大鼠下颌下腺降钙素的定位研究

目的观察大鼠下颌下腺降钙素（CT）的分布。方法取16只健康的SD大鼠下颌下腺,采用免疫组织化学SP法进行染色。结果在大鼠下颌下腺,可见CT反应阳性物,它们主要分布于浆液性腺泡、混合性腺泡的浆液细胞内,各级导管的上皮细胞也呈CT反应阳性。结论下颌下腺可能具有分泌降钙素的功能,提示下颌下腺可能参与钙磷代谢的生理调节。     

慢性心力衰竭时心肌组织中CGRP的含量变化及mRNA表达

目的探讨心肌组织降钙素基因相关肽(CGRP)含量变化及mRNA的表达与慢性心力衰竭(CHF)发生、发展的关系。方法以阿霉素(ADR)制备慢性心衰模型,采用放射免疫学方法和逆转录聚合酶链反应进行检测。结果CHF时,心肌组织中CGRP含量为34.82±3.01,高于正常心肌组织中CGRP的含量24.77±3.84,差异具有统计学意义;而CGRP的mRNA表达降低。结论心肌组织中CGRP含量变化及其mRNA的表达调控,与CHF的发生、发展密切相关。     

嗅成鞘细胞条件培养基对PC12细胞促分化作用及对分化后细胞损伤的保护作用

目的研究嗅成鞘细胞条件培养基(OECCM)对PC12细胞促分化作用及其对-OH自由基损伤分化后细胞的保护作用。方法采用原代分离培养的方法培养和纯化嗅成鞘细胞,收集其培养上清作为OECCM,然后用其培养PC12细胞,培养3 d后,进行细胞形态学观察及-βtubulin免疫细胞化学染色,同时在同一批细胞中加入100μmol/L FeSO4和50μmol/L H2O2作用20 min,再用OECCM继续培养48 h,然后进行MTT对细胞活性进行检测和存活细胞计数。结果用OECCM培养的PC12细胞长有突起,形态酷似神经元,并且-βtubulin免疫细胞化学染色呈阳性,而对照组细胞在同样培养时间里,没有明显的形态变化,-βtubulin染色呈阴性。用FeSO4和H2O2产生的-OH自由基对分化后的PC12细胞进行损伤,发现继续用OECCM培养后,反映细胞活性的A值为0.346 5±0.032,对照组0.201 8±0.034(P<0.01);同时两组细胞存活数目的百分比分别为:实验组为(56.7±5.9)%,对照组为(23.8±7.4)%(P<0.01)。结论嗅成鞘细胞可以分泌有促PC12细胞分化作用的分子和对分化后的细胞在损伤时有保护作用的分子。     

神经生长因子低亲合力受体在肝纤维化患者和大鼠肝星状细胞的表达

目的探讨神经生长因子低亲合力受体（P75）在肝纤维化患者和大鼠肝星状细胞（HSCs）的分布及作用机制。方法对四氯化碳（CCL）法制备的肝纤维化大鼠肝组织及肝穿刺获取的肝纤维化患者肝组织,常规石蜡包埋;大鼠离体培养的活化HSCs离心涂片,行免疫组织化学染色,确定P75的表达分布。结果P75在大鼠离体培养的活化HSCs膜,免疫组织化学染色呈阳性,在肝纤维化患者HSCs膜和肝细胞膜,免疫组织化学染色呈阳性,在肝纤维化大鼠HSCs膜和肝细胞膜,免疫组织化学染色呈阳性,在健康人和正常对照大鼠HSCs膜,免疫组织化学染色呈阴性,表明人和大鼠活化的HSCs膜表达P75。结论P75为肝纤维化的治疗提供了新的靶点。     

