标志物。方法应用美国CipherGen公司表面增强激光解析电离飞行时间质谱仪和蛋白芯片获得肝硬化患者及健康人血清中的蛋白质指纹图谱,用Biomarker Wizard软件进行分析,筛选出差异表达的蛋白峰。结果肝硬化组与健康对照组共有16种蛋白质差异有统计学意义,A级与B级、C级之间的差异蛋白分别为1、9种,B级与C级之间无差异蛋白表达。结论表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)在肝硬化的诊断及病情判断等方面具有一定价值。     

SELDI—TOF—MS二维内标法的建立和应用

目的 探索表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)二维内标校准方法,解决SELDI-TOF-MS的准确度和重复性较差的技术瓶颈.方法 采用人工合成纯化的多肽分子促肾上腺皮质激素(ACTH,MW:2 465.75Da)作为内标物质,加入待测样品中进行SELDI-TOF-MS检测,通过内标物质在质谱图中横坐标(质荷比)和纵坐标(丰度)响应值校准,消除因操作条件的波动对分析结果产生的影响,以提高结果的准确度和重复性.结果 加入终浓度为4.055 μmol/L的ACTH对血清蛋白质谱图无明显影响;加入内标物浓度和其质谱峰丰度呈直线关系(R=0.976 3); 分子量检测变异系数平均降低5.36倍(P<0.001);质谱峰丰度检测平均变异系数降低5.19倍(P<0.001).结论 二维内标法显著提高了SELDI-TOF-MS测定蛋白分子量和丰度的准确度和重复性,是该技术进行质量控制和标准化的有效措施.