大鼠肝细胞与Kupffer细胞共同培养对两者功能和形态影响

目的观察大鼠肝实质细胞与Kupffer细胞体外共同培养时对两者生长、形态及功能的影响。方法采用原位二步Ⅳ型胶原灌注法、Percoll液密度梯度离心法分离Wistar大鼠肝实质细胞与Kupffer细胞;体外将肝实质细胞与Kupffer细胞按6∶1比例共同培养。观察不同情况下肝细胞生存时间和形态,每隔24 h检测培养上清液中清蛋白和谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的水平,并在培养36 h用放免法检测上清液中白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果单独培养组肝细胞的生长、增殖迅速,并向正常肝细胞的形态演变,肝细胞可培养存活至15 d;共同培养组肝细胞生长增殖缓慢,细胞可培养存活至10 d。共同培养组上清液中清蛋白水平在24、36、48、60 h比单独培养组低(t=2.551~3.139,P<0.05);ALT、AST水平在24、36、48、60 h比单独培养组高(t=2.446~3.108,P<0.05);共同培养组Kupffer细胞保持IL-1I、L-6、TNF-α分泌功能,而单独培养组未检测到IL-1I、L-6、TNF-α。结论大鼠Kupffer细胞和肝实质细胞在适宜的培养条件下可进行共同培养,二者可以保持良好的分泌功能,可用于实验研究。     

肿瘤坏死因子及其受体在类风湿关节炎中的作用

 肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）是主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）基因编码的同源三聚体蛋白,TNF-α与其受体结合后可发挥免疫调节作用并参与机体的多种病理生理过程,包括发热、炎症、感染、创伤愈合和肿瘤杀伤。TNF-α是炎症通路中一重要的细胞因子,存在于类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者的滑膜组织、滑液及血清中。TNF-α通过与多种组织因子和基质蛋白相互作用促进RA的炎症反应、滑膜细胞异常增殖和凋亡、血管翳生成及软骨与骨的破坏,推动RA炎症反应持续性进展。因而,TNF-α可以作为RA病情活动的一个临床指标,同时又是治疗RA的一个有效靶点。     

痛风性关节炎的生物标志物

目的筛选大鼠痛风性关节炎(GA)生物标志物。方法采用改良的微晶尿酸钠和次黄嘌呤法制备大鼠急性GA模型,检测血尿酸、尿尿酸、24 h总尿量及滑膜组织病理形态学改变,采用RayBioBiotin Label-based Rat Antibody ArrayⅠ筛选差异表达蛋白。结果急性GA模型建立成功,发现GA中14个差异表达蛋白,其中9个细胞因子首见于GA,差异最明显2个蛋白为TRAIL与Neuropilin-2。结论 TRAIL与Neuropilin-2为GA生物标志物,为临床诊断与防治提供新靶点。     

某地区不同肥胖分型学龄儿童外周血炎性细胞因子表达的分析

目的分析沈阳地区不同肥胖分型学龄儿童外周血炎性细胞因子表达水平。方法连续选择近期来我院诊治的肥胖学龄儿童57例(腹型肥胖22例,复合型肥胖18例和外周型肥胖17例),对照组选择同期参加体检、且结论健康儿童19例,两组对象均接受了外周血炎性细胞因子[高敏C-反应蛋白(Hs-CRP)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)]表达水平检测。结果不同肥胖分型学龄儿童外周血Hs-CRP、TNF-α、IL-6和IL-8表达水平均明显高于对照组(P均<0.05~0.01)。同时,腹型肥胖组外周血Hs-CRP、TNF-α、IL-6和IL-8表达水平表达水平也显著高于复合型和外周型肥胖学龄儿童(P均<0.05~0.01)。结论沈阳地区不同肥胖分型学龄儿童存在着明确的外周血炎性细胞因子高水平表达,且以腹型肥胖组最为突出。     

