ARNT调控低氧通路促进小鼠骨骼肌再生的实验研究

目的　探索芳香烃受体核转运子（aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator,ARNT）对骨骼肌再生的调控作用,为提高老龄人口骨骼肌再生能力提供方向。 方法　构建小鼠骨骼肌冰冻损伤模型,观察幼龄鼠与老龄鼠、骨骼肌特异性ARNT基因敲除小鼠与野生鼠、加入低氧通路激活剂（ML228）与DMSO老龄鼠间骨骼肌再生能力差别;分析ARNT、低氧通路、肌再生因子表达含量及小鼠下肢血流差异。 结果　衰老导致骨骼肌再生能力减弱;敲除ARNT基因后,小鼠骨骼肌的再生能力显著下降,低氧通路因子及相关基因表达下调;ML228可使受损的骨骼肌再生能力得到恢复。 结论　衰老引起的ARNT含量下降抑制低氧通路是导致老龄骨骼肌再生能力降低的主要原因。低氧通路激活剂可改善受损骨骼肌的再生能力,有望成为药物重塑衰老骨骼肌再生能力的新靶点。     

基于通路活性的抗癌药物敏感性预测

通路数据库是系统分析基因功能,联系基因组信息和功能信息的知识库,通路作为基因功能集合能够提高预测模型的预测能力和解释能力。本研究通过整合KEGG通路数据和CCLE基因表达谱推断通路活性并结合药物数据建立药物敏感性预测模型。在推断通路活性时,并没有把通路简单地作为基因集合,而是选择通路中的高连接度基因,取高连接度基因的平均表达水平作为通路活性值,合并每个通路的活性向量得到通路活性矩阵,然后输入到弹性网进行药物敏感性预测。实验结果表明,对于大多数药物,使用基于通路中高连接度基因的计算分析方法更有利于药物敏感性预测,同时能识别出更多与药物相关基因的通路。     

薯蓣皂苷通过下调Notch 1信号通路抑制甲状腺癌SW579细胞增殖与侵袭

目的 观察薯蓣皂苷对甲状腺癌细胞SW579细胞的抑制作用并探讨其可能的作用机制.方法 体外常规培养甲状腺癌SW579细胞,将细胞分为对照组、不同浓度薯蓣皂苷组(10、20、30、40、50μM),CCK-8方法检测各组甲状腺癌SW579细胞存活率;随后将细胞分为对照组、薯蓣皂苷(30μM)组、Jagged 1组(5mg/L)组及薯蓣皂苷+Jagged 1组.EDU染色观察各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Real-time PCR检测凋亡基因Bax、Bcl-2及Caspase-3基因表达;Transwell实验观察各组细胞侵袭能力;Western blot检测Notch 1、Jagged 1及Hes 1蛋白表达.结果 薯蓣皂苷能抑制SW579细胞活性,抑制其增殖;能够促进SW579细胞凋亡,增加Bax/Bcl-2比例,增加Caspase-3基因表达;并抑制细胞侵袭;薯蓣皂苷还可下调Notch 1、Jagged1及Hes1蛋白表达(P＜0.05);并且薯蓣皂苷部分逆转了Jagged 1的作用.结论 薯蓣皂苷对甲状腺癌细胞SW579细胞具有一定的抑制作用,其作用机制可能在一定程度上与抑制Notch 1信号通路有关.     

ZBP-89通过HIF-1α/Notch1通路对肝癌干细胞干性的调控作用

目的 探究ZBP-89(Zinc-binding protein-89)通过HIF-1α/Notch1通路对肝癌干细胞干性的调控作用.方法 构建ZBP-89过表达慢病毒载体(Len-ZBP-89)并进行慢病毒包装,微球体培养法富集肝癌干细胞,流式细胞术检测细胞中EpCAM、CD133的表达,CoCl2(HIF-1α激活剂)处理肝癌干细胞,RT-PCR检测细胞中ZBP-89、HIF-1α和Notch1mRNA表达,Western blot检测细胞中ZBP-89、HIF-1α、Notch1、CD44、CD133和EpCAM蛋白表达,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,光学显微镜观察特征性肿瘤球体的形成.结果 Len-ZBP-89慢病毒包装成功,病毒滴度为1.32×109 TU/mL;肝癌细胞PLC/PRF/5中ZBP-89 mRNA和蛋白表达水平下调,HIF-1α和Notch1 mRNA和蛋白表达水平上调;PLC/PRF/5细胞成功富集肝癌干细胞PLC/PRF/5.C,PLC/PRF/5.C中EpCAM、CD133的表达水平均上调;Len-ZBP-89可下调PLC/PRF/5.C细胞中HIF-1α、Notch1、CD133、CD44和EpCAM的蛋白表达,下调细胞迁移、侵袭能力和特征性肿瘤球体克隆数量;CoCl2(HIF-1α激活剂)可上调PLC/PRF/5.C细胞中HIF-1α、Notch1、CD133、CD44和EpCAM的蛋白表达,上调细胞迁移、侵袭能力和特征性肿瘤球体克隆数量(P＜0.05);CoCl2处理可逆转Len-ZBP-89对PLC/PRF/5.C干性的抑制作用.结论 过表达ZBP-89通过抑制HIF-1α/Notch1通路抑制肝癌干细胞干性.     

