Increase in Beating Rate of Cultured Chick Cardiac Myocytes by Ethanol and Inhibition of the Increase by Antiarrhythmic Drugs

Drinking alcohol sometimes causes cardiac arrhythmia, but the precise mechanism remains unknown. To study the mechanism, we investigated the effects of ethanol exposure on the beating rate of cultured chick cardiac myocytes. Primary cultures of cardiac myocytes were prepared from the ventricles of 14-day-old chick embryos and then treated with ethanol which, in the range of 0.3 to 1.5 vol%, increased the beating rate in a dose-dependent manner. Ethanol (0.6 vol%) caused an increase in the beating rate, but disopyramide (5 μ g/ml) and procainamide (10 μ g/ml), Na⁺ and K⁺ channel blockers, inhibited the increase in the beating rate significantly. Neither lidocaine (5 μ g/ml) nor mexiletine (2 μ g/ml), Na⁺ channel blockers, nor calcium antagonist verapamil (5 ng/ml) inhibited the increase. However, tetraethylammonium chloride (ranging from 15 to 30 mmol/1), a K⁺ channel blocker, inhibited the increase. These findings indicate that ethanol increases the beating rate of cultured chick cardiac myocytes via the activation of the K⁺ channel. This experimental model may be useful in studying the effect of ethanol on the K⁺ channel.     

胰岛素样生长因子-1对血管平滑肌细胞磷酸酶PHLPP蛋白表达的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及氧化低密度脂蛋白(oxLDL)促血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的细胞内信号转导机制.方法:体外培养的免血管平滑肌细胞分3组处理,以细胞计数、噻唑盐比色法测定细胞增殖能力,Westem Blot定量磷酸酶PHLPP蛋白表达水平.结果:IGF-1(100 μg/L)使VSMC计数及MTF比色A值分别增至对照组的3.02倍及3.06倍.oxLDL(50 μg/mL)使上述两值分别增至对照组的2.03倍及2.91倍.两者均可以显著抑制PHLPP蛋白表达水平.结论:IGF-1及oxLDL的促VSMC增殖作用可能与抑制PHLPP蛋白的负性调节细胞生长作用有关.     

蛋白质非酶糖化在丙酮醛促进心肌细胞缺氧／复氧损伤敏感性增加中的作用

目的：观察蛋白质非酶糖化是否会增加心肌缺氧/复氧损伤的敏感性。方法常规培养H9C2细胞,分别给予PBS（对照组）、丙酮醛（200μmol/L）、丙酮醛（200μmol/L）＋氨基胍（100μmol/L）孵育6 d后接受缺氧/复氧处理,以MTT法测定心肌细胞存活率,微量酶活性测试法检测乳酸脱氢酶（LDH）释放变化,比色法检测丙二醛（MDA）含量,并通过免疫组织化学检测心肌细胞终末糖化晚期产物（AGEs）表达。结果缺氧/复氧降低细胞存活率,增加心肌细胞MDA含量和LDH释放;而丙酮醛处理6 d的心肌细胞的AGEs含量明显增加,并对缺氧/复氧损伤的敏感性增加,与PBS孵育细胞经缺氧/复氧处理后相比, MDA含量和LDH释放显著上升,存活率明显下降（P＜0.01）;MGO引起的上述变化可以被糖化抑制剂氨基胍部分阻断（P＜0.05）。结论蛋白质非酶糖化是糖代谢中间产物丙酮醛增加心肌细胞对缺氧/复氧损伤敏感性的重要机制。     

