间日疟红内期原虫单克隆抗体Ig类别检定及种、期特异性免疫荧光分析

作者用琼脂双向免疫扩散法检定20株抗间日疟红内期原虫杂交瘤McAbs 的Ig类别及IgG亚类。结果显示:其中8株属IgG_1、9株属IgM。用IFA法对此20株杂交瘤McAbs进行种、期特异性免疫荧光的检测和分析,发现它们对间日疟原虫红内期均呈阳性反应,其中 5株与三日疟、6株与恶性疟原虫红内期有交叉反应,而对同种疟原虫子孢子期却均呈阴性反应。     

Structure and expression of the gene for Pv200, a major blood-stage surface antigen of Plasmodium vivax.

Molecular cloning and structure analysis of the gene encoding the Pv200 protein of the Sal-1 strain of Plasmodium vivax revealed an overall identity of 34–37% when the deduced amino acid sequence was compared with the sequences of various major merozoite surface antigens of Plasmodium falciparum, Plasmodium yoelii and Plasmodium chabaudi. When the Sal-1 Pv200 sequence was compared with the corresponding sequence from the Belèm strain of P. vivax, it was found that the two merozoite surface antigens were relatively well conserved with an overall amino acid sequence identity of 81%. A region of 23 repeated glutamine residues, found in the sequence of the Belèm isolate was not found, however, in the Sal-1 sequence. Amino-and carboxy-terminal domains of the Pv200 protein were expressed in the yeast Saccharomyces cerevisiae. Each recombinant protein was shown to react with antibodies in sera from splenectomized Bolivian Saimiri monkeys that had been infected previously with P. vivax, and in human sera from individuals with a history of exposure to vivax malaria. The availability of recombinant DNA-derived Pv200 proteins will now allow a full assessment of their utility in the diagnosis and immunoprophylaxis of the benign tertian malaria associated with P. vivax infection.     

江苏省2015—2019年输入性疟疾疫情及病例诊断

目的 分析江苏省2015—2019年输入性疟疾疫情流行特征及诊断情况,为防止疟疾输入再传播,巩固消除疟疾成果提供科学参考。方法 疟疾疫情资料来自国家传染病监测系统和寄生虫病防治信息管理系统,采用流行病学研究方法,描述2015—2019年江苏省疟疾发病、感染来源和病例三间分布情况,对输入性疟疾病例的诊断以及发病到诊断的时间间隔进行分析。结果 2015—2019年,江苏省共报告1 439例疟疾病例,其中1 436例为境外输入病例, 3例为输血感染病例。1 439例疟疾病例中,恶性疟1 075例（占74.7%）、间日疟63例（占4.4%）、卵形疟233例（占16.2%）、三日疟65例（占4.5%）、同一时间发病的混合感染病例3例（占0.2%）。境外输入性疟疾病例中,1 400例来自非洲（占97.5%）,其他来自亚洲28例（占1.9%）,以及南美洲和大洋洲8例（占0.6%）。江苏省13个设区市均有疟疾病例报告;疟疾病例以35~<50岁男性青壮年居多,每年的1、6和10月出现病例报告高峰。82.3%的病例由医疗机构诊断,由疾控机构诊断的病例占比逐年降低（P<0.05）。2019年发病到确诊超过9 d的病人所占比明显低于前四年（P<0.01）。结论 近5年江苏省疟疾疫情稳定,绝大部分为境外输入性病例,存在少数输血感染;病人就诊到确诊间隔时间有所缩短。继续做好风险人群健康宣教,提高医疗机构诊治能力,防止发生境外输入再传播,是今后疟疾防控工作的重点。     

合肥市1999～2009年间日疟与气象因素关系研究

目的 探讨合肥市1999-2009年度间日疟发病的季节性及其气象因素的关系,为预防和减少合肥市间日疟病例的发生提供理论依据.方法 以1999年1月至2009年12月合肥市间日疟确诊717例病例为研究对象,应用集中度和圆形分布法对疟疾发病进行季节性分析;应用相关分析和多元逐步回归分析合肥市间日疟与各种气象因素之间的关系.结果 合肥市1999～2009年11年累积间日疟发病有明显的季节性(P＜0.01),除了2000年以外,其它各年份发病均有明显的季节性(P2001＜0.05,P其余＜0.01),各年份发病高峰日不相同或不全相同(F=13.8946,P＜0.01).平均高峰日为8月19日,发病高峰日最早出现在1999年7月12日,最晚出现在2002年9月17日,两者相差67d.相关分析表明,合肥市间日疟发病率与月均气温、月均最高气温、月均最低气温、发病前1月、2月平均气温、相对湿度、降雨量、发病前1月、2月降雨量、日照时数呈正相关,与月均气压呈负相关.逐步回归方程为Y=-0.03+5.018×10-4X1+4.968×10-4X2(Y、X1、X2分别代表发病率、最低气温和发病前2月平均气温),R2=0.465.结论 疟疾发病具有明显的季节性,气象因素影响着合肥市间日疟的发病变化,尤其是月均气温和最低气温.在以后的预防工作中应充分考虑其发病的季节特点.     

