靶向ADAM17基因siRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖能力的影响

目的:探讨靶向抑制ADAM17基因对雄激素非信赖性前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。方法:应用ADAM17 siRNA转染PC-3细胞后,通过RT-PCR、Western印迹方法分别检测ADAM17 mRNA和蛋白表达变化;MTT、BrdU掺入法检测下调ADAM17对PC-3细胞的增殖和DNA合成能力的影响;流式细胞术检测ADAM17 siR-NA对PC-3细胞细胞周期的影响;Western印迹检测下调ADAM17对PC-3细胞增殖相关基因表达的影响。结果:两对ADAM17 siRNAs均可有效地降低PC-3细胞ADAM17 mRNA和蛋白的表达;MTT结果显示与对照组(0.80±0.51)相比,两对ADAM17 siRNAs均可显著抑制细胞的生长(0.43±0.57、0.44±0.64,P均<0.05);Br-dU掺入实验显示与对照组(0.79±0.72)相比,ADAM17 siRNAs均能显著下调DNA的合成能力(0.48±0.43、0.54±0.59,P<0.05);流式细胞术结果显示,与对照组(41.38±1.53)%相比,ADAM17 siRNAs可显著增加G1期细胞数量[(61.83±2.41)%、(59.78±1.92)%,P均<0.05]、降低S期细胞数量[从(33.51±1.47)%减少到(23.64±2.56)%、(25.24±1.86)%,P均<0.05],同时伴随着cyclin D1蛋白的表达下降而p21蛋白的表达升高。结论:ADAM17 siRNA可以通过下调cyclin D1、上调p21的表达而抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,ADAM17可能成为前列腺癌基因治疗的靶点。     

微小RNA-23a调节前列腺癌细胞骨架蛋白的分子机制

目的 探讨微小RNA-23a(miR-23a)影响前列腺癌细胞骨架迁移及侵袭行为的分子机制.方法 PC-3前列腺癌细胞转染siPAK6、miR-23a模拟物,48 h后以共聚焦显微镜观察细胞骨架的改变;Western blot法检测LIMK1、磷酸化LIMK1( p-LIMK1)、丝切蛋白(cofilin)和磷酸化丝切蛋白(p-eofilin)蛋白的表达.结果 转染siPAK6组及miRNA-23a组PC-3细胞骨架的应力纤维均明显减少,肌动蛋白形态皱缩.Western blot检测显示转染siPAK6组的p-LIMK1、p-cofilin的表达分别下降75％、80％(P＜0.01),而LIMK1、cofilin表达量无明显变化(P＞0.05);转染miRNA-23a组的p-LIMK1、p-cofilin的表达分别下降60％、70％ (P ＜0.01),LIMK1、cofilin的表达量无明显变化(P＞0.05).结论 miR-23a可通过p21活化激酶6(PAK6)-LIMKl-cofilin信号通路,影响前列腺癌细胞骨架的重构,抑制癌细胞迁移及侵袭能力.     

转化生长因子-β1及p21对乳腺癌干细胞的作用

目的 观察转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF7/ADM中乳腺癌干细胞富集的作用,比较乳腺癌干细胞和MCF7/ADM中 p21 基因和蛋白水平的表达差异.方法 流式细胞仪检测阿霉素耐药乳腺癌细胞(ADM细胞)、乳腺细胞球培养法富集的乳腺癌细胞(SC细胞)及加入TGF-β1细胞因子诱导的乳腺癌细胞(SC-T细胞)中乙醛脱氢酶1(ALDH1)阳性细胞比例;比较上述3组细胞微球形成能力差异;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测3组细胞中p21基因及蛋白水平的表达差异.结果 ADM组、SC组及SC-T组中ALDH1阳性细胞比例分别为8.49％、14.94％及23.44％;细胞微球形成率分别为5.29％、11.67％、23.13％;3组细胞中p21 mRNA及蛋白水平的表达均逐渐升高.结论TGF-β1能诱导乳腺癌干细胞的富集并使其具有更强的自我更新能力.P21在乳腺癌干细胞中高表达.     