血小板衍生生长因子-BB通过转化生长因子-β信号系统调节大鼠血管平滑肌细胞内p21~(WAF1)表达

目的 探讨血小板衍生生长因子(PDGF)-BB是否通过诱导转化生长因子(TGF)-β_1,表达及其信号系统调节p21~(WAF1)表达.方法 采取8～9周龄雄性Sprague-Dawley大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)进行体外培养,分为对照组、中和性抗TGF-β_1抗体组(20μg/ml,抗体组)、PDGF-BB组(40 ng/ml)、PDGF-BB+中和性抗TGF-β_1抗体组(PDGF-BB+抗体组),实验时间为48 h.逆转录酶-聚合酶链式反应检测TGF-β_1mRNA的表达,ELISA方法检测TGF-β_1蛋白的表达.Western blot检测p21~(WAF1)及TGF-β信号系统下游蛋白表达,后者包括TGF-β_1I类受体(在VSMC内表现为ALK-5)、Smurf2、pSmad2/3、Smad4、Smad7.结果 PDGF-BB组的TGF-β_1 mRNA(24 h)和TGF-β_1(48 h)蛋白分子表达水平分别为(447.716±23.911)和(0.309±0.034)ng/ml,明显高于对照组(250.435±17.869)和(0.104±0.013)ng/ml(P均＜0.01).p21WAF1蛋白表达在对照组0.621±0.046和抗体组0.657±0.058之间差异无统计学意义,PDGF-BB组表达仅为0.204±0.033,与对照组和抗体组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01),PDGF-BB+抗体组表达为0.530±0.043,与对照组和抗体组相比差异均有统计学意义(P均＜0.05),与PDGF-BB组比较差异亦有统计学意义(P＜0.01).PDGF-BB组ALK-5 0.634±0.060、pSmad2/31.894±0.184、Smad4 1.129±0.136及Smurf2 0.559±0.047的表达水平分别高于对照组和抗体组0.288±0.049和0.300±0.047、0.972±0.096和0.887±0.059、0.665±0.055和0.709±0.058、0.158±0.040和0.224±0.064(P均＜0.01),对照组与抗体组之间差异无统计学意义,以上蛋白PDGF-BB+抗体组的表达分别比PDGF-BB组低了(85±9.5)%、(79±12)%、(91±17)%和(84±5)%.Smad7蛋白表达在对照组0.461±0.035与抗体组0.458±0.031之间差异无统计学意义,PDGF-BB组0.160±0.028与对照组和抗体组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01),PDGF-BB+抗体组0.375±0.039与PDGF-BB组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 PDGF-BB调节p21~(WAF1)的表达部分通过TGF-β_1及其信号系统.     

Caspase-3在慢性心力衰竭大鼠心肌重塑中动态表达及意义

目的探讨慢性心力衰竭大鼠心肌内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）表达及意义。方法40只雄性Wistar大鼠随机分为四组,假手术组、心力衰竭1d组、7d组、14d组各10只。以缩窄大鼠腹主动脉,造成左心室压力负荷,制备慢性心力衰竭大鼠模型。观察和比较成模后1d、7d、14d及假手术组左心室肌重量指数,Masson染色后对比心肌胶原含量,免疫组化法测定心肌中caspase-3蛋白表达水平。结果腹主动脉缩窄术后各组大鼠均发生左室重塑和纤维化,左心室肌重量指数、胶原含量及caspase-3蛋白表达均明显高于假手术组;caspase-3于正常心肌内表达较少,而在心力衰竭后心肌内表达则明显增多,且随着心力衰竭程度的加重而表达增多。结论caspase-3可能参与了大鼠压力负荷性心肌重塑的发生和发展,其水平的高低与慢性心力衰竭的严重程度密切相关。     

阿米洛利对动物心肌动作电位的影响

目的 :研究阿米洛利对心肌动作电位的作用。方法 :用标准微电极技术记录家兔窦房结及豚鼠乳头状肌细胞动作电位。结果 :10 μmol/L、10 0 μmol/L阿米洛利均可降低动物乳头状肌动作电位幅度 ,延长动作电位时程 ;10 0 μmol/L阿米洛利还可降低窦房结起搏细胞最大除极化速率 ,使静息电位轻度正移。 结论 :阿米洛利可降低心肌细胞自律性 ,延长复极。     

