载水淬灭荧光探针的单甲氧基聚乙二醇-聚己内酯纳米粒的制备与体外评价

目的 制备载水淬灭荧光探针的单甲氧基聚乙二醇-聚己内酯(mPEG-PCL)纳米粒,并评价其体外特性及稳定性.方法 以聚己内酯(PCL)、mPEG-PCL为材料,采用乳化-溶剂挥发法分别制备包载水淬灭荧光探针P2的PCL纳米粒和具有不同mPEG链长(mPEG5k 、mPEG2k)的mPEGPCL纳米粒,对其体外特性(表面形态、粒径大小及分布)进行表征.P2探针包载于纳米粒中时发出荧光信号,但释放到水中时荧光迅速淬灭,利用P2探针的这一性质,考察各种纳米粒在不同水性溶媒中的稳定性.结果 所制备的mPEGPCL纳米粒形态圆整、表面光滑,粒径约200 nm,分布较窄,多分散系数(PDI)均低于0.06,表面电荷近中性.在不同pH的缓冲介质和模拟生理体液中,所有纳米粒均表现出良好的稳定性,粒径、PDI、荧光强度均未发生明显变化.结论 mPEG-PCL纳米粒具有良好的体外特性与稳定性,以水淬灭探针为指示剂可以快速、方便地进行稳定性研究.     

外科植入引导牙周组织再生载药PLGA/CS/nHA复合膜的制备及表征

目的 制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)/壳聚糖(CS)/纳米羟基磷灰石(nHA)多孔性载药膜,用于外科植入牙周引导组织再生,并评价其体外性能.方法 按照PLGA/CS的质量比将实验设为4组:分别为100/0、90/10、80/20、70/30,采用冷冻干燥法制备PLGA/CS/nHA复合膜,并用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作为致孔剂.依据孔隙率、吸水率、力学性能、体外降解率筛选出最优质量比的PLGA/CS/nHA复合膜作为药物载体,制备克林霉素缓释膜.采用扫描电子显微镜观察PLGA/CS/nHA复合膜的表面形貌,无水乙醇液体置换法检测复合膜的孔隙率,质量干湿率比考察复合膜的吸水率,电子万能材料实验机测试复合膜的湿态力学性能,质量损失考察膜的降解率,紫外分光光度法考察载药膜的体外药物释放特性.体外实验:在载药膜上接种牙周膜成纤维细胞(PLFs),培养1～7 d,采用CCK-8法测定细胞活性和增殖情况.结果 PLGA/CS质量比为90∶10时制备的PLGA/CS/nHA复合膜最为理想,孔隙率为(28.66±1.35)％,吸水率为(108.65±2.27)％,拉伸强度为(2.36±0.04) MPa,断裂伸长率为(203.64±3.89)％,断裂力为(45.98±2.46)N,30 d时降解率为(17.60±0.86)％,最大每日释放量为150 μg/mL,平稳释放药物并维持有效药物浓度时间＞15 d,载药膜能促进牙周膜成纤维细胞的增殖.结论 本研究制备的载药PLGA/CS/nHA复合膜孔隙率适中,体外降解与组织生长相适应,力学测试结果能够创造和维持牙周引导组织生长特定的空间,在一定时间内能持续稳定释放药物.     

聚乙烯醇-卟啉新型纳米颗粒的制备及其光热特性

目的 将一定比例的脱镁叶绿酸引入聚乙烯醇-硫辛酸聚合物中,分析其理化性质及光热特性.方法 采用“一步法”合成聚乙烯醇-硫辛酸-脱镁叶绿酸(PLP)聚合物,激光粒径测定仪测定PLP纳米颗粒(PLPN)的粒径、多分散系数和ζ电位,电镜下观察形态,分光光度法和热成像仪初步探索其体外荧光和光热特性;建立卵巢癌裸鼠模型,行初步的体内实验评价.结果 合成的PLP聚合物在水相中自组装形成规则的球状纳米颗粒,电镜下呈紧密的球状结构,平均粒径、多分散系数和ζ电位分别为(22.92±9.00)nm、0.117±0.056和(-25.43±0.77)mV;PLPN在磷酸盐缓冲液(PBS)中的荧光强度明显低于十二烷基硫酸钠(SDS)溶液(P＜0.05),而近红外光照后温度明显高于SDS溶液(P＜0.05);在荷瘤裸鼠模型中,PLPN可靶向聚集在肿瘤部位,近红外光激发后能明显提高肿瘤部位的温度,并能杀伤肿瘤细胞.结论 PLPN发射红色荧光,能靶向聚集在肿瘤部位并行活体显像,且在体内外均具有显著的光热转换特性,在体内能有效抑制肿瘤的生长.     