急性期间日疟患者血浆γ-干扰素和白细胞介素-17水平分析

目的：分析急性期间日疟患者血浆中γ-干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-17（IL-17）水平。方法：用酶联免疫吸附方法检测19名急性期间日疟患者（间日疟组）和20名健康志愿者（对照组）血浆中IFN-γ IL-17水平。结果：间日疟组患者血浆中IFN-γ和IL-17水平分别为（18．86±6．77）pg／ml和（41．46±21．03）pg／ml,均明显高于对照组的（9．99±8．78）pg／ml和（25.23±11．83）pg／ml（P〈0．01）。结论：间日疟患者血浆中IFN-γ和IL-17的水平均升高。     

疟疾双重PCR检测方法的建立和初步应用研究

目的 建立一种适合于我国恶性疟、间日疟和两混合感染地区,一次性检测人体内或蚊体内的恶性疟原虫(P.f.)和间日疟原虫(P.v,)的双重聚合酶链反应(PCR)法。方法 根据疟原虫红内期SSUrRNA基因特定片段,设计合成3条寡核苷酸特异引物,在一个反应体系中,同时检测P.f．与P．v.的双重PCR技术,操作方法按PCR常规。结果 从P.f.和P．v．感染血样中,分别扩增出274bp和412bp的特异片段,检出水平达1-5个虫／μl血,而人基因组DNA、约氏疟原虫、伯氏疟原虫均未见扩增条带;但食蟹猴疟原虫(P．c,)与P.v．相似,在412bp可见扩增条带。经对采自不同疟区发热待查病人的滤纸干血滴和确诊疟疾病人的静脉血检测,344例血样中,检出阴性112例、P.f．109例、P.v.l114例、P．f. P.v.9例,阳性率67．4％;比常规镜检的阳性率66．3％稍高,尤以检出P．f． P．v．感染病例高。分别检测人工感染P.f．与P.v.各10只大劣按蚊的阳性唾腺,均被检出同种的阳性结果。结论一次性检测P．f.DNA与P.v.DNA的双重PCR法,敏感性高,特异性强,稳定性好,具有简化操作、提高工效、降低耗费的优点。对发热待查病人诊断和蚊媒感染疟原虫调查,以及疟疾病原学的检测质控方面,均有实用价值。     

疟原虫核酸检测技术建立及在献血员筛查应用的研究

目的建立血液中疟原虫检测的核酸技术，探讨应用于献血员筛查的效果。方法根据红细胞内期疟原虫ssurRNA编码基因序列，设计合成三条扩增引物。将5份待检血样混合，采用蛋白酶K消化裂解法制备模板，在同一反应体系中扩增恶性疟原虫和间日疟原虫DNA，诊断鉴别恶性疟和间日疟。与厚血膜镜检法比较评价其灵敏度及特异性。结果将3份恶性疟原虫及10份间日疟原虫感染者的血样随机混入5000份无偿献血者血样中，每5份为一个检测单元，采用PCR方法从感染血样中扩增出分别为436bp和341bp的恶性疟原虫及间日疟原虫特异性的DNA片段，并经序列测定证实扩增片段的正确性；10份间日疟患者血样以及3份恶性疟患者血样均被检出，献血者血样PCR检测结果均为阴性，结果与厚血膜方法完全一致。结论所建立的疟原虫核酸检测技术灵敏度高、特异性好，且可以批量处理，提高了检测的效率，能有效降低疟原虫的输血传播，具有很好的推广使用价值。     

PCR检测食蟹猴疟原虫的实验研究

目的 建立一种特异、敏感、简捷的PCR检测食蟹猴疟原虫（P.C）的方法。方法 检测样品来自人工接种感染P.C的阳性猴血膜及滤纸血斑。根据P.C　SSUrRNA基因序列,设计P.C特异引物Pc1和Pc3,用PCR常规操作对P.C DNA模板扩增。同时用多对间日疟原虫（P.V）特异引物对照比较。结果 从 P.C血样中扩增出 425bp特定扩增带,而P.V红内期和子孢子、恶性疟原虫、伯氏疟原虫、人基因组DNA和健康猴血均未见扩增带;敏感度可检测 1.68 ×10-6的原虫感染水平。同时发现P.C对多对 P.V特异引物均出现阳性扩增带,以往一直未被注意。结论 该方法检测 P.C特异、敏感和简捷,提供了鉴别 P.V与 P.C的准确诊断。建议在 PCR的P.V引物设计和特异性的检测过程,把应用P.C　DNA检测列为常规对照,以提高检测质量。     

用双夹心斑点免疫金银染色法检测病人血中疟疾循环抗原

应用抗间日疟原虫和抗恶性疟原虫红内期抗原单克隆抗体建立了双夹心斑点免疫金银染色法和双夹心免疫酶斑点法并用于检测间日疟和恶性疟患者血清中循环抗原。共检测20份间日疟血清和15份恶性疟血清,双夹心斑点免疫金银染色法阳性率分别为90％和93％,可检出最低原虫密度为0.0009％;双夹心免疫酶斑点法阳性率分别为85％和87％,可检出最低原虫密度为0。0075％。与包虫病。弓形虫病和乙肝表面抗原阳性血清无交叉反应,检测60份健康献血员血清,两法分别有5％和8％假阳性。初步结果提示双夹心斑点免疫金银染色法检测疟疾循环抗原敏感度较高,若经过适当改进,有可能用于疟疾现场诊断和流行病学调查。     

间日疟原虫深圳株红内期SSUrDNA基因片段的克隆与序列分析

目的 体外扩增间日疟原虫深圳株红内期小亚单位核糖体核糖核酸编码基因(SSUrDNA)片段，研究其结构与功能。方法 设计一对特异性引物，采用聚合酶链反应(PCR)从间日疟原虫患者血样中扩增出间日疟原虫SSUrDNA片段，以PUC19质粒T载体构建重组子导入大肠杆菌JM109；阳性克隆双酶切鉴定后，双脱氧末端终止法测定序列。结果 间日疟原虫SSUrDNA扩增片段大小为341bp；阳性克隆双酶切及PCR扩增均得到预期大小的片段；序列测定插入片段为341bp，与Sal I株顺序相比，仅在第151位处缺失一个碱基C。结论 成功克隆了间日疟原虫SSUrDNA片段．该序列在间日疟原虫虫株间高度保守。