乳酸乳球菌表达弓形虫棒状体蛋白1(ROP1)

目的　在乳酸乳球菌中表达ROP1抗原蛋白。方法　从质粒 psk -ROP1中以BamHⅠ和SalⅠ双酶切出ROP1基因 ,置换构建好的大肠杆菌 -乳酸乳球菌穿梭表达质粒L2 -PsP30T中的P30基因 ,电转化感受态乳酸乳球菌 ,以Westernblotting鉴定ROP1在乳酸乳球菌中的表达。结果　表达产物中有一约 4 3kDa的蛋白带能被弓形虫病人血清识别。结论　ROP1在乳酸乳球菌中得到了表达     

HBV核心和前S1融合蛋白在大肠杆菌中的表达及真核表达载体的构建

目的:表达可用于乙型肝炎治疗性疫苗研究的乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)与前S1抗原(PreS1)氨基酸(AA)3～55肽段融合蛋白。方法:以原核表达载体pET-11d表达HBV融合蛋白,采用免疫印迹技术和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析表达产物的抗原性。构建以CMV为启动子的表达HBV核心和前S1融合蛋白的真核表达载体。结果:HBV融合蛋白在大肠杆菌中有效稳定表达,表达产物具有核心抗原和前S1特异杭原性。成功构建了pCI-CS1真核表达载体。结论:本方法有效表达了HBV融合蛋白,表达产物具有特异抗原性。融合蛋白的表达及真核表达载体的构建为进一步进行HBV CS1融合蛋白和基因疫苗研究奠定了基础。     

microRNA介导的基因工程病毒减毒株研究进展

为了安全有效地进行基因治疗,需要把转染的基因限制在特定组织中表达。应用miRNA调节病毒基因表达是一个新方法。在miRNA介导的转基因表达系统中,可以将与miRNA互补的靶序列串联插入病毒基因3’非编码区域,导致在miRNA高表达细胞中抑制病毒的表达。我们总结了miRNA介导的病毒减毒株的应用。     

人组织因子途径抑制因子在毕赤酵母中高拷贝表达

目的 构建高拷贝表达重组人组织因子途径抑制因子的毕赤酵母并对蛋白表达条件进行初步优化,为相关研究奠定基础.方法 将PCR扩增得到的TFPI cDNA片段与表达质粒pPIC9K连接构建重组质粒rhTFPI-pPIC9K,采用PCR方法及DNA测序对其进行鉴定.将重组质粒转化酵母细胞GS115,利用G418抗性实验筛选含有...     

Diagnostic value of RASSF1A hypermethylation in colorectal cancer: a meta-analysis

Purpose

Ras association domain family 1 isoform A (RASSF1A), a member of Ras association domain family, plays an important role in tumorigenesis. The goal of our meta-analysis was to assess the diagnostic value of RASSF1A hypermethylation in colorectal cancer (CRC).

一种含多个CCP结构域的新型基因的克隆及生物学特性初探

目的克隆并分析新型基因CCP22，研究其结构及初探生物学特性。方法常规分子克隆、生物信息学分析、Western blot、RT—PCR。结果利用酵母双杂交技术从人乳腺文库中分离到一种含有22个补体调控蛋白（complement control protein，CCP）序列元件的新基因，命名为CCP22。生物信息学分析发现，该基因定位于人染色体9q31．2-32，共15个外显子，基因编码序列全长4494bp，编码1497个氨基酸。将CCP22基因全长编码序列克隆于真核载体中，该表达载体转染人胚肾细胞293T后获得的表达产物经Western blot证实CCP22属于分泌蛋白。将CCP22与绿色荧光蛋白（EGFP）标签融合后证实CCP22主要分布在细胞核外。Northern blot证实，内源性CCP22 mRNA转录本全长约6kb。RT-PCR检测表明，CCP22在正常乳腺细胞株中高表达，而在多种乳腺肿瘤细胞株中不表达或低表达。结论CCP22在乳腺肿瘤发生发展中可能发挥重要作用。     

中国强毒钩端螺旋体膜蛋白基因的真核表达及基因免疫

目的　检测含有强毒赖型钩体OmpL1外膜蛋白基因的 2个重组质粒pBC OmpL1和pcDNA3 OmpL1在哺乳动物细胞中的表达 ,及其作为DNA疫苗诱导小鼠体液免疫应答的效果。方法　采用脂质体转染法 ,以重组质粒转染COS7细胞 ,通过抗性标志筛选稳定转染入质粒的细胞 ,RT PCR和Westernblot检测被转染细胞OmpL1基因的表达情况。然后 ,将重组质粒以肌注法免疫BALB c小鼠 ,每 2周 1次 ,共 3次 ,ELISA检测小鼠的体液免疫应答水平。结果　RT PCR结果显示 ,重组质粒转染组在约 1kb处出现特异的扩增带 ;Westernblot检测显示 ,重组质粒转染组总蛋白样品在相对分子质量 (Mr)为 33.5× 10 3 处出现特异的蛋白带 ,而空质粒载体转染组均没有此相应的DNA或蛋白质条带。两质粒第 2次免疫小鼠 2周后 ,10 0 μg重组质粒pBC OmpL1和pcDNA3 OmpL1DNA免疫组产生了效价为 1 196 83的高滴度抗体 ,注射 5 0 μgpcDNA3 OmpL1+5 0 μgpcDNA3的小鼠产生滴度为 1 6 5 6 1较高的抗体 ,第 3次免疫 2周后 ,抗体水平下降。结论　两重组质粒者均能在体外培养的哺乳动物细胞中表达钩体OmpL1蛋白质 ,以其免疫小鼠后 ,均诱导产生高滴度的特异性抗体 ,其效价与全钩体疫苗相当。     

MEK5/ERK5在大鼠脊髓损伤修复过程中表达水平动态变化及临床意义

目的 以大鼠为模型观察脊髓损伤修复过程中MEK5/ERK5(mitogen extracellular signal-regulated kinase 5/extracellular signal kinase 5)表达水平变化及临床指导意义.方法 将成年健康雄性大鼠随机分为实验组和假手术组,应用western-blotting蛋白质印迹技术和Real-Time PCR实时荧光定量检测技术分别检测脊髓损伤后1天,3天,7天,14天后MEK5、ERK5两种蛋白及其mRNA表达水平动态变化情况,通过考察P-ERK(phosphorylated extracellular signal kinase 5)表达水平考察ERK5激活情况.结果 RT-PCR显示实验组组MEK5 mRNA和ERK5 mRNA表达水平均随时间呈逐渐增加的动态变化规律,且与假手术组相比表达水平明显增加;Western blotting显示实验组MEK5表达水平随时间先增加后回落,ERK5表达水平随时间逐渐增加,P-ERK表达水平随时间增加.结论 ERK5表达水平与脊髓损伤修复过程呈正相关,ERK5的促组织细胞分裂增殖的功能可能有助于脊髓损伤加速修复.     

微小RNA与牙周炎

近十年,一类非编码蛋白的小RNA分子——微小RNA (miRNAs)证实参与免疫细胞发育以及多种疾病如肿瘤、炎症等生理和病理过程.而牙周炎作为危害人类口腔健康的常见慢性炎症,其发病机制的研究尚有不确切之处,也未能找到十分有效的治疗方法.近年,学者开始对牙周炎及miRNAs两者间的关系开展研究,以探索miRNAs参与牙周炎的发病机制.本文根据miRNAs与牙周炎研究的最新进展,就其在牙周组织及牙槽骨组织中异常表达及可能机制两方面作一综述.