时间分辨荧光微球免疫层析技术定量检测人血清胃蛋白酶原Ⅰ的实验研究

目的 研制快速定量检测人血清胃蛋白酶原Ⅰ (pepsinogens Ⅰ,PGⅠ)试纸,并评价试纸性能.方法 以包裹有时间分辨荧光的纳米微球作为标记示踪物,运用免疫层析试纸技术,研制PG Ⅰ检测试纸;考察试纸的检测线性、灵敏度、精密度、与对比试剂的符合率.结果 试纸定量检测的线性良好,方程为Y=0.027 9+0.004 8X,r=0.997 8;灵敏度为0.27 μg/L;批内CV小于10％,批间CV11.03％;与市售PG Ⅰ试剂平行检测489份血清样本,有良好的相关性(YTRFIA =0.856 6Xstrip+7.545 6,R2 =0.989 1,P＜0.01).结论 PG Ⅰ时间分辨荧光纳米微球免疫层析试纸操作简单、快速、经济、可定量,满足临床检测血清PG Ⅰ的需求.     

以冻干骨为平台重建组织工程化关节软骨的研究

目的:探索在兔冻干异体骨关节平台上利用组织工程的方法再造人工关节软骨的可行性。方法:实验分成四组,运用组织工程方法将不同构成的同种异体兔软骨细胞-支架材料复合物种植于兔冻干异体骨关节平台上,植入实验兔体内,3月后取材观察体内成软骨情况。结果:仅种植兔软骨细胞的冻干骨关节支架上未见新生软骨形成。粘合有种植兔软骨细胞的PLGA膜片的冻干骨支架关节腔内见新生类软骨样物出现。自体软骨层孔洞缺损模型使用软骨细胞-PLGA膜片复合物可修复软骨缺损。结论:软骨细胞-PLGA膜片复合物实验动物关节内可形成软骨样物;但在冻干骨关节平台上尚不能形成有功能意义的关节软骨层。     

磁转染MUC1/Y基因入树突状细胞抗膀胱肿瘤的免疫效应研究

目的：研究体外磁转染人MUC1/Y基因至人树突状细胞（DC）的可行性,以及在体外诱导特异忡抗MUC1／Y膀胱癌的免疫效应。方法：以葡聚糖磁性纳米颗粒（DMN）作为载体,在多聚赖氨酸（PLL）的辅助下,通过静电作用结合MUC1／Y基因的真核表达载体pEGFP-C1—MUC1／Y．在铜-硼-锡磁块的固定磁场作用下转染至人DC中,荧光显做镜下以及流式细胞仪观察其转染效率;再将这种转基因DC与自体T细胞共培养,观察其致敏的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对MUC1／Y特异性抗膀胱癌（膀胱肿瘤BIU87细胞系）的杀伤活性,即分别用LDH释放法检测CTL杀伤活性和透射电镜观察CTL诱导靶细胞凋亡情况：ELISA法测定基冈修饰后的DC刺激自体T细胞分泌IFN-γ了的能力。结果：pEGFP-C1／-MUC1／Y转染效率为15％左右,荧光显微镜下可观察到明显绿色荧光蛋白的表达;与自体T细胞混合培养后能诱导出湿著的MUC1/Y特异性的CTL对BIU87细胞的杀伤实验表明T-DC-MUC1的杀伤活性约为52％,显著高于埘照组T-DC诱导的CTL;住透射电镜下也可以清楚的观察到部分BIU87膀胱肿瘤细胞出现了细胞核核仁消失,染色质浓集于核膜周围等早期凋亡表现;基因修饰后的DC能刺激自体T细胞分泌高水平的IFN-γ,与未转染的DC相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：葡聚糖磁性纳米颗粒（DMN）在固定磁场的作用下成功将MUC1/Y基因转入DC,并可有效诱导出特异性的抗MUC1/Y膀胱癌的免疫效应。     

