miR-122表达载体的构建及其对HepG2.2.15细胞增殖的抑制作用

目的构建miR-122表达载体并检测其表达对HepG2.2.15细胞恶性表型的逆转作用。方法以HepG2.2.15细胞基因组DNA为模板,PCR扩增miR-122前体cDNA序列,以质粒pSilencer3.1-H1 neo为母本,构建miR-122表达载体将其转染HepG2.2.15细胞。表达后,利用ELISA检测HepG2.2.15细胞HBV复制和表达的变化,利用CCK8检测细胞增殖的变化。结果构建的miR-122表达载体可在HepG2.2.15细胞中表达。转染后HepG2.2.15细胞中HBV复制、表达以及细胞增殖均被抑制。结论 miR-122表达载体可在HepG2.2.15细胞中有效表达,其表达可抑制HBV复制、表达以及细胞增殖。     

微小RNA在急性肺损伤中基因研究进展

微小RNA﹙microRNAs,miRNAs﹚是由21～23个核苷酸组成的非编码RNA,作为一种基因表达的负性调节因子,可以调控其靶mRNA稳定性及翻译效率。急性肺损伤﹙acute lung injury,ALI﹚/急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）指创伤、感染、休克等疾病导致的进行性缺氧性呼吸衰竭,主要的病理生理改变是弥漫性肺毛细血管内皮-肺泡上皮屏障功能的破坏及炎症损害,ALI/ARDS是临床常见危重症,病死率高,发病机制非常复杂,且不完全明确,近年来大量关于疾病与miRNA关系的文献报导,miRNA 是众多基因的关键调节者,在细胞凋亡过程中起关键作用,从而影响疾病的发生及展。本文对近年来国内外有关miRNA在急性肺损伤中的作用作简要阐述。     

食管癌组织miR-133表达对其癌细胞生长的影响

[目的]探讨食管癌组织中miR-133表达对其癌细胞生长的影响.[方法]采用RT-PCR法检测miR-133在食管癌组织中的表达.利用脂质体Lipofectamine 2000将miR-133 mimics、anti-miR-133及其分别相应的对照转入食管癌细胞中,RT-PCR检测miR-133的表达,MTT法检测细...     

酿酒酵母S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的　构建S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因工程菌 ,为酶促转化法生产S 腺苷甲硫氨酸奠定基础。方法　应用PCR技术从S 腺苷甲硫氨酸高产酿酒酵母染色体DNA中扩增得到S 腺苷甲硫氨酸合成酶基因sam2 ,将其克隆至表达载体pT7 7,转化大肠杆菌 ,1%琼脂糖电泳比较大小 ,筛选重组子。结果　SDS PAGE显示重组菌S 腺苷甲硫氨酸合成酶亚基分子量约为 4 2KDa ,平均表达量约占菌体总可溶性蛋白的 4 2 % ,酶活达到 14 .1U/g湿菌体 ,比宿主菌酶活提高 15 .7倍。结论　酿酒酵母SAM合成酶基因在大肠杆菌中高效表达 ,重组菌已具有初步的工业化应用价值     

益生菌联合肠内营养对急性胰腺炎患者肠道菌群及外周血miR-155的影响

目的 探讨益生菌联合肠内营养对急性胰腺炎患者肠道菌群及外周血miR-155的影响。 方法 选取2016年6月至2018年12月河北医科大学第二医院消化内科收治的92例急性胰腺炎患者作为研究对象，根据随机数字表法分为观察组（n=46）和对照组（n=46），对照组在常规治疗基础上给予肠内营养治疗，观察组在对照组基础上给予双歧杆菌乳杆菌三联活菌片，观察两组患者治疗前后肠道菌群、炎性介质及血清miR-155变化，比较两组患者治疗后胃肠道功能恢复情况。结果 治疗后，观察组双歧杆菌、乳酸杆菌增加数量，肠球菌、大肠埃希菌减少数量，血清CRP、IL-6、IL-17、TNF-α、miR-155降低水平均显著高于对照组（P<0.05）；观察组患者胃肠生活质量量表（GIQLI）评分高于对照组，腹胀消失时间、腹痛消失时间、肠鸣音恢复时间、血清淀粉酶恢复正常时间均少于对照组（P<0.05）。结论 益生菌联合肠内营养治疗急性胰腺炎可调节肠道菌群平衡，降低血清miR-155水平，缓解炎性反应，促进肠道功能恢复。     