生物信息学在三阴性乳腺癌mi RNA生物标志物筛选中的应用

目的：通过医学癌症数据库（TCGA）和基因表达数据库（GEO）分析三阴性乳腺癌（TNBC）中差异表达微小RNA（miRNAs）并预测其靶基因,探讨其生物学功能和分子机制,寻找TNBC预后相关靶点。方法：下载TCGA数据库中343项关于乳腺癌组织与癌旁组织相关的miRNAs表达数据,筛选乳腺癌与癌旁组织中差异表达的miRNAs;GEO数据库验证miRNAs在TNBC细胞系的26种细胞株中的表达以及TNBC患者经过化疗前后血清中miRNAs的变化;通过基因本体（GO）功能注释及京都基因和基因组百科全书（KEGG）信号通路富集、蛋白质互作网络分析候选miRNAs的靶基因功能。结果： TCGA数据库,在乳腺癌组织中的miR-21-5p表达水平明显高于相邻癌旁组织（logFC=5.557,P<0.01）;GEO数据库筛选,miR-21-5p在TNBC细胞系中表达水平明显升高,在26种TNBC细胞株中超过20种细胞株相对表达水平>70 000,TNBC患者经联合化疗后miR-21-5p的表达水平明显降低（logFC=-5.07,P<0.01）;GO分析,miR-21-5p主要在DNA复制、转录以及血管重构等方面发挥调控作用;KEGG富集分析,miR-21-5p主要通过促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）和转化生长因子β（TGF-β）等通路影响TNBC的发生发展。结论： miR-21-5p在TNBC组织中表达上调,在TNBC进展中发挥正调控作用,可能成为鉴定TNBC相关预后程度的关键生物学标志物。DUSP8等可能作为miR-21-5p的靶基因参与调控TNBC的发生发展。     

TP化疗方案联合康莱特治疗宫颈癌的效果及对血清CYFRA21-1、CK19水平的影响

Objective: To study the effect of TP chemotherapy regimen combined with Kanglaite in the treatment of cervical carcinoma and its effect on the serum level of CYFRA21-1 and CK19. Methods: 74 patients with cervical carcinoma were admitted in our hospital from October 2015 to May 2017 and were randomly divided into observation group and control group according to random digital table method, 60 cases in each group. The control group was treated with TP chemotherapy and the observation group was treated with TP chemotherapy regimen combined with Kanglaite. The clinical efficacy, the quality of life, serum CYFRA21-1 and CK19 levels and adverse reactions were compared between the two groups before and after treatment. Results: After treatment, the clinical effective rate(83.78%) in the observation group was significantly higher than that of control group (62.16%), u=4.390,P=0.036, with statistical significance(P<0.05). The KPS scores of the two groups were significantly decreased, and the KPS scores in the observation group were significantly higher than those in the control group(u=6.538,P=0.000). After treatment, the serum levels of CYFRA21-1 and CK19 were significantly decreased in both groups, and the levels in the observation group were significantly lower than those in the control group (u = 6.659, 8.647, P=0.000). The adverse reactions were mainly myelosuppression, gastrointestinal reaction and phlebitis. The incidences of myelosuppression and gastrointestinal reaction of grade III-IV in the observation group were significantly lower than that in the control group, while the incidence of phlebitis was significantly higher in the observation group than in the control group ((u = 2.160, 2.000, 4.16, P = 0.030, 0.045, 0.041, respectively). Conclusion: The effect of TP chemotherapy regimen combined with Kanglaite on cervical carcinoma is significantly. It can effectively reduce serum CYFRA21-1 and CK19 levels, improve the quality of life and safety, which is worth popularizing in clinical application.     

血清miRNA-21和miRNA-192表达与糖尿病肾病的相关性研究

［摘要］ 目的探讨血清miRNA-21和miRNA-192表达与糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的相关性。 方法选择2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）患者（DM组）38例、DN患者（DN组）27例及同期体检健康者(对照组)30例,采用实时荧光定量PCR（real time-PCR,RT-PCR）技术检测血清miRNA-21和miRNA-192表达,采用PHILIPS-IU22彩色多普勒超声诊断仪检测肾主动脉（main renalartery,MRA）收缩期的峰值速度（peak systolic velocity,PSV）及阻力指数（resistance index,RI）等血流相关参数,比较分析以上指标的变化与DN的关系。 结果DN组和DM组RI明显高于对照组,DN组RI明显高于DM组,DN组PSV明显低于DM组和对照组(P＜0.05)。DN组和DM组miRNA-21表达高于对照组,miRNA-192低于对照组,DN组miRNA-21表达高于DM组,miRNA-192低于DM组(P＜0.05)。DN组血清miRNA-21与miRNA-192表达呈负相关（r=-0.837,P＜0.05）;miRNA-21表达与RI水平呈正相关（r=0.812,P＜0.05）,与PSV水平呈负相关（r=-0.793,P＜0.05）;miRNA-192与RI水平呈负相关（r=-0.807,P＜0.05）,与PSV水平呈正相关（r=0.782,P＜0.05）。DM组血清miRNA-21与miRNA-192表达呈负相关（r=-0.816,P＜0.05）;miRNA-21与RI水平呈正相关（r=0.714,P＜0.05）;miRNA-192表达与RI水平呈负相关（r=-0.745,P＜0.05）。 结论血清miRNA-21和miRNA-192表达与DN的发生发展有相关性,检测miRNA-21和miRNA-192表达可为DN的早期发现及治疗提供基因依据。     

