泛素水解酶22调控丝裂原活化蛋白激酶激酶6基因的转录活性

目的：克隆丝裂原活化蛋白激酶激酶6(mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)基因启动子,研究泛 素水解酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)对MKK6转录活性的调控作用。方法：采用PCR扩增MKK6基因启动 子片段,并以该片段为模板对USP22结合位点进行定点突变,将野生型与突变型启动子片段定向插入荧光素酶表达 载体pGL3-Basic;用重组载体与内参质粒pRL-TK共转染HeLa细胞,行双荧光素酶活性检测以确定其转录活性;利用 染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验观察USP22蛋白与MKK6启动子是否存在直接的结合;下 调USP22表达后,检测MKK6转录活性的变化。结果：成功扩增MKK6启动子及其突变体并构建荧光素酶表达载体; USP22结合位点的突变导致该启动子活性在HeLa细胞中明显降低(P<0.05);USP22与MKK6启动子在细胞中存在直接结 合;抑制USP22的表达导致MKK6转录水平明显下降(P<0.05)。结论：在HeLa细胞中,USP22有效地调控MKK6基因的 转录。     

叶酸修饰麦角甾酮脂质体的制备及体外评价和药动学研究

 目的 研究叶酸修饰的麦角甾-4, 6, 8, 22-四烯-3-酮脂质体的制备工艺,考察其体外释放行为、对肿瘤细胞的毒性和靶向性,并进行体内药动学研究。方法 采用薄膜分散-超声法制备了叶酸偶联麦角甾酮脂质体;用透射电镜、粒径分析仪和高效液相色谱法(HPLC)对其进行表征;以动态透析法测定其体外释药特性及血浆对释放行为的影响;四甲基偶氮唑盐（MTT）法考察叶酸偶联麦角甾酮脂质体对宫颈癌细胞（HeLa）的体外毒性作用,并结合肿瘤细胞摄取实验考察其经叶酸受体介导的靶向性;HPLC测定灌胃后大鼠血药浓度,采用DAS2.0软件计算药动学参数,并进行统计分析。结果 叶酸偶联麦角甾酮脂质体形态呈球形,粒径分布窄,均匀圆整,平均粒径为112 nm,药物包封率达73%;体外释放介质中,药物释放曲线符合Higuchi方程,具有长效缓释性能;在与HeLa的相互作用中,麦角甾-4, 6, 8, 22-四烯-3-酮、麦角甾酮脂质体、叶酸偶联麦角甾酮脂质体的IC₅₀值分别为10,14,5 μg·mL^-1;脂质体剂型显著增加了麦角甾-4, 6, 8, 22-四烯-3-酮的AUC,延长了其在血液循环中的时间。结论 叶酸作为导向分子提高了叶酸偶联麦角甾酮脂质体的靶向性,使叶酸偶联麦角甾酮脂质体主动靶向作用于宫颈癌细胞（HeLa）,降低了给药浓度,制成叶酸偶联麦角甾酮脂质体显著提高了麦角甾-4, 6, 8, 22-四烯-3-酮的生物利用度,可望用于肿瘤的靶向治疗。     

不同性别对青少年特发性脊柱侧凸患者支具治疗生存质量评价的影响

目的：检测男女性别不同对青少年特发性脊柱侧凸（AIS）患者支具治疗生存质量评价的影响。方法：将87例支具治疗AIS患者分为2组,男性41例,女性46例,平均随访时间2.5年。2组患者在年龄、随访时间、支具治疗类型、主弯所在节段、以及支具治疗前、治疗后cobb角和Risser征等比较差异无统计学意义（P〉0.05）,87例患者均填写脊柱侧凸研究会患者问卷-22（SRS-22）量表,比较2组间量表单个维度和单个条目得分的差别。结果：女性治疗满意度维度得分高于男性（P〈0.05）,女性自我形象/外观维度得分也高于男性（P〈0.05）;其中自我形象/外观维度的条目4、6、10,以及治疗满意度维度的条目22的得分比较差异有统计学意义（P〈0.05）;但2组功能/活动度、疼痛和精神健康维度的得分比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：性别不同会影响AIS患者支具治疗生存质量的评测结果,评测患者生存质量时需考虑此因素影响。     