视网膜细胞培养上清液对骨髓基质细胞的诱导分化作用

目的探讨视网膜细胞培养上清液对骨髓基质细胞(BMSCs)的诱导分化作用。方法原代培养胚龄17d(E17)及生后3d(P3)SD大鼠的视网膜细胞,分别收集培养上清液,过滤后与DMEM按2:3混合,用此混合液诱导BMSCs,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,对诱导后的细胞进行神经丝蛋白(NF)、胶质源性纤维酸性蛋白(GFAP)及视网膜特异性标记物进行免疫化学染色,统计分析阳性细胞数;再用RT-PCR进一步检测诱导结果。结果E17和P3细胞上清液均能诱导BMSCs表达NF[(10.35±2.66)%,(10.64±3.94)%]和GFAP[(27.86±7.97)%,(24.38±5.80)%],但只有P3细胞上清液诱导的BMSCs表达视蛋白(opsin),同时RT-PCR也检测到视细胞发育调节转录因子Crx mRNA的表达。结论视网膜细胞培养上清液可以诱导BMSCs向神经元、胶质细胞与视细胞分化。     

大鼠腰骶髓和延髓星形胶质细胞及神经元对慢性结肠炎的反应

目的探讨大鼠腰骶髓和延髓星形胶质细胞及神经元对慢性结肠炎的反应,及反应性星形胶质细胞和反应性神经元之间的关系.方法成年雄性SD大鼠,实验组（n=17）给予三硝基苯磺酸（TNBS）灌肠诱导结肠炎;对照组（n=16）给予生理盐水灌肠.免疫组织化学法显示大鼠腰骶髓和延髓内胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性星形胶质细胞和Fos阳性神经元.结果TNBS灌肠后,GFAP阳性星形胶质细胞主要分布在脊髓背角浅层（Ⅰ～Ⅱ层）、中间外侧核（Ⅴ层）、后连合核（Ⅹ层）和腹角外侧核（Ⅸ层）.Fos阳性神经元集中分布在背角深层（Ⅲ～Ⅳ,Ⅴ～Ⅵ层）.在延髓,两者均主要分布在由孤束核、中间网状带和腹外侧区组成的延髓内脏带（MVZ）.TNBS灌肠后3、7、14 d,脊髓中GFAP阳性细胞密度明显高于对照组（P＜0.05）.TNBS灌肠后3 d,延髓中GFAP阳性细胞密度明显高于对照组（P＜0.05）.TNBS灌肠后28 d,脊髓和延髓中GFAP阳性细胞密度下降,与对照组无显著性差异（P＞0.05）.结论结肠炎性刺激引起脊髓和延髓中星形胶质细胞激活.随着结肠炎的恢复,星形胶质细胞的反应性下降.在延髓内脏带,反应性星形胶质细胞与反应性神经元关系密切.     

渗透压变化对缝隙连接蛋白在培养的大鼠下丘脑星形胶质细胞和神经元表达的影响

目的观察渗透压改变对培养的下丘脑星形胶质细胞的缝隙连接蛋白Connexin43（Cx43）和神经元的缝隙连接蛋白Cx32表达的影响。方法体外培养孕14d或新生1d SD大鼠下丘脑的神经元和星形胶质细胞并进行纯化和鉴定。实验各分两组,第1组：细胞由等渗培养液移至高渗培养液（含9％NaCl）分别放置1min、3min、5min、10min和15min后将液体吸出常规固定;第2组：细胞先置于高渗培养液中15min后换成等渗培养液,分别在1min、3min、5min和10min后将等渗培养液吸出常规固定。两者均进行抗Cx43或抗Cx32的免疫荧光染色,Confoeal显微镜观察。结果第1组,Cx43在刺激1min后在星形胶质细胞表达比对照组有所增加,3min达到高峰,以后逐渐降低,15min恢复正常;而Cx32在刺激后1min的神经元中表达比对照组增加,5min达到高峰,以后降低。15min恢复正常。第2组同样为Cx43在星形胶质细胞刺激1min后表达增加,3min达到高峰,以后降低,10min恢复正常;神经元的Cx32表达在刺激后5min达到高峰,以后降低,10min恢复正常。两组Cx43表达的高峰期均早于Cx32。结论Cx43和Cx32可能参与星形胶质细胞与神经元渗透压的调节。     

