胰腺癌相关糖尿病的血清蛋白质组学分析

目的 检测胰腺癌相关糖尿病的血清蛋白标志物,并建立诊断模型.方法 应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱( SELDI-TOF-MS)技术检测17例胰腺癌相关糖尿病与17例新发2型糖尿病、17例健康对照者血清的差异表达蛋白,用Biomarker Patterns Software 5.0软件建立胰腺癌相关糖尿病诊断模型并验证.结果 在胰腺癌相关糖尿病、新发2型糖尿病,健康者各10例的蛋白指纹图谱中筛选出12个差异表达蛋白峰,其中质荷比为6116、6695、8936 Da的蛋白峰被选为建立胰腺癌相关糖尿病诊断模型的蛋白峰.该诊断模型的诊断正确率为90％.盲法验证各组另7例样本,正确诊断胰腺癌相关糖尿病患者达100％,新发2型糖尿病患者为71％,健康人群为86％.经检索蛋白质数据库,与以上3种差异表达蛋白分子质量最为接近的蛋白分别为金属硫蛋白、胰腺干细胞增殖分化因子和成纤维细胞生长因子 1.结论 通过SELDI方法筛选出3种胰腺癌相关糖尿病的血清蛋白标志物,建立了可靠的胰腺癌相关糖尿病的诊断模型.     

异烟肼敏感与耐药结核杆菌临床分离株培养滤液蛋白比较分析

目的寻找异烟肼耐药结核杆菌特异性分泌蛋白。方法应用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX2)捕获并应用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术对1株异烟肼单耐药结核杆菌和1株异烟肼敏感结核杆菌临床分离株7天及14天Middlebrook 7H9培养滤液蛋白进行比较,描述性分析其差异。结果在异烟肼敏感和异烟肼单耐药结核杆菌株7天及14天Middlebrook 7H9培养滤液中分别检测到164、175、133、147种蛋白质/多肽,其相对分子量(依质荷比m/z而得)范围分别为982⁹ 328、9979 328、997⁹ 327、1 0509 327、1 050⁸ 903、9 968 903、9 96⁹ 369,表达丰度(通过质谱峰面积计算)分别为179 369,表达丰度(通过质谱峰面积计算)分别为17² 100、212 100、21¹ 943、601 943、60⁵ 355、415 355、41³ 267;异烟肼单耐药结核杆菌株与异烟肼敏感结核杆菌株相比较,7和14天培养滤液分别存在47与58种差异蛋白质/多肽,这些差异蛋白质相对分子量在1 0833 267;异烟肼单耐药结核杆菌株与异烟肼敏感结核杆菌株相比较,7和14天培养滤液分别存在47与58种差异蛋白质/多肽,这些差异蛋白质相对分子量在1 083⁸ 812、1 0128 812、1 012⁹ 327之间,表达丰度在769 327之间,表达丰度在76¹ 811、251 811、25³ 010之间。结论异烟肼敏感结核杆菌和耐药结核杆菌液体培养早中期滤液蛋白质存在差异,但是否为异烟肼耐药结核杆菌特异性分泌蛋白则有待进一步证实。     

应用SELDI-TOF-MS技术筛选结肠癌术后原位复发患者的血清诊断标志物

目的 寻找结肠癌术后原位复发患者的特异性生物标志物.方法 采用SELDI-TOF-MS技术(表面增强激光解析电离飞行时间质谱)对比分析30例结肠癌术后原位复发患者和30例结肠癌术后无复发患者的血清蛋白质谱,用Biomarker Wizard软件分析获得的蛋白质谱.结果 结肠癌术后原位复发组与结肠癌术后无复发组有9个蛋白峰差异有统计学意义(P＜0.05),其中有2个蛋白峰(7731.3 D和8 266.5 D)差异有统计学意义(P＜0.01),这2个蛋白峰在结肠癌术后原位复发患者中高表达,在结肠癌术后无复发患者中低表达.结论 这2个蛋白峰有可能成为预测结肠癌术后原位复发患者的特异性生物蛋白标志物.     