成纤维细胞生长因子21对缺氧复氧心肌细胞的保护作用及机制研究

【摘要】 目的 探讨成纤维细胞生长因子21（FGF21）对缺氧复氧（H/R）心肌细胞的保护作用及对PI3K/AKT通路的影响。方法 重组腺病毒载体Ad FGF21诱导原代心肌细胞过表达FGF21。腺病毒转染心肌细胞后构建H/R损伤模型（3h缺氧联合3h复氧）。实验分为对照组（Con组）、H/R组、H/R+Ad GFP组、H/R+Ad FGF21组4组。心肌细胞存活率评估细胞损伤程度;SOD/MDA检测联合DHE荧光染色评估氧化应激反应（ROS）;流式细胞术评估细胞凋亡;Western blot检测相关蛋白水平。在机制探讨实验中给予PI3K/AKT抑制剂（LY294002）进行干预。结果 与Con组相比,H/R损伤后FGF21蛋白表达显著下调,并伴随心肌细胞活性降低、ROS与凋亡反应激活。腺病毒介导的心肌细胞过表达FGF21能够明显抑制H/R损伤,表现为细胞活力、ROS与凋亡反应均有不同程度改善。FGF21心肌细胞过表达能够增加PI3K/AKT磷酸化水平,而抑制PI3K/AKT通路后FGF21过表达介导的细胞保护功能被逆转。结论 FGF21主要通过PI3K/AKT依赖性途径改善心肌细胞H/R损伤。     

胰腺导管腺癌中microRNA-21与TGF-β1信号通路相关

目的：对胰腺导管腺癌样本进行基因分析,筛选与胰腺导管腺癌相关的microRNA(miRNA),并初步分析目标miRNA与胰腺癌转化生长因子-β1(TGF-β1)信号通路的相关性。方法：收集在海南省中医院住院的胰腺导管癌患者术前外周静脉血血清标本19份,健康体检人群的外周静脉血血清标本21份作为非胰腺导管癌对照组。利用GCBI(Gene-Cloud Biotechnology Information)数据平台筛选与胰腺导管腺癌样本有关的基因并对其进行生物信息学分析,将筛选出的基因作为研究对象,用real-time PCR和蛋白质印迹法验证该基因在胰腺导管腺癌中的表达。通过改变胰腺导管腺癌细胞中该基因的表达水平观察其与TGF-β1之间的关系。结果：通过聚类分析和基因功能富集分析筛选出miRNA-21为胰腺导管癌相关基因。MiRNA-21在胰腺导管腺癌患者体内高表达。在miRNA-21过表达的PANC-1细胞中,TGF-β1表达受到抑制;但当miRNA-21的表达受到抑制时,TGF-β1的表达明显上升。结论：MiRNA-21在胰腺导管腺癌患者体内高表达,可调控TGF-β1的表达,从而参与胰腺导管腺癌的发生发展。     

血清 CEA、NSE、SCC-Ag与 CYFRA21-1联合检查对肺癌的诊断价值

目的：探讨癌胚抗原（carcinoembryonic antigen ,CEA）、神经元特异度烯醇化酶（neuron-specific enolase degree , NSE）、磷状上皮细胞癌抗原（ squamous cell carcinoma antigen ,SCC-Ag）与细胞角蛋白19片段（ cytokeratin 19 fragment ,CY-FRA21-1）联合检查对肺癌的诊断价值。方法选取肺癌68例,同时选取良性肺疾病70例和健康体检人员90名作为对照组和健康组,分别应用全自动发光免疫分析仪开展血清检查,记录三组样本血清中的CEA、NSE、SCC-Ag与CYFRA21-1的含量,并进行比较分析。结果肺癌组的血清CEA、NSE、SCC-Ag与CYFRA21-1含量均显著高于其他两组,组间比较差异有统计学意义（ P＜0．05）。单一检测的特异性较高,与联合诊断比较无统计学差异,但联合诊断的灵敏度为80．9％,准确度为83．3％,均显著高于单一检测,差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论血清CEA、NSE、SCC-Ag与CYFRA21-1的联合检查能有效提高肺癌诊断的敏感性和准确度,具有较好的诊断价值。     

阴茎癌及其癌旁组织中癌基因ras产物p21蛋白的表达

目的探讨阴茎癌及其癌旁组织中癌基因ｒａｓ产物ｐ２１蛋白表达的临床意义。方法用免疫组化ＡＢＣ法检测３２例阴茎癌、３２例癌旁组织和１６例正常阴茎组织的癌基因ｒａｓ产物ｐ２１蛋白。结果２８例癌组织,８例癌旁组织中有ｐ２１蛋白表达,而１６例正常阴茎组织中ｐ２１阴性。ｐ２１蛋白和病理分级、临床分期呈正相关表达,即随着分级和分期的上升阳性增强,并且癌旁组织ｐ２１蛋白表达阳性者都显示了早期复发和转移的不良预后。结论ｐ２１蛋白可作为阴茎癌恶性程度及预后评估的参考指标。