共刺激分子异常介导寻常型银屑病免疫失衡的实验研究

目的通过检查外周血免疫细胞共刺激分子和细胞因子表达格局,分析寻常性银屑病患者可能发生的免疫异常。方法选择未经治疗的寻常型银屑病患者与正常对照组,抽取外周血并分离单个核细胞(peripheral bloodmonocytes,PBMC),采用RT-PCR对寻常型银屑病患者和正常对照组外周血CD86、B7H1、Foxp3、T-bet、GATA-3指标进行检测。采用流式细胞仪检查两组外周血清中IL-12、IFN-γ、IL-17、IL-2、IL-10、IL-9、IL-22、IL-6、IL-13、IL-4、IL-5、IL-1β、TNF-α含量。结果寻常型银屑病组PBMC中Foxp3和GATA3表达低于正常人群,但T-bet表达增高(P<0.05)。寻常型银屑病患者TNF-α明显高于正常对照组(P<0.05)。寻常型银屑病患者CD86相对表达量(0.3636±0.1003)明显高于对照组(0.1061±0.03883)(P<0.05);而B7H1相对表达量(0.06876±0.03145)明显低于对照组(0.3401±0.1152)(P<0.05)。结论寻常型银屑病患者Th1亚群增加、TNFa水平增高,而Th2和调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)亚群明显降低;寻常型银屑病患者外周血抗原递呈细胞(antigen present cells,APC)表达共刺激分子CD86增加而共抑制分子B7H1降低,提示寻常型银屑病患者体内存在的免疫功能紊乱可能是由于其APC功能异常所致。     

刺梨汁对骨髓抑制小鼠造血功能的调控作用

目的 探讨刺梨汁对环磷酰胺合并⁶⁰Co致骨髓抑制小鼠造血功能的影响,研究其促进血细胞上调的作用机制。方法 双抗体夹心法检测外周血象、骨髓基质中红细胞生成素（EPO）、血小板生成素（TPO）、粒细胞生长因子（GCSF）的量。结果 刺梨汁能明显改善骨髓抑制小鼠外周血象;能有效平衡微环境中TPO的量;改善EPO的表达;对骨髓抑制小鼠骨髓细胞上清中GCSF有明显的正调控作用。结论 刺梨汁能提高骨髓抑制小鼠外周血血细胞和骨髓有核细胞计数;可促进骨髓抑制小鼠骨髓细胞从G₀/G₁期进入增殖周期;并能有效调节骨髓微环境中TPO、EPO、GCSF的表达,从而促进骨髓抑制小鼠的造血功能,可作为一种治疗贫血的辅助保健药物。     

一类新型小分子糖类化合物的免疫调节活性研究

目的研究一类合成的新型小分子糖类衍生物（4a、5a、4e和5e）对正常小鼠免疫功能的影响。方法通过体外细胞实验观察不同浓度的小分子糖类衍生物对LPS处理B淋巴细胞增殖能力的影响,用ELISA法检测不同浓度的小分子糖类衍生物对淋巴细胞产生的细胞因子IL-2、IL-4的影响,确定前期实验筛选出的四个有生物活性的影响小鼠免疫功能的小分子糖类衍生物的最佳浓度,并观察其对免疫调节活性的影响。结果体外实验中5μmol/L的4e和5e可增强LPS处理B淋巴细胞的增殖能力,与对照组比差异有统计学意义（P〈0.01,P〈0.001）。化合物4a、5a对LPS处理B淋巴细胞的增殖能力不明显,差异无统计学意义（P〉0.05）。4a、5a、4e和5e可明显促进ConA活化的脾细胞IL-2、IL-4分泌,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.001）。结论小分子糖类衍生物（4a、5a、4e和5e）对小鼠脾细胞的免疫调节功能具有一定的增强作用,有可能成为潜在的免疫调节佐剂。     

