异黄酮对PC-3细胞凋亡的诱导作用

目的 :　通过观察染料木素 (genistein,GS)、大豆甙元 (daidzein,DA)和黄豆黄素(glycitein,GL)对前列腺癌细胞 (PC- 3 )凋亡的影响 ,探讨通过膳食途径预防前列腺癌发生危险性的可行性。方法 :　将 PC- 3细胞在 RPMI1 6 4 0培养液 (含 1 0 %小牛血清 )中采用开放式单层贴壁培养。实验设溶剂对照及三种受试物各三个剂量组 ,采用流式细胞术 ,DNA凋亡片段凝胶电泳和细胞 HE染色法分析三种常见异黄酮类物质对 PC- 3细胞凋亡的影响。结果 :　与对照组相比 ,流式细胞仪分析结果表明 ,5 0μ mol/L GS、75μ mol/L DA和 75μ mol/L GL对 PC- 3细胞处理 72 h,二倍体细胞 (G1期细胞 )相对减少 ,亚二倍体细胞峰 (即细胞凋亡率 )逐渐增多 ,即凋亡细胞比例逐渐增多 ;DNA凋亡片段凝胶电泳和细胞苏木素染色结果也显示 ,三种受试物能够诱导 PC- 3细胞凋亡 ,且这种作用存在剂量 -效应关系。结论 :　异黄酮类化合物染料木素、大豆甙元和黄豆黄素均具有诱导 PC- 3细胞凋亡的作用 ,这一结果提示 ,该类物质是可通过诱导细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用的。     

葛根素对抗H2O2引起血管平滑肌细胞凋亡及坏死

目的：研究葛根素对过氧化氢引起无血清培养的小牛主动脉血管平滑肌细胞凋亡和坏死的影响。方法：通过体外细胞培养，以噻唑兰（MTT）法测定细胞存活率，用流式细胞术检测细胞DNA含量及凋亡细胞百分率；DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA断裂程度。结果：H2O2诱导无血清培养的平滑肌细胞凋亡，葛根素可显著降低平滑肌细胞中凋亡细胞百分率，并减少凋亡细胞DNA断裂，同时也减少其引起的平滑肌细胞坏死。结论：葛根素可对抗H2O2引起的无血清培养的血管平滑肌细胞凋凋亡及坏死。     

无血清培养人肝癌细胞增生率的变化和bFGF在细胞中的表达

采用无血清培养体系 ,研究肿瘤细胞自分泌调控机制。将人肝癌细胞培养在无血清无外源分裂因子培养基中 ,采用细胞原位计数法和免疫组织化学染色法 ,观察不同时相人肝癌细胞增生率的变化以及碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的表达情况。结果 :人肝癌细胞生长良好 ,其增生速度与其分泌的bFGF量成正比。提示 :肝癌细胞在无外源生长因子的条件下通过分泌bFGF ,以自分泌和旁分泌的方式作用于自身和相邻细胞 ,促进细胞生长和增生。     

骨髓细胞移植上调血管内皮生长因子及其受体的表达并改善缺血心脏功能

目的：通过骨髓细胞移植对心肌梗死大鼠模型血管内皮生长因子及其受体表达的影响，探讨骨髓细胞移植改善缺血心脏功能的可能机制。方法：利用左前降支冠状动脉结扎术制备大鼠心肌梗死模型，然后行异体骨髓细胞移植；分别于术后1d，3d，7d，14d和28d取材；利用免疫荧光和RT—PCR技术分析细胞移植对血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Flk一1)表达的影响和移植细胞的分化情况；通过免疫组化计算血管数量；应用血流动力学检测大鼠心脏功能在术后各时间点的变化。结果：VEGF和Flk-1在移植组动物的心肌梗死区残存细胞、梗死周边区细胞以及部分移植细胞内表达。移植组VEGF和Flk-1的mRNA表达明显高于对照组。分别于术后3d和14d达到高峰，以后逐渐减弱。术后7d，14d和28d移植组血管数量较同期对照组明显增加，移植组心脏功能较对照组明显改善。术后14d可在部分移植细胞中检测到心肌细胞或血管内皮细胞特异性蛋白的表达。结论：骨髓细胞移植通过上调移植细胞及受者内源性VEGF和Flk—1的表达，促进血管新生，进而改善缺血心脏功能。     

干细胞动员对骨创伤大鼠免疫功能的保护作用

目的：观察自体干细胞动员对骨创伤大鼠的免疫功能的保护作用，为战创伤后的免疫抑制及继发性感染、系统性炎症反应等治疗提供依据。方法：挤压折断法复制大鼠双后肢股骨骨折模型，于致伤后0、24、48h连续给模型动物肌肉注射GM—CSF20μg／kg，致伤后72h细胞增殖法检测T、B淋巴细胞活性，ELISA法检测血清IL-1、IL-2、IFN-7、TNF—α浓度，自动系列化分析法检测C3、CA、IgM、IgG浓度，称重法观察脾重与体重的比例变化。结果：股骨骨折模型大鼠致伤后72h，GM—CSF动员骨髓干细胞组大鼠的T、B淋巴细胞活性和血清IFN-γ、IL-2浓度高于对照组（P〈0．01），IL-1、TNF—α浓度低于对照组（P〈0．01），血清C3、CA、IgM、IgG浓度及脾／体重比值高于对照组（P〈0．01）。结论：GM—CSF动员自体干细胞动员对大鼠骨创伤诱导的免疫功能抑制具有保护作用。     

Smoking delays chondrogenesis in a mouse model of closed tibial fracture healing.