姜黄素通过上调PPARγ/c-Ski信号通路在大鼠乙型病毒性肝炎模型中发挥保护作用

目的 探讨姜黄素在乙型病毒性肝炎中发挥抗纤维化作用的相关机制.方法 制备SD大鼠乙型病毒性肝炎模型,将SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(HBV组)和姜黄素治疗组(Curcumin组);HE染色法检测各组大鼠肝脏的病理损伤情况;ELISA法检测血清中丙氨酸转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(Aspartateaminotransferase,AST)、透明质酸(Hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(Laminin,LN)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)的水平变化;实时荧光定量PCR法对肝脏中HBV-DNA的表达水平进行检测;Western blot法检测肝脏中的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferatorsactivated receptor γ,PPAR-γ)、c-Ski(cellular Sloan-Kettering institute)、转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)、Smad2、p-Smad2、Smad3和p-Smad3的表达状况.结果 姜黄素可以显著改善肝组织损伤,降低肝功能损伤的相关指标和炎症因子的水平,抑制肝脏组织中HBV-DNA的表达,促进PPARγ、c-Ski的表达,抑制TGF-β、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3的表达.结论 姜黄素在乙型病毒性肝炎中具有显著的抗纤维化的作用,其机制可能是通过激活PPAR-γ、c-Ski的表达,抑制TGF-β/Smads信号通路的活化来实现的.     

基于JAK2-STAT3信号通路探讨硫酸羟氯喹治疗佐剂性类风湿性关节炎大鼠的作用机制

目的 观察硫酸羟氯喹对胶原诱导性关节炎大鼠(CIA)的治疗作用及其可能的作用机制.方法 24只SPF级SD大鼠,随机分为对照组、模型组及硫酸羟氯喹组,每组8只.给药前(0 d)和给药10、20及30 d后进行关节炎指数评分;HE染色观察各组大鼠膝关节滑膜病理损伤;ELISA检测大鼠血清中IL-1β、TNF-α及IL-6水平;Western blot检测大鼠滑膜组织中Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达;TUNEL染色观察大鼠膝关节滑膜细胞凋亡情况;Western blot检测大鼠滑膜组织中JAK2、p-JAK2、STAT3及p-STAT3蛋白表达.结果 硫酸羟氯喹显著降低大鼠关节炎指数评分(P＜0.05);减轻大鼠膝关节滑膜病理损伤(P＜0.05);降低血清中IL-1β、TNF-α及IL-6水平(P＜0.05);增加大鼠滑膜组织中Bax、Caspase-3蛋白,降低Bcl-2蛋白表达,抑制大鼠滑膜组织细胞凋亡(P＜0.05);此外,硫酸羟氯喹亦降低了大鼠滑膜组织中p-JAK2与p-STAT3蛋白表达(P＜0.05).结论 硫酸羟氯喹对胶原诱导性关节炎大鼠具有一定的治疗效应,其作用机制可能与抑制JAK2-STAT3信号通路相关.     

胰岛素样生长因子2通过磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路调控人卵巢颗粒细胞增殖的机制

目的 检测胰岛素样生长因子2（IGF2）对人卵巢颗粒细胞（KGN细胞）增殖的调控作用及作用机制。 方法 将体外培养的KGN细胞,分不同浓度IGF2处理组（对照组和25 μg/L、50 μg/L、100 μg/L IGF2组)和磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路干预组（以LY294002干预处理将细胞分对照组、100μg/L IGF2组、LY294002组和IGF2+LY294002组）。采用MTS和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)法检测IGF2对KGN细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞培养液上清中雌激素、孕激素的含量,Western blotting法检测各组胰岛素样生长因子受体1（IGF1R）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化的蛋白激酶B（p-Akt）及CYP19A1蛋白表达。 结果 随着IGF2的浓度梯度增高,KGN细胞的增殖率及雌激素、孕激素的分泌量逐渐升高,以 100 μg/L IGF2处理组的细胞增殖率和激素水平最高 (P<0.01),而抑制PI3K/Akt信号通路,细胞增殖率和激素的分泌量均明显降低(P<0.01);Western blotting结果显示,IGF1R、p-Akt及CYP19A1 蛋白表达水平随着IGF2的浓度梯度逐渐升高(P<0.05),而干预PI3K/Akt信号通路可影响上述蛋白的表达,与对照组相比,IGF2组和IGF2+ LY294002组IGF1R及p-Akt蛋白表达均明显升高（P<0.01）,CYP19A1在IGF2组明显升高（P<0.01）,LY294002组p-Akt及 CYP19A1蛋白明显降低（P<0.05）,IGF1R的表达差异无统计学意义。与IGF2组相比,IGF2+LY294002组p-Akt及CYP19A1蛋白表达降低（P<0.01）,IGF1R的表达差异无统计学意义,LY294002组p-Akt 及CYP19A1蛋白表达量均显著降低（P<0.01）。 结论 IGF2 可能由IGF1R介导通过PI3K/Akt 信号通路促进人卵巢颗粒细胞的增殖及分泌功能。     