特发性血小板减少性紫癜血小板差异蛋白质组诊断模型的实验研究

本研究旨在建立一种简便快速、灵敏度高、特异性好的特发性血小板减少性紫癜（ITP）的实验诊断方法。应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术（SELDI-TOF-MS）检测60例ITP、60例白血病、60例再生障碍贫血及60例健康成人血小板裂解液,各疾病组及正常组均随机分为训练集（120例）和验证集（120例）,筛选出有明显表达差异的标志蛋白,利用人工神经网络建立ITP诊断模型,并用SPSS17．0进行盲法验证。结果表明,m／z为2234．30、3476．36、7526．29的蛋白在ITP患者高表达,m／z为4990．02、5152．39的蛋白低表达。诊断模型的灵敏度和特异度分别为80．6％和77．3％,盲法验证工作特征曲线下面积为0．837。结论：基于血小板蛋白质谱图建立的人工神经网络诊断模型对ITP的临床诊断和分子病理研究具有奄要的参者价值。     

大剂量睾酮致小鼠下尿路梗阻继发早期肾病的特点及其蛋白质组学的观察

目的研究大剂量睾酮对小鼠尿路梗阻的影响及其特点。方法 SPF级BLAB/c雄性小鼠45只，体重（20±2） g，完全随机分为A、B和C组，每组15只。 B组和C组经皮向腹腔内分别注射丙酸睾酮0.25 mg和1.25 mg，A组以等量生理盐水替代，每天1次，连续20 d。第21 d所有小鼠处死并收集血和尿标本，检测肾功能、性激素、血管内皮生长因子（ VEGF）和SELDI-TOF-MS蛋白质谱分析，并解剖观测小鼠双肾、输尿管、膀胱、前列腺及尿道等全尿路情况。结果相比A组，B组为良性前列腺增生（ BPH）和单纯下尿路梗阻模型。 C组在下尿路梗阻加重基础上出现双输尿管扩张和双肾轻度积水，BUN及Cr（P＜0.05）均有升高趋势，但BUN无统计学差异。且蛋白尿阳性，血VEGF升至（9.67±2.67）pg/ml（P＜0.01），具有下尿路梗阻继发早期梗阻性肾病特点。此外，C组血清检出11个异常血清蛋白，包括6个蛋白高表达（959.4、5855.1、7519.3、11840.8、15074.8、15880.3 Da），5个蛋白低表达（3496.0、3748.5、4434.0、6057.1、9150.5 Da）。不仅SELDI图形波峰与临床梗阻性肾病相似，且高表达的11840.8 Da和15074.8 Da经鉴定分别为可反映肾小球滤过功能受损的β2微球蛋白和血红蛋白家族，而低表达的4434.0 Da和9150.5 Da与急性肾小管坏死的临床患者相符。结论大剂量睾酮可诱导小鼠严重下尿路梗阻，并继发双侧早期梗阻性肾病的方法简易快速有效，且与临床患者在病因机制、血清学和蛋白组学等方面有一些类似特点，具有一定的继续研究和探讨价值。     

细粒棘球蚴病患者血清蛋白质差异表达分析

目的 筛选细粒棘球蚴病患者血清蛋白质组学标记物,探索其用于细粒棘球蚴病诊断的价值.方法 细粒棘球蚴病患者35例,非棘球蚴病其他肝病对照组17例,健康对照组20例,用弱阳离子交换芯片(CM10芯片)结合表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测血清蛋白质谱,用ZUCI-蛋白芯片数据分析系统软件包进行分析.通过支持向量机运算筛选病例组和对照组血清差异表达蛋白峰,建立细粒棘球蚴病蛋白质指纹图诊断模型并用留一法验证其诊断价值.结果 细粒棘球蚴病患者和健康对照组之间共筛选出8个差异表达蛋白峰,质荷比分别为1044、1046、1055、1075、6452、6649、8714的几个蛋白峰在病例组中下调,质荷比为5651的蛋白峰在病例组中上调(P<0.05);细粒棘球蚴病组和其他肝病对照组之间筛选出1个差异蛋白峰(质荷比为5951,P<0.05);其他肝病组和健康组合并后的对照组和细粒棘球蚴病组之间共筛选出8个差异蛋白峰,留一法验证表明以此差异蛋白峰建立的诊断模型灵敏度为62.86%,特异度为67.57%.结论 SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术能筛选出细粒棘球蚴病患者血清中的差异表达蛋白质,有望能成为细粒棘球蚴病的诊断和研究方法.     

