T7 RNA聚合酶体外转录合成siRNA的方法

目的：建立一种应用T7 RNA聚合酶体外转录合成大量siRNA的方法。方法：以萤火虫荧光素酶为靶标，应用T7 RNA聚合酶体外转录合成siRNA，脂质体转染法将其导入HepG2细胞中，通过测定荧光素酶的量，评价siRNA对萤火虫荧光素酶基因表达的抑制作用。结果：合成了以萤火虫荧光素酶为靶标的siRNA，合成的siRNA能特异性地抑制荧光素酶基因的表达，抑制率为80％。结论：建立了一种经济简便的体外合成siRNA的方法。     

5%甘露醇注射液的细菌内毒素检测

笔者参照中国药典2000年版“细菌内毒素检查法”中干扰实验的基本原理及细菌内毒素检测方法，对5％甘露醇注射液的细菌内毒素检测方法进行了实验研究，现报告如下。     

人正、反义转化生长因子beta1基因真核表达载体的构建

目的 :构建人转化生长因子beta 1(TGFβ1)正、反义基因真核表达载体。方法 :从人胎脑的cDNA文库中扩增出TGFβ1共 12 84bp长的DNA片段后 ,与T载体直接进行高效连接 ,并测序证实无突变。接着利用TGFβ1引物两端所设计的酶切位点将目的片段定向亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1( )。构建的正反义表达重组体 (pcDNA3.1 TGFβ1和pcDNA3.1 antiTGFβ1)经限制性内切酶消化证实其中有目的片段完整插入。结果 :本实验成功构建了人正、反义TGFβ1基因真核表达载体。结论 :人正、反义TGFβ1基因真核表达载体的构建 ,为今后研究腹膜纤维化的防治奠定了实验基础。     

妇科肿瘤化疗病人的家庭护理

抗癌药物能抑制肿瘤细胞的生长，但对机体正常细胞的代谢也起干扰作用。造血功能障碍是化疗过程中最常见的毒性反应，主要表现为白细胞及血小板的减少、出现出血、青块等，抑制免疫功能，使机体免疫力下降，容易引起感染发热等．因此尽量不要让患去拥挤的公共场所，避免感染其他疾病，同时要注意气候变化，及时添加衣服，防止感冒。     

反义核苷酸抑制人高迁移率族蛋白1表达对胰腺癌细胞的影响

目的　构建高迁移率族蛋白 1(HMGB1)基因的反义真核表达载体 ,寻找胰腺癌基因治疗新途径。方法应用分子克隆技术构建HMGB1基因反义真核表达载体 pcDNA3 1/antisense HMGB1,转染胰腺癌细胞株PANC 1,通过逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫印迹法 (Westernblot)、噻唑蓝 (MTT)比色法检测转染 4 8h后胰腺癌细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化。结果　成功构建 pcDNA3 1/antisense HMGB1反义真核表达载体。所获反义表达载体 pcDNA3 1/antisense HMGB1转染可使PANC 1细胞HMGB1mRNA和蛋白表达水平显著降低 (P <0 0 1)。反义 pcDNA3 1/antisense HMGB1的导入能有效抑制PANC 1增殖活性 (P <0 0 1)。 结论　应用反义RNA技术阻断HMGB1基因的表达 ,能有效抑制癌细胞的体外增殖活性 ,为基因治疗提供了新思路     

缓慢的等频干扰性“房一交接”脱节1例

缓慢的等频干扰性“房一交接”脱节近几年来国内尚未见有报道，今报道1例如下。 患者男性，23岁，有先心病病史。17岁时曾做室间隔缺损修补术。既往心电图检查正常。此次因感心悸1月就诊。静息心电图如下（图1）。     

有偿献血员血清HCV和HGV核酸检测的临床意义

为了解有偿献血员丙肝病毒(HCV)和庚肝病毒(HGV)的感染现状和探讨献血员筛选HGV的价值，笔者对44例有偿献血员进行了HCV—RNA、HGV—RNA以及抗-HCV、抗-HGV的检测。现将结果报告如下。     

MicroRNA在癌症领域受到广泛的重视

十年前,有一种遗传分子仅仅能在雷达屏幕上看到,然而,到了现在它已经在癌症生物学领域扮演了重要角色。之所以把它命名为m icroRNA,是因为它其实就是一种短链RNA,有人报导它与致癌蛋白共同作用去加速癌症的生长。还有人发现某些m icroRNA分子可以抑制一种维持细胞复制处于静止的复合物。南加利福尼亚哈蒙德大学的ScottM.Hammond认为,这些发现说明m icroRNA在调节基因的激活上扮演了重要角色。在第三个报导中,科学家们阐述了一些基因激活的模式,这些基因编码了m icroRNA的信号,也许有一天医生能用这些信号来确定肿瘤的来源。Bethesda…     

脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制真核表达载体构建及最佳短发夹样RNA分子筛选

目的构建并筛选大鼠胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）表达抑制短发夹样RNA（shRNA）真核表达载体。方法针对GFAP基因全编码序列设计并合成三对9bp茎环结构、19bp干扰序列特异性shRNA模板，体外定向克隆构建特异性重组质粒真核表达载体；通过体外大鼠脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制模型，脂质体介导RNA干扰分子转染，实时荧光定量RT—PCR及Wesem blot技术观察RNA干扰后原代星形胶质细胞GFAP表达抑制效果．筛选最佳GFAP表达干扰抑制真核表达载体。结果序列测定证实GFAP—shRNA重组质粒真核表达载体构建成功，三对shRNA模板在mRNA及蛋白表达水平抑制靶基因表达效率分别为81％、63％、56％。结论高效率的GFAP—shRNA真核表达载体在大鼠原代星形胶质细胞GFAP表达抑制模型中能高效抑制GFAP基因表达，为后续多靶点RNA干扰技术在脊髓损伤胶质瘢痕抑制基因治疗中的应用奠定了前期基础。