人参皂苷Re对重症急性胰腺炎小鼠小肠黏膜的影响及调控机制

目的 探讨人参皂苷Re通过调控 Janus激酶2/信号转导子与转录激活子3（JAK2/STAT3）通路对重症急性胰腺炎（SAP）小鼠小肠黏膜的影响及作用机制。 方法 48只小鼠分为对照组、SAP组、SAP+人参皂苷Re组和SAP+人参皂苷Re+LY2784544组（n=12）。通过腹腔注射雨蛙肽溶液（禁食12 h后,100 μg/kg × 6次,注射间隔60 min）的方法建立SAP模型。腹腔注射人参皂苷Re（4 mg/kg,每日1次,连续7 d）。通过腹腔注射 12.7 mg/kg LY2784544来抑制JAK2/STAT3通路。检测各组胰腺指数、血清淀粉酶和炎性因子水平;检测D-乳酸和FITC-D水平分析小肠黏膜屏障功能;HE染色观察胰腺组织和小肠黏膜组织损伤情况;Western blotting检测小肠黏膜组织中凋亡蛋白Bax和Bcl-2的水平;Real-time PCR和Western blotting检测胰腺组织和小肠黏膜组织JAK2/STAT3通路水平。 结果 SAP组小鼠胰腺指数、血清淀粉酶、白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）、FITC-D、D-乳酸、Bax蛋白水平、胰腺组织和小肠组织中JAK2和STAT3 mRNA和蛋白水平均显著高于对照组,而Bcl-2蛋白显著低于对照组（P<0.05）。SAP+人参皂苷Re组小鼠Bcl-2蛋白显著高于SAP组,其余指标显著低于SAP组（P<0.05）。SAP+人参皂苷Re+LY2784544组的Bcl-2蛋白显著高于SAP+人参皂苷Re组,其余指标显著低于SAP+人参皂苷Re组（P<0.05）。 结论 人参皂苷Re可能通过抑制JAK/STAT通路缓解炎性反应减轻SAP模型小鼠的胰腺损伤, 并通过抑制细胞的凋亡保护小肠黏膜屏障。     

匹配仪器信号的中医证候测量变量及计量模型

目的 提出一种简单明确且可扩展的"中医理论-检测设备"对接方法,建立可以被现代科技测量的中医工程概念体系,以解决中医理论体系和现代科学技术之间对接难的问题.方法 通过中医诊断学相关文献回顾,梳理中医病因、病机、病位、病性等中医基础理论和诊断学概念,以及经络腧穴等针灸概念,选择合适的测量客体,并建立测量变量体系.结果 将中医证候的仪器测量客体定义为最小测量单元,用中医语言描述为测量元素,用工程学语言描述为测量变量.测量变量各自逻辑独立、边界清楚,区分测量变量和量值.以现代中医诊断学中"证素"概念为基础,系统整理文献中的中医证候变量类型,构建了定位变量、生理变量、病机变量、流派测量变量和专科测量变量五类测量变量的体系,并制定出各测量变量的计量规则.结论 仪器测量信号通过测量元素以及证候的接口与中医基础理论体系可以对接.     

淫羊藿总黄酮调控Wnt/β-catenin信号通路对去卵巢大鼠抗骨质疏松作用研究

目的 通过淫羊藿总黄酮(TFE)对去卵巢大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路及腰椎骨和股骨生物力学性能影响研究,探讨TFE对去卵巢大鼠抗骨质疏松的可能机制.方法 选用40只90天龄的SPF级SD雌性大白鼠,随机分为4组:对照组、去卵巢组(OVX)组、去卵巢+己烯雌酚(DES)组、去卵巢+淫羊藿总黄酮(TFE)组.实验持续12周后处死全部大鼠,取腰椎骨、股骨分别测量生物力学参数及骨密度.免疫蛋白印迹法检测各组大鼠胫骨骨皮质区p-GSK3-β(thr9)、RANKL、OPG、β-catenin蛋白表达水平.结果 与对照组比较,OVX组大鼠股骨、腰椎骨的生物力学性能及骨密度下降(P＜0.05);DES组、TFE组股骨和腰椎骨的生物力学性能和骨密度较去卵巢OVX组明显改善(P＜0.05);两治疗组的组间差异无统计学意义(P＞0.05).免疫蛋白印迹法提示去卵巢大鼠分别加用TFE、DES治疗后,胫骨蛋白β-catenin、OPG表达上调,p-GSK3-β(thr9)、RANKL表达下调.结论 淫羊藿总黄酮能够改善去卵巢大鼠的骨生物力学性能,上调Wnt/β-catenin信号通路,从而改善骨质疏松.