依赖性膜磷脂结合蛋白AnnexinⅡ对大鼠脊髓横断损伤的修复作用

目的在体内实验中观察钙依赖性膜磷脂结合蛋白AnnexinⅡ对大鼠脊髓损伤以及神经干细胞移植的作用。方法在成年大鼠全横断脊髓损伤的局部微量注射AnnexinⅡ,观察其对损伤的脊髓神经细胞存活、神经纤维生长和损伤后的功能恢复的影响,以及对联合移植的胚胎神经干细胞移植后存活和迁移的影响。结果在动物脊髓横断损伤6周,神经干细胞移植4周后,损伤局部微量注射AnnexinⅡ＋NSC移植组实验动物的运动评分结果较空白对照组和单独进行NSC移植组都有明显增高（JP〈0．01）,脊髓损伤处的空洞面积也较上述两组显著减小（P〈0．01）;注射AnnexinⅡ＋NSC组损伤节段以上荧光金标记神经细胞数目较空白对照组明显增多（P〈0．01）。结论AnnexinⅡ蛋白可能具有减小局部损伤空洞面积,保护损伤的神经元和神经纤维并防止其走向变性和死亡的效应,并对神经干细胞的移植效应有一定的促进和协同作用,使脊髓损伤大鼠的功能得到一定程度的恢复。     

复方广金钱草合剂改善肾草酸钙结石大鼠肾功能的效果及其机制

目的:探讨复方广金钱草合剂改善肾草酸钙结石大鼠肾功能的效果及其机制。方法:将SPF级雄性SD大鼠40只随机分为观察组和对照组,每组20只。观察组采用L-羟脯氨酸注射法诱导创立肾草酸钙结石大鼠模型,并以复方广金钱草合剂灌胃干预28 d。分别于对照组入组后和观察组建模前、建模后1 d、建模后28 d收集尿液标本,进行尿量、尿蛋白、尿肌酐、尿钙等肾功能相关指标的检测。并在收集尿液标本的同时取2组尾静脉血2 mL,进行血肌酐、血尿素氮等肾功能指标的检测。观察组干预28 d均双肾标本,其中左肾制成10%匀浆进行丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平检测,右肾组织切片并通过免疫组织化学检测骨桥蛋白(OPN)和转化生长因子-β(TGF-β)等炎性相关蛋白表达情况。结果:与对照组比较,观察组建模后1 d尿量降低,尿蛋白、尿肌酐、尿钙、血肌酐、血尿素氮水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与同组建模前比较,观察组建模后1 d尿量降低,尿蛋白、尿肌酐、尿钙、血肌酐、血尿素氮水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与同组建模后1 d比较,观察组建模后28 d尿量升高,尿蛋白、尿肌酐、尿钙、血肌酐、血尿素氮水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,观察组肾组织MDA水平以及OPN、TGF-β阳性表达率升高,SOD、GSH-Px水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:复方广金钱草合剂可改善肾草酸钙结石大鼠肾功能,而改善氧化应激和炎性反应可能为其作用机制。     

加味香砂六君子汤对胃癌大鼠的实验研究

目的:探究并分析加味香砂六君子汤通过抑制Wnt信号通路对胃癌大鼠桩蛋白(paxillin)、大鼠凋亡相关蛋白(RelA)表达的影响。方法:选取健康成年Wistar大鼠120只,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组60只,对2组大鼠进行胃癌造模处理,对照组大鼠又随机分为未处理组、处理(生理盐水)后8周组、处理(生理盐水)后12周组,每组20只。观察组大鼠又随机分为未处理组、处理(汤药)后8周组、处理(汤药)后12周组,每组20只。观察2组大鼠处理前、处理后8周、处理后12周paxillin、RelA。结果:2组大鼠处理前后体质量差异有统计学意义(P<0.05),2组大鼠处理前体质量比较差异无统计学意义(P>0.05),处理后,2组大鼠体质量有所降低,但观察组大鼠降低程度明显小于对照组(P<0.05);2组大鼠处理前后wnt-1、paxillin、RelA水平差异有统计学意义(P<0.05),2组大鼠处理前wnt-1、paxillin、RelA水平比较差异无统计学意义(P>0.05),处理后,2组大鼠wnt-1、paxillin、RelA水平呈降低趋势,但观察组大鼠wnt-1、paxillin、RelA水平明显小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:加味香砂六君子汤能有效通过抑制wnt以降低胃癌大鼠paxillin、RelA的表达。