电针配合灸天突穴治疗慢性单纯性咽炎疗效观察

目的观察电针配合灸天突穴治疗慢性单纯性咽炎的临床疗效。方法将122例慢性单纯性咽炎患者随机分为治疗组59例和对照组60例。治疗组采用电针配合灸天突穴治疗,对照组采用药物治疗。疗程结束后比较两组总有效率。结果治疗组总有效率为98.3%,对照组为76.7%,两组比较差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论电针配合灸天突穴是一种治疗慢性单纯性咽炎的有效方法。     

Bioactivity-directed isolation, identification of diuretic compounds from Polyporus umbellatus

Aim of the study

Polyporus umbellatus is a fungus used as a diuretic medicine. The objective of this study was to isolate and elucidate the diuretic constituents of n-hexane, ethyl acetate, n-butanol and water extracts of Polyporus umbellatus and to evaluate their diuretic activity.

Materials and methods

The n-hexane, ethyl acetate, n-butanol and water extracts of Polyporus umbellatus were tested by diuretic experiment of normal rats in metabolic cage. The n-hexane extract and n-butanol extract were prepared separately by the bioassay-guided approach. Three isolated compounds doses (5, 10 and 20 mg/kg BW) were orally administered to normal rats. Water excretion rate, pH and content of Na⁺, K⁺ and Cl⁻ were measured in the urine of saline-loaded rats.

Results

n-Hexane extract (P < 0.05), n-butanol extract (P < 0.05) and three isolated compounds (ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one, ergosterol and d-mannitol) displayed diuretic activity.

Conclusions

The ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one was the strongest diuretic constituent in the three compounds. Ergosterol and d-mannitol were found to be also responsible for duiretic effects in Polyporus umbellatus for the first time. Data show that 20 mg/kg dose of the ergosterol for urine out put became significantly higher than in the control rats, but the ratio of Na⁺/K⁺ almost unaltered in the three doses. The highest dose of the d-mannitol was significant and increased the cumulative urine output. Regarding the electrolyte excretion, data show that the doses 10 and 20 mg/kg produce significant increase for excretion of Na⁺ and Cl⁻. The present results provide a quantitative basis explaining application of Polyporus umbellatus as a diuretic medicine. The result proved that its diuretic effects were also due to the contribution of multi-components in clinical application.     

盐酸千金藤碱逆转肝癌多药耐药性与P-gpATP酶活性的关系研究

目的观察盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochlo-ride,CH)联合FAP对肝癌多药耐药性的逆转作用及其机制。方法 MTT法检测CH和维拉帕米对耐药细胞的无毒剂量;MTT法检测H22/FAP肝癌细胞对多柔比星、顺铂、5-氟尿嘧啶的耐药倍数;生命延长率评价CH联合FAP的药效;定磷法检测P-gp ATP酶活性。结果细胞毒性检测结果提示,CH和VER剂量分别为1.0、0.15 g.L-1时,对H22/FAP细胞的抑制率<10%;MTT检测显示,H22/FAP瘤细胞对多柔比星、顺铂、5-氟尿嘧啶的耐药倍数分别为27.75、10.20、11.20;生命延长率结果显示CH 10、5 mg.kg-1联合FAP组能有效延长小鼠生存时间;动力学分析提示CH能够提高ATP酶活性,Vmax值约为184 nmol.min-1.mg-1,与阳性对照药维拉帕米相近。结论 CH联合FAP能够逆转肝癌多药耐药性,其机制之一可能为CH能够提高P-gpATP酶活性,抑制P-gp外排功能。     

青蒿醇提物对H22肝癌小鼠的抑瘤作用研究

目的：观察青蒿醇提物对H：：肝癌小鼠的体内抑瘤作用。方法：取H。肝癌细胞接种于小鼠右腋皮下,随机分为模型对照组、5-氟尿嘧啶组（5-Fu）及青蒿醇提物125mg／（kg·d）组、500mg／（kg·d）组,5-Fu组肌肉注射给药,其余各组灌胃给药。连续给药8d后,剖瘤称取质量,计算抑瘤率;利用高效液相色谱仪测定青蒿醇提物中青蒿素含量。结果：与模型对照组比较,青蒿醇提物各剂量组均不同程度的抑制肿瘤生长（P〈0．Ot）,青蒿醇提物125me,／（kg·d）组和青蒿醇提物500m/（kg．d）组的抑瘤率分别为54．6％、50．6％;本实验青蒿醇提物中青蒿素含量为0．02％,而在青蒿素抗H。小鼠肝癌试验中,青蒿素在剂量为10mg／（kg·d）时,对H22小鼠肝癌已没有明显的抑制作用。结论：青蒿醇提物对肝癌有明显的抑制作用;除青蒿素以外,中药青蒿中可能存在其它的抗肿瘤成分。     