凝血相关因子与细胞因子在造血干细胞移植早期的临床意义

目的揭示造血干细胞移植（HSCT）早期凝血相关因子及特异性细胞因子的动态改变,探讨其在移植相关性血栓病变及其他并发症中的临床意义。方法采用ELISA法对95例接受HSCT的患者标本进行监测,观察预处理过程以及造血干细胞移植后4周内患者血浆中各种指标的动态改变。根据移植后首先出现的并发症分为4组：平稳组41例、急性移植物抗宿主病（aGVHD）组29例、血栓组6例和感染组19例进行统计分析。结果 HSCT在预处理过程中,纤溶酶原激活剂移植物（PAI-1）水平先升高,移植当周下降,随后又逐步上升;PAI-1和组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）在血栓组有明显的升高（均P〈0.001）,且两者在血栓组和aGVHD组间差异亦有高度统计学意义（均P〈0.01）。蛋白C（PC）水平的降低在aGVHD组有高度统计学意义（P〈0.001）,且在aGVHD与感染组间差异有高度统计学意义（均P〈0.01）。预处理前肿瘤坏死因子（TNF-α）水平在aGVHD组已经较正常升高（P﹤0.01）,其他患者中未见明显改变。在预处理第4天后所有患者都较前明显升高（P﹤0.05）,预处理结束TNF-α较前降低。发生aGVHD、血栓或感染时,TNF-α均明显升高,以aGVHD组升高更为明显,血栓组TNF-α升高水平大于感染组（P﹤0.05）。血栓和aGVHD组的TNF-α在发病前2周即有升高,感染组患者在发病前未见改变。白介素（IL）1-β在移植患者预处理各阶段未见明显变化,发生aGVHD、血栓、感染时IL1-β均有升高,以血栓组升高更明显,aGVHD组较感染组也明显升高（P﹤0.01）。在血栓患者发病前2周明显升高,而aGVHD组于发病前1周升高。结论 （1）血浆PAI-1水平的增高可能是移植相关性血栓病变的特异性指标,提示肝静脉闭塞病（HVDD）、血栓性微血管病（TMA）等血栓并发症的发生。（2）t-PA抗原对aGVHD和血栓有鉴别诊断的意义,PC在aGVHD的早期预测方面有一定的作用。（3）预处理可造成细胞因子TNF-α释放增加。在aGVHD发生时,血清TNF-α水平明显升高且较血栓患者升高更突出;在血栓发生时,血清IL1-β含量明显升高,并高于aGVHD患者。     

Novel regulatory functions for Toll-like receptor-activated B cells during intracellular bacterial infection

Infections by intracellular bacterial pathogens remain a major cause of human diseases worldwide. Despite intensive efforts, the development of effective vaccines or immunotherapies against these diseases has largely remained unsuccessful, asking for the exploration of new aspects of the host response to these pathogens. Genetic studies have demonstrated beyond doubt that cell-mediated mechanisms of host defense involving innate immunity and T cells are of crucial importance for the control of these diseases. By contrast, the role of B cells during intracellular bacterial infection has so far received little attention besides their role as antibody-producing cells. However, the general knowledge of B-cell immunology and in particular of their antibody-independent functions has greatly increased during the last years. Recently, it was found in a model of Salmonella typhimurium infection that Toll-like receptor triggering on B cells resulted through interleukin-10 secretion in a marked suppression of innate defense mechanisms ultimately leading to uncontrolled growth of the bacteria and earlier death from the disease during both primary and secondary infections. This article reviews the protective and deleterious roles of B cells during intracellular bacterial infections and discusses how manipulating their antibody-independent functions may be a powerful means to therapeutically improve host resistance against these diseases.     

Immunology of Toxoplasma gondii

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite. Following oral infection the parasite crosses the intestinal epithelial barrier to disseminate throughout the body and establish latent infection in central nervous tissues. The clinical presentation ranges from asymptomatic to severe neurological disorders in immunocompromised individuals. Since the clinical presentation is diverse and depends, among other factors, on the immune status of the host, in the present review, we introduce parasitological, epidemiological, clinical, and molecular biological aspects of infection with T. gondii to set the stage for an in-depth discussion of host immune responses. Since immune responses in humans have not been investigated in detail the present review is exclusively referring to immune responses in experimental models of infection. Systemic and local immune responses in different models of infection are discussed, and a separate chapter introduces commonly used animal models of infection.