菊花脑芳樟醇合酶基因CnTPS1的克隆与原核表达分析＊

目的 克隆菊花脑芳樟醇合酶基因CnTPS1的全长编码序列，利用原核系统表达融合蛋白，为进一步研究该基因在菊花脑萜类合成中的功能提供理论依据。方法 以菊花脑基因组数据为基础，设计特异性引物，PCR扩增CnTPS1的全长编码序列，利用生物信息学分析软件分析序列特征。利用qRT-PCR技术分析CnTPS1基因在不同组织中的基因表达量。构建原核表达载体，体外诱导目的蛋白表达。结果 CnTPS1编码序列全长1749bp，编码582个氨基酸；基因表达模式分析表明该基因在茎和管状花中表达量较高；原核表达系统能诱导出67.58kDa大小的蛋白。结论 首次从菊花脑中克隆得到一个芳樟醇合酶基因CnTPS1，运用生物信息学方法对其编码蛋白的理化性质、结构特征等进行了分析预测，分析了该基因的组织表达模式，并在原核表达系统中成功诱导表达出目标蛋白，这些结果将为菊花脑萜类合酶基因的功能以及萜类物质生物合成途径的解析提供理论依据。     

MicroRNA与肝癌的相关研究

肝癌是消化系统的常见恶性肿瘤,早期诊断困难,治疗手段有限,总体预后较差。近年来随着对MicroRNA深入研究,人们逐渐意识到MicroRNA与肝癌的发生、发展、转移等密切相关,并且在肝癌的早期诊断、治疗及预后评估中有着广阔的前景。本文就近年来关于MicroRNA与肝癌的相关研究作一概述。     

高尔基体糖蛋白73的表达特征及其对肝癌与肝硬化的鉴别诊断价值

目的 研究血清高尔基体蛋白73 (GP73)的表达特征及其在肝癌与肝硬化鉴别诊断中的临床价值. 方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测80例原发性肝癌、65例肝硬化和50名健康体检者血清GP73含量,同时用电化学发光法平行测定血清AFP.多组比较采用Kruskal-Wallis检验,两组比较采用Mann-Whitney检验,ROC曲线分析检测效能并确定其临界值,敏感度、特异度比较用配对x2检验,GP73表达与临床参数的关系用Spearman等级相关分析.结果 肝癌组GP73浓度中位数为282.0 μg/L,高于肝硬化组(211.8 μg/L)和健康对照组(58.3 μg/L),差异有统计学意义(H=93.30,P＜0.01).GP73、AFP鉴别肝癌与肝硬化患者的最佳临界值分别为318.1 μg/L和13.4μg／L时,GP73的敏感度为45.0％(36／80),低于AFP的65.0％ (52/80),x2=8.02,P＜ 0.05;GP73的特异度为83.1％ (54/65),低于AFP的87.7％ (57/65),x2=0.27,P＞0.05 ; GP73诊断肝癌的ROC曲线下面积为0.65 (95％可信区间0.54～0.72),与AFP曲线下面积0.75(95％可信区间0.67 ～ 0.83)相比,差异无统计学意义(Z=1.88,P＞ 0.05).血清GP73与肝硬化、血管浸润及肿瘤分期相关(r值分别为0.27、0.29、0.27,P值均＜0.05),与性别、年龄、AFP＞13.4 μg/L、肿瘤大小和远处转移无相关关系(r值分别为0.13、0.10、0.03、0.18、0.04,P值均＞0.05).结论 在肝癌与肝硬化的鉴别中,血清GP73与AFP的诊断效能相似,但AFP的敏感度优于GP73.血清GP73的过表达可能与肿瘤的负荷和侵袭性有关.     

乙肝病毒X基因对肝癌细胞表达RhoC的影响

目的：探讨X基因对肝癌细胞表达RhoC基因的影响。方法：用定向克隆的方法构建X基因的真核表达载体pcDNA3.1-X，脂质体转染HEPG2细胞;潮霉素选择培养稳定表达X基因的HEPG2-X细胞;免疫组化鉴定HEPG2-X细胞RhoC蛋白表达。结果：构建的真核表达载体pcDNA3.1-X在HEPG2细胞中有稳定表达，HEPG2-X细胞表达RhoC蛋白增强。结论：体外条件下，X基因可促进肝癌HEPG2细胞RhoC表达增强。这可能与肝癌的侵袭、转移有关。