高磷对血管平滑肌细胞钙化的影响及阿托伐他汀的干预效应

目的 观察高磷对大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）钙化的影响，及探讨阿托伐他汀在RVSMC钙化中的保护作用及相关机制。 方法 用不同的试剂培养RVSMC，分别为正常磷组（Pi 1.4 mmol/L）、高磷组（Pi 2.0 mmol/L、2.6 mmol/L）、凋亡抑制组（Pi 2.6 mmol/L+ZVAD-FMK 0.1 μmol/L、Pi 2.6 mmol/L+ZVAD-FMK 1.0 μmol/L、Pi 2.6 mmol/L+ZVAD-FMK 2.0 μmol/L）和阿托伐他汀组（Pi 2.6 mmol/L+Statin 1 nmol/L、Pi 2.6 mmol/L+Statin 10 nmol/L、Pi 2.6 mmol/L+Statin 100 nmol/L）。甲O-酚酞络合酮方法测定平滑肌细胞钙含量，BCA法测定蛋白含量，用蛋白含量标化钙含量，同时以von Kossa染色观察细胞钙化情况。ELISA方法测定不同时间各组细胞的相对凋亡量。 结果 ⑴培养第3、 6、9 天时，Pi 2.0 mmol/L、Pi 2.6 mmol/L组与Pi 1.4 mmo1/L组相比，RVSMC钙沉积较多（P ＜ 0.05）。⑵培养第6 天时，Pi 2.6 mmol/L+ZVAD-FMK 1.0 μmol/L、Pi 2.6 mmol/L+ZVAD-FMK 2.0 μmol/L组与Pi 2.6 mmol/L组相比，RVSMC钙沉积较少（P ＜ 0.05）；Pi 2.6 mmol/L+Statin 10 nmol/L、Pi 2.6 mmol/L+Statin 100 nmol/L组与Pi 2.6 mmol/L组相比，细胞钙沉积较少（P ＜ 0.05）。von Kossa染色显示Pi 2.6 mmol/L组细胞有大量黑色颗粒沉积，而Pi 2.6 mmol/L+Statin 100 nmol/L组较少。⑶培养第3、6、9天时，Pi 2.6 mmol/L与Pi 1.4 mmol/L相比，细胞相对凋亡量较多（P ＜ 0.05）；培养第12、24小时，Pi 2.0 mmol/L、Pi 2.6 mmol/L组与Pi 1.4 mmol/L组相比，细胞相对凋亡量较多（P ＜ 0.05）；培养第6 天、第24小时时，Pi 2.6 mmol/L+Statin 10 nmol/L、Pi 2.6 mmol/L+Statin 100 nmol/L与Pi 2.6 mmol/L组相比，细胞相对凋亡量较少（P ＜ 0.05 )。 结论 高磷培养可诱导RVSMC体外钙化。阿托伐他汀对高磷诱导的RVSMC钙化有保护作用，此作用可能与其降低RVSMC凋亡有关。     

淫羊藿苷对兔心室肌细胞L-型钙电流的影响

目的:利用膜片钳技术研究淫羊藿苷(ICA)对兔单个心室肌细胞L-型钙电流(ICa,L)的影响。方法:采用酶解法分离兔单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术观察10,20,40μmol/L的ICA对心室肌细胞ICa,L的作用。结果:①10,20,40μmol/L的ICA使兔心室肌细胞ICa,L最大峰电流密度从(15.81±1.23)pA/pF分别降至(11.27±0.89)pA/pF,(9.48±0.85)pA/pF和(6.87±0.81)pA/pF(n=6,P<0.05),抑制率分别为28.7%,40.0%和56.5%;ICA使ICa,L的电流-电压曲线上移,但不改变其基本形状;②20μmol/L ICA可以使钙通道稳态失活曲线左移并可减慢L-型钙通道失活后的恢复过程。结论:ICA对ICa,L具有浓度依赖性阻滞作用,这可能是其抗心律失常的重要机制之一。     

前列腺素F2α诱导心肌细胞肥大效应的实验研究

目的观察前列腺素F2α（PGF2α）对心肌细胞内活性氧（ROS）的产生及其促心肌细胞肥大的作用，探讨ROS在PGF2α诱导的心肌细胞肥大的信号通路中的作用。方法细胞内ROS水平用ROS敏感的荧光探针（DCFH—DA）反映，心肌细胞肥大通过细胞内蛋白含量及细胞的直径大小来确定。结果用1nmol／LPGF2α、10nmol／LPGF2α、100nmol／LPGF2α诱导心肌细胞，其细胞内DCF—DA荧光强度值分别比对照组增加38、99％、61．76％、93．55％（F=195．69，P〈0．01），表明PGF2α可剂量依赖地诱导培养大鼠心肌细胞内ROS的产生；其蛋白含量分别比对照组增加39．51％、69．93％、139．06％（F=74．014，P〈0．01），其细胞直径分别比对照组增加29．02％、60．79％、127．40％（F=721．02，P〈0．01），表明PGF2α可剂量依赖地诱导培养大鼠心肌细胞的肥大。讨论PGF2α可剂量依赖地诱导培养大鼠心肌细胞内ROS的产生与心肌细胞的肥大。     

Reduction of metmyoglobin in myocytes

Myocytes from rat heart ventricle rapidly reduce intracellular metmyoglobin back to the oxygen-binding form at an initial rate of 0.30 ± 0.03 nmol/min/10⁶ cells, and the reaction is complete in about 10 min. The results indicate that the heart has a considerable capacity to maintain its myoglobin in the ferrous state, and the reaction rate is similar to the analagous methemoglobin reduction rate in erythrocytes. Metmyoglobin reduction in myocytes can be stimulated by including the vitamin K derivative, menadione, in the incubation mixture, and it can be inhibited by adriamycin or dicumarol. These latter results raise the possibility that the enzyme DT diaphorase may be involved in metmyoglobin reduction in vivo.