Smoking delays the healing process and increases morbidity associated with many common musculoskeletal disorders, including long bone fracture. In the current study, a murine model of tibial fracture healing was used to test the hypothesis that smoking delays chondrogenesis after fracture. Mice were divided into two groups, a nonsmoking control group and a group exposed to cigarette smoke for 1 month prior to surgical tibial fracture. Mice were euthanized at 7, 14, and 28 days after surgery. The outcomes measured were immunohistochemical staining for type II collagen protein expression as a marker of cartilage matrix and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) staining to measure proliferation at the site of injury. Toluidine blue staining and histomorphometry were used to quantify areas of cartilaginous and noncartilaginous fracture callus. Radiographs were analyzed for evidence of remodeling after injury. At day 7 after injury, mice exposed to cigarette smoke had a smaller fracture callus with less cartilage matrix compared to controls. Proliferation was present at high levels in both groups at this time point, but proliferating cells had a more immature morphology in the smoking group. At day 14, chondrogenesis was more active in smokers compared to controls, while a higher percentage of bone was present in the control animals. At day 28, X-ray analysis revealed a larger fracture callus remaining in the smoking animals. Together, these findings show that the chondrogenic phase of tibial fracture healing is delayed by smoking. This study represents, to our knowledge, the first analysis of molecular and cellular mechanisms of healing in a smoking mouse fracture model.     

应用抑制消减杂交和cDNA表达谱芯片筛选肝星形细胞持续活化的相关基因

目的：利用抑制消减杂交（suppression subtractive hybridization,SSH）和cDNA表达谱芯片筛选早期活化的肝星状细胞与大鼠正常肝脏组织、轻度肝纤维化组织、重度肝纤维化组织中差异表达的基因.方法：从SSH构建的大鼠轻度和重度肝纤维化中两个差异cDNA文库中挑选1 000条上调显著的基因,与正常大鼠4 136条基因克隆制作成一张芯片,筛选持续期活化的肝星状细胞相关基因.结果：获得与HSC持续活化相关的上调基因633条,下调基因715条,其中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶（SGK）在正常大鼠基因克隆和2、8周SSH上调差异基因中均呈上调信号.结论：联合应用SSH和cDNA表达谱芯片是筛选和鉴定不同样本中差异表达基因的快速、经济和有效方法;SGK可能作为多种细胞信号传导通路和细胞磷酸化级联反应的一个功能性交汇点,参与了肝星状细胞的早期活化和信号传导.     

小檗碱对兔颈动脉粥样硬化中内膜增生和巨噬细胞趋化作用的影响

目的观察小檗碱对家兔颈动脉粥样硬化的内膜中膜比和巨噬细胞变化的影响。方法24只雄性日本大耳白兔随机分为3个试验组,正常组每天肌肉注射生理盐水,普通饲料喂养,对照组高脂喂养,1周后行颈动脉内膜空气干燥术并每日肌肉注射生理盐水,小檗碱干预组高脂喂养,1周后行颈动脉内膜空气干燥术并肌肉注射小檗碱,5周时取手术侧的颈动脉做弹力纤维染色,计算内膜中膜比;巨噬细胞免疫组化检测巨噬细胞在颈动脉粥样硬化病变中的变化,计算巨噬细胞的阳性率。结果对照组内膜厚度明显增加,中膜萎缩变薄,经计算I/M为1.20±0.007,小檗碱组的I/M为0.65±0.008。两组间有显著差异(P<0.01);巨噬细胞免疫组化染色对照组内膜下和中膜有大量巨噬细胞,小檗碱干预组内膜和中膜下也可以见有巨噬细胞沉积,通过计算巨噬细胞阳性率,小檗碱干预组的巨噬细胞阳性率明显小于对照组(P<0.01)。结论小檗碱可以降低家兔颈动脉粥样硬化中的血管内膜厚度、减少粥样斑块中的巨噬细胞数目,从而干预颈动脉粥样硬化的形成。     

前列腺癌组织中性激素受体表达的分析

目的:定性分析雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)在良性前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PCa)组织中的阳性表达,为激素治疗PCa和预后判断提供一定的依据。方法:采用免疫组化DAKO Envision二步法,分析30例BPH与32例PCa标本中AR、ER、PR的阳性表达情况。结果:AR、ER、PR阳性数BPH组分别为22、10、6例;PCa组分别为18、14、2例,两组差异无显著性。随访30例PCa患者术后的生存期表明:AR表达阳性者平均生存时间为6.41年,AR阴性者为4.28年,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论:BPH和PCa患者在性激素受体表达上的差异无显著意义;PCa患者中AR表达阳性者平均生存时间长于AR阴性者,后者的预后较差,对AR阴性者行激素治疗效果不确定。