普洱茶籽的化学成分研究

普洱茶籽乙醇提出物的正丁醇萃取部分,经酸水解后,分离出5种成分,经光谱和化学分析,分别鉴定为二十八烷烃,柚皮素和3种新酯酰基皂甙元22-O-当归酸酯茶皂甙元B,22-O-当归酸酯茶皂甙元E和22-O-当归酸酯茶皂甙元A。     

小檗碱通过激活Nrf2-HO-1/GPX4通路抑制小鼠海马神经元HT22细胞的铁死亡

目的探讨小檗碱对于Erastin诱导小鼠海马神经元HT22细胞的铁死亡的保护作用及其可能机制。方法以HT22小鼠海马神经元细胞为研究对象，分为对照组、Erastin模型组、Erastin+30 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/L BBR组。采用CCK-8法、特异性Fe²⁺荧光探针、荧光染料（DAPI）检测和荧光探针（H2DCFH-DA）检测各实验组细胞的增殖情况、活性铁水平、细胞凋亡和活性氧（ROS）变化。RT-qPCR和Western blot分别检测各实验组细胞的Nrf2、HO-1、GPX4 mRNA和蛋白表达情况。以60 μmol BBR的最适浓度来进一步探究其作用机制，分为对照组、Erastin模型组、Erastin+60 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/L BBR+2 μmol Nrf2抑制剂ML385组。通过使用荧光探针和Western blot检测Nrf2抑制剂（ML385）作用后的活性铁的水平、活性氧含量以及Nrf2、HO-1、GPX4蛋白的表达来验证小檗碱调节的Nrf2-HO-1/GPX4通路对Erastin处理的HT22细胞的保护作用。结果0.5 μmol/L Erastin作用于HT22细胞8 h，细胞存活率与对照组相比显著被抑制（P < 0.05）；同时细胞凋亡、ROS以及活性铁含量增加（P < 0.05）。与Erastin组比较，Erastin+30 μmol/L BBR组和Erastin+60 μmol/L BBR组的细胞存活率明显升高（P < 0.05），同时显著降低细胞凋亡、ROS以及活性铁含量（P < 0.05）。小檗碱增加HT22细胞中Nrf2、HO-1、GPX4基因及蛋白的表达量（P < 0.05）。加入Nrf2抑制剂ML385后，Nrf2-HO-1/GPX4通路被抑制，并且ROS以及活性铁含量升高（P < 0.05）。结论Erastin诱导HT22细胞发生铁死亡，小檗碱抑制Erastin诱导的铁死亡，可能机制是激活了Nrf2-HO-1/GPX4通路。     

从赤魟组织中分离到的福安肽的抗血管生成作用

目的研究从赤魟组织中分离到的福安肽(FAT)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成、人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)诱导的CAM血管生成和小鼠肝癌组织血管生成的影响。方法用CAM法检测FAT对CAM血管生成和CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成的影响;用免疫组化法检查FAT对小鼠肝癌组织内微血管密度(MVD)的影响。结果FAT显著抑制CAM血管生成,当其用量为30,60,120μg/(胚.d)×3时,其抑制率分别为30.8%,50.1%,64.0%;CNE-2Z细胞明显诱导CAM血管生成,当CNE-2Z细胞的接种量为1.9×106细胞/胚时,其血管生成诱导率为30.1%;FAT明显抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成,当其用量为30,60,120μg/(胚.d)×4时,其抑制率分别为35.8%,43.1%,51.3%。FAT明显降低小鼠肝癌组织的MVD,FAT平均微血管数为(8.2±1.3)与对照组的(21.3±2.8)相比,差异显著(P<0.05)。结论FAT有显著的抗血管生成作用,这可能是其抑制小鼠肿瘤生长的重要原因。