携载rhBMP-2微球的新型可注射自凝固复合人工骨的制备及特性研究

[目的]制备一种具有良好降解性和成骨活性、可注射的自凝固新型骨修复材料。[方法]制备携载rhBMP-2的聚乳酸与聚乙醇酸共聚物（PLGA）微球，并将其与rhBMP-2／磷酸钙骨水泥（CPC）复合，制备出rhBMP-2／PLGA微球／CPC复合人工骨。探讨了材料的特性，包括形貌、固化时间、抗压强度及反映材料体外降解速度的指标一体外降解液Ca、P浓度变化，测定复合材料rhBMP乏的释药速度及体外诱导MSCs细胞成骨分化的能力。[结果]与单纯CPC-rhBMP-2相比，复合材料的固化时间少量增加，抗压强度下降明显。体外降解速度及体外释药明显提高，释放的rhBMP-2具有骨诱导活性。[结论]rhBMP-2／PLGA微球／磷酸钙骨水泥新型复合人工骨是具有良好应用前景的骨修复材料。     

The protective effect of Kombucha against silver nanoparticles-induced toxicity on testicular tissue in NMRI mice

Silver nanoparticles (SNPs) can pass from the cell membrane and testicular blood barrier due to their small size, and by increasing oxidative stress they cause disorder in the male reproductive system. Kombucha is a traditional fermented drink with detoxification and potent antioxidant properties. We aimed to examine the protective effect of Kombucha against the damages due to SNPs on the testis tissue. In this experimental study, NMRI mice were randomly separated into four groups (n = 6), namely control (distilled water), SNPs (500 mg/kg), Kombucha extract (9 ml/kg) and SNPs + Kombucha, and were treated with gavage for 35 days. A significant decrease in testosterone level and total antioxidant capacity, and a significant increase in malondialdehyde concentration was observed in the SNPs group in comparison with the control group. Histological studies on the testis of mice treated with SNPs showed vacuolation, decrease in generational epithelium thickness, seminiferous tubules diameter, testis volume and the number of spermatozoa in lumen of the seminiferous tubule and increase in the volume of interstitial space while the mentioned parameters were improved in the SNPs + Kombucha group compared to the SNPs group. Kombucha reduces the adverse effects of SNPs on testis tissue and improves the function of the male reproductive system.     

曲安奈德PLGA微球对兔上腭部创面瘢痕形成影响的实验研究

目的:探讨曲安奈德PLGA微球对创面瘢痕愈合中瘢痕生成的抑制作用,研究局部应用曲安奈德的最佳给药途径。方法:3组共24只兔的上腭部创面模型,分别应用曲安奈德PLGA微球以及曲安奈德悬浊液,在瘢痕形成不同时间后切取瘢痕标本进行HE、VG染色及酶组织化学染色并电镜观察其组织形态学改变来分析曲安奈德不同给药途径的差异。结果:三组兔上腭创面愈合时间不同,表面颜色、质地不一样。电镜、常规染色以及免疫组织化学染色皆说明曲安奈德PLGA微球有明显的瘢痕抑制作用,且效果高于曲安奈德悬浊液。结论:曲安奈德PLGA微球能抑制瘢痕的增殖过程,使瘢痕组织纤维化过程明显减轻。合并手术一次性给药治疗瘢痕有很好的临床价值。     

负载姜黄素的玉米醇溶蛋白-多糖纳米颗粒的制备及生物活性研究

目的 制备负载姜黄素的玉米醇溶蛋白-多糖纳米颗粒及评价其生物活性.方法 以反溶剂法和静电沉积法制备负载姜黄素的核/壳型复合纳米颗粒,以扫描电镜观察形貌,DPPH·法测定抗氧化活性,平板抑菌试验测定抗菌活性,模拟体外消化试验测定消化吸收率.结果 纳米颗粒为表面光滑的球形,平均粒径为133 nm;姜黄素纳米颗粒对DPPH·自由基的清除率明显高于姜黄素乙醇溶液,清除率分别为(13.89±0.69)、(16.73±0.097) μg/mL;纳米颗粒的抑菌效果较差;纳米颗粒包埋的姜黄素消化吸收率提高了4倍.结论 纳米颗粒包埋的姜黄素具有较高的抗氧化活性及消化吸收率,在功能性食品及药物方面有良好的应用前景.