电离飞行时间质谱技术在肺癌早期诊断中的应用现状及前景

肺癌是最常见的肿瘤相关性死亡原因,预后较差,胸部X线及痰细胞筛查不能有效提高生存率。表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)具有分析速度快、高通量、样品用量少、敏感度高和特异性强等特点,能直接分析组分复杂的生物样品。该技术也成功地用于研究肺癌的肿瘤标志物,在肺癌的早期诊断、治疗和预测预后等方面获得了明显进展。     

淋巴瘤患者血清蛋白标志物筛选和应用的研究

目的筛选淋巴瘤患者血清蛋白标志物建立预测模型并评价其诊断价值。方法收集81例淋巴瘤病患者和86例正常人血清标本,利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF—MS）及CM10（弱阳离子表面）蛋白芯片检测并筛选淋巴瘤血清标志蛋白,分别结合Biomarker Patterns Software（BPS）软件和人工神经网络技术建立智能预测模型,评价模型诊断价值。每条芯片随机选择一个点检测标准蛋白,评价实验重复性。结果淋巴瘤与对照间共检测到65个蛋白质峰,其中39个差异有意义（P〈0．05）。BPS筛选质荷比4359,6673,8978,15190蛋白质建立决策树模型预测淋巴瘤的灵敏度为92．7％,特异度为89．1％,同时建立人工神经网络模型预测淋巴瘤灵敏度和特异度分别为87．8％和87．0％。标准蛋白表达丰度68．3±8．2,变异系数（CV）12．0％。结论利用标准蛋白作为控制物在一定程度上保证了SELDI实验重复性,筛选的标志蛋白建立决策树模型在分子水平早期预测淋巴瘤中具有潜在应用价值。     

Characterization of foot-and-mouth disease virus antigen by surface-enhanced laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry in aqueous and oil-emulsion formulations

We have used a novel method, surface-enhanced laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry (SELDI-TOF-MS), to characterize foot-and-mouth disease virus (FMDV) vaccine antigens. Using specific capture with FMDV binding recombinant antibody fragments and tryptic digestion of FMDV antigens the spectral peaks representing the FMDV structural proteins VP1, VP2, VP3 and VP4 were identified. VP1 existed as 2 variants differing by 0.2 kDa and VP4 as 8 variants differing by 14–17 Da. Such heterogeneities have not been reported earlier. They could represent oxidation of VP4 and N-glycation of VP1. We also detected FMDV proteolysis upon incubation at elevated temperatures and impurities in FMDV antigen preparations. Finally, we could also characterize FMDV antigen present in emulsions with oil adjuvant by SELDI-TOF-MS. Such FMDV antigen retained the VP4 protein which is known to be specifically present in intact (146S) FMDV particles but absent from specific (12S) degradation products. This indicates that virions do not dissociate upon emulsification.     

Serum amyloid A is elevated in the serum of lung cancer patients with poor prognosis

Background:

Lung cancer is known as the top cancer killer in most developed countries. However, there is currently no promising diagnostic or prognostic biomarker for lung cancer. This study aims to discover non-invasive differential markers in the serum of lung cancer patients, to determine the protein identity of the candidate biomarker(s), and to investigate any clinical implication of the biomarker(s) concerned.

Methods:

Blood specimens were collected from 154 pre-operative patients with lung cancer and 35 healthy blood donors with no evidence of lung cancer. Fractionated serum samples were processed by surface-enhanced laser desorption/ionisation time-of-flight mass spectrometry (MS). Candidate biomarker was identified using sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis and tryptic digestion followed by tandem MS fragmentation analysis, which was subsequently validated with immunoassay.

Results:

A differential protein with m/z 11.6 kDa was detected and identified as an isoform of human serum amyloid A (SAA). It was significantly increased by 1822% in lung cancer patients when compared with the healthy controls, which gave an area under the receiver operator characteristic curve of 0.88. In addition, the protein was also significantly elevated by 77% in lung cancer patients with survival <5 years when compared with patients with survival ⩾5 years.

Conclusion:

There are several functions of the SAA protein, described in the context of inflammation, that are compatible with the mechanism of tumour invasion and metastasis. Our study not only detected increased SAA level in the serum of lung cancer patients but also identified that elevated SAA level may be a non-invasive biomarker useful for the prediction